冠心宁片改善气滞血瘀大鼠微循环机制探究

目的：观察冠心宁片(GXN)对气滞血瘀大鼠血液流变学和浅表微循环的影响,并初步探究其与钙离子通道的作用。方法：连续14天给予大鼠低(150mg/kg)、中(300mg/kg)、高(600mg/kg)剂量的冠心宁片,1ml/kg的冠心宁注射液原液后,通过皮下注射肾上腺素和冰水浴致大鼠气滞血瘀,观察并检测大鼠多部位表皮血液灌注量,测定血液流变学和表皮血流灌注,并通过离体实验探究该作用与钙离子通道的关系。结果：给予低中高剂量的冠心宁片后,能明显改善低切、中切、高切状态下的全血黏度,降低卡松黏度;离体血管环实验显示,4mg/ml的冠心宁片能显著缓解CaCl₂引起的血管平滑肌收缩,2～8mg/ml的冠心宁片溶液可使2.5mmol/L CaCl₂预收缩的血管环显著舒张,经无钙液浓度为50mg/L肝素预处理后,8mg/ml的冠心宁片的舒张作用被显著抑制,经无钙液50mmoL咖啡因诱导后,8mg/ml的冠心宁片不能显著抑制其收缩作用。结论：冠心宁片能改善气滞血瘀大鼠的血液流变学进而改善微循环,可能通过降低细胞内钙离子浓度,抑制细胞外钙内流和内钙释放共同实现的...     

磷脂酶A2在心血管疾病动物实验中的研究

磷脂酶A2(PLA2)是一类能催化脂蛋白和膜甘油磷脂水解的酶族,主要包括分泌型磷脂酶A2(s PLA2)、胞浆型磷脂酶A2(c PLA2)、钙离子非依赖型磷脂酶A2(i PLA2)和脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)。s PLA2,c PLA2,i PLA2和Lp-PLA2与多种疾病密切相关,尤其在心血管疾病中的研究成为近年来的热点。本文就近几年PLA2在心血管疾病动物中的实验研究作一综述。     

利用CRISPR/Cas9系统快速建立APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型

目的利用CRISPR/Cas9系统构建APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠模型,为开展AD的病因治疗提供载体。方法采用CRISPR/Cas9系统,选择H11作为插入位点,将有活性的sgRNA、Cas9RNA和含有目标同源重组序列的载体显微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中,鉴定得到的F0代阳性小鼠再与C57BL/6野生小鼠交配,从而获得F1代小鼠。对鉴定得到的F1代杂合子小鼠,选择来自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代杂合子小鼠,达到性成熟后进行同胞交配,获得F2代小鼠。采用PCR方法鉴定F2代小鼠的基因型结果,采用Westernblot检测APP和PS1在F2代小鼠脑组织中的蛋白表达水平。结果27只F2代小鼠经PCR鉴定基因型,5只F2代小鼠出现约344bp和608bp的目的基因条带,表明成功构建出转入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。Westernblot检测显示APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠的APP和PS1的表达水平均明显高于同窝野生型小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统可成功构建APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。     

Bio-Plex悬浮芯片系统检测两种实验兔白介素基因的差异表达

目的 采用液相悬浮芯片系统同时测定实验兔圆小囊中IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8RA和IL-15各基因的表达情况,并对该方法进行评价。方法 利用Affymetrix的Panomics QuantiGene Plex 2.0 Assay中bDNA信号放大和多磁珠分析技术,来同时检测两种实验兔圆小囊中多重mRNA并定量。建立实验兔免疫相关白介素基因的液相悬浮芯片检测方法。结果 可同时检测IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8R和IL-15各基因的含量,并发现WHBE兔IL-15基因的相对表达量显著高于JW兔（P<0.05）,IL-1R1基因的相对表达量显著高于JW兔（P<0.01）,IL-8RA基因在WHBE兔中的相对表达量也高于JW兔（P<0.05）。结论 建立了实验兔白介素基因的液相悬浮芯片检测方法,WHBE兔的IL-15、IL-1R1和IL-8RA基因表达量较高,可能与WHBE兔独特的免疫学特性有关。     

球囊损伤联合高脂及VD3致大鼠动脉粥样硬化的方法学优化

目的 比较腹腔注射维生素D₃ (VD₃)1、2、3周后实行球囊手术对动脉粥样硬化形成的影响,探寻大鼠动脉粥样硬化造模的优化方法.方法 选取雄性SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组1、模型组2、模型组3,正常组6只,其余每组10只.对照组饲喂普通饲料,模型组1、2、3在实验开始时饲喂高脂饲料并腹腔注射VD₃ 40万IU/kg,分别于1、2、3周后行左侧颈总动脉球囊损伤手术,术后第0、2周再注射VD₃ 10万IU/kg.手术4周后,处理动物,测定TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,检测血清中炎症因子hsCRP、IL-6、TNFα含量,观察HE染色的胸主动脉病理变化,分析血管壁厚度、斑块面积(PA)、血管横截面积(CVA)及校正斑块面积(PA/CVA).结果 与正常对照组相比,模型组2、3中TC、LDL-C含量显著升高(P<0.05);模型组1、2、3的hsCRP、IL-6及TNFα水平较对照组明显升高(P<0.05),模型组3的hsCRP、IL-6及TNFα水平明显高于模型组1(P<0.05);病理观察显示模型组1、2、3均出现不同程度的AS斑块,血管壁厚度及PA/CVA均显著大于对照组(P<0.05);模型组3有大量脂质泡沫沉积,而且PA、CVA及PA/CVA相比于模型组1、2均明显增加(P<0.05).结论 大鼠在高脂饮食和VD₃腹腔注射基础上于3周后行颈总动脉球囊损伤手术,是诱导动脉粥样硬化模型的理想优化方法.     

