细辛多糖对流感病毒H1N1型感染的保护作用及对炎症因子表达水平的影响

提取细辛多糖,分析其组成,研究其体外抗H1N1流感病毒活性及对肾阳虚外感证小鼠的干预作用。水提醇沉法制备细辛多糖,测定多糖含量并分析其单糖组成。体外采用细胞实时监测系统及Reed-Muench法评价其抗病毒活性。体内建立肾阳虚外感小鼠模型,比较麻黄细辛附子汤(以下简称"MXF组")和细辛多糖的药效。MXF组和细辛多糖组分别以1.8 g·kg^-1·d^-1和0.077 g·kg^-1·d^-1的临床等效剂量进行给药干预,每日1次,连续6 d。Real-time PCR法检测肺组织中H1N1流感病毒M基因及多个细胞因子的相对表达量。细辛中细辛多糖的质量分数为25.22%,多糖中蛋白质量分数为0.8%,其单糖组成为L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖。达菲、MXF和细辛多糖的治疗指数(TI)分别为30.00,8.06,10.33。细辛多糖3个给药浓度均可显著降低上清液中病毒含量(P<0.05)。与模型组相比,MXF组、细辛多糖组小鼠的肺指数显著降低(P<0.05),H1N1流感病毒的M基因相对表达量显著降低(P<0.05)。IL-10和IFN-γ的基因相对表达量出现不同程度上调,IL-1β,IL-6,MCP-1的基因相对表达量均出现不同程度的下调,细辛多糖可显著增强TNF-α的表达(P<0.01)。细辛多糖具有较好的体外抗流感病毒活性,并可通过降低肺组织中病毒载量及减轻肺组织的炎症损伤、调节炎症细胞因子表达起到对肾阳虚外感证小鼠的保护作用。相较于全方,细辛多糖有较好的抗病毒活性。     

北沙参多糖的分离、纯化及其体外免疫活性考察

目的:分离、纯化北沙参多糖(Glehniae Radix polysaccharides,GRP)并对各纯化组分(GRP-1,GRP-2,GRP-3)进行结构表征及体外免疫活性研究。方法:采用水提醇沉法获得GRP,Sevage法除蛋白,活性炭脱色素,DEAE纤维素DE-52柱色谱法及葡聚糖