NLRP3炎症小体在早期动脉粥样硬化ZDF大鼠中的表达及阿托伐他汀的干预

目的 观察NLRP3炎症小体及其介导的炎症因子在早期动脉粥样硬化(AS)Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠主动脉组织中的表达,以及阿托伐他汀(ATV)的干预作用。方法 高脂饲喂联合小剂量多次注射VD3建立ZDF大鼠早期AS模型,并给予ATV干预;检测血糖血脂、胰岛素、ox-LDL和hs CRP,并进行主动脉组织病理学检查和NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达的检测。结果 高脂饲喂后ZDF大鼠血糖、血脂、胰岛素和oxLDL水平均显著上升(P<0.05)。注射VD3后,hs CRP水平均显著上升(P<0.05),主动脉组织出现明显的早期AS病变,且NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著上调(P<0.05),而ATV组ZDF大鼠血脂、ox-LDL和hs CRP水平均明显下降(P<0.05),AS病变程度减轻,且主动脉组织中NLRP3、Caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著下调(P<0.05)。结论 NLPR3炎症小体及其介导的炎症因子参与了ZDF大鼠早期AS的炎症反应,而ATV可抑制NLRP3炎症小体的表达,抑制AS的炎症反应。     

乌灵菌粉对APPswe/PS1dE9阿尔兹海默病模型小鼠认知功能、Aβ1-42和p-Tau蛋白的影响

目的 探讨分析乌灵菌粉对APP_swe/PS1_dE9双转基因阿尔兹海默病模型小鼠认知功能、Aβ_1-42和p-Tau的影响。 方法 APP_swe/PS1_dE9双转基因小鼠20只，随机分成2组，每组10只，雌雄各半，即疾病模型组、乌灵菌粉组[剂量为100 mg/(kg·d)]；C57BL/6品系的正常小鼠10只作为健康对照组，雌雄各半。乌灵菌粉组灌胃给药共30 d，疾病模型组和健康对照组同期给予相同体积生理盐水代替，正常喂食。3组小鼠先后进行Morris水迷宫实验、定位航行实验和空间搜索实验。在末次给药1 h后，脱颈椎处死各组小鼠，采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测3组Aβ_1-42、p-Tau蛋白在小鼠海马中的含量。 结果 ①与健康对照组比较，乌灵菌粉组在逃避潜伏期、目标象限游泳时间、有效区停留时间和经过平台次数均显著增加(均P<0.01)；与疾病模型组比较,乌灵菌粉组在逃避潜伏期、目标象限游泳时间、有效区停留时间和经过平台次数均显著下降(均P<0.05)。②与健康对照组比较，乌灵菌粉组小鼠海马中的Aβ_1-42含量和p-Tau蛋白均显著增加(均P<0.01)；与疾病模型组比较，乌灵菌粉组小鼠海马中的Aβ_1-42含量显著降低(P<0.01)。 结论 乌灵菌粉能够改善APP_swe/PS1_dE9双转基因阿尔兹海默病模型小鼠记忆和学习能力，可能是通过减少小鼠海马中Aβ_1-42含量来影响Aβ聚集体的形成，从而减少老年斑的生成。      

前肢畸形WHBE兔血清钙、磷、碱性磷酸酶含量检测及骨密度分析

目的 观察前肢畸形WHBE (FMWHBE)兔前肢生理、病理特点和血清钙(Ca)、磷(P)含量等生化特性,探讨前肢畸形的可能成因及作为骨质疏松等骨生物力学研究模型的可能性.方法 分别选取1、2、3、4月龄FMWHBE兔、WHBE兔和日本大耳白(JPW)兔,每个月龄阶段各6只.检测所有实验兔血清钙(Ca)、磷(P)和碱性磷酸酶(ALP)含量;用小动物成像系统X射线成像后测量前肢肱骨、桡骨、尺骨骨密度(BMD),并经HE染色后,进行病理学检查.结果 与JPW兔比较,1、2、4月龄FMWHBE兔血清Ca含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01),4月龄FMWHBE兔血清P含量显著升高(P＜0.05).FMWHBE兔血清ALP水平显著低于WHBE兔和JPW兔组(P＜0.05或P＜0.01);与同期正常WHBE兔比较,1～4月龄FMWHBE兔肱骨和2、3、4月龄桡骨及1、2月龄FMWHBE兔尺骨BMD均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),与同期正常JPW兔比较,1、3月龄肱骨、桡骨和1、2月龄尺骨BMD均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);病理学检查结果显示,与WHBE兔JPW兔比较,FMWHBE兔前肢肱骨、桡骨、尺骨骨皮质较薄,局部骨组织表面成骨细胞较少,未见整齐排列成一层,骨小管数量较少,新生骨组织较少.结论 FMWHBE兔前肢畸形可能与较低的血Ca和ALP水平导致BMD的降低以及成骨细胞减少、新生骨较少有关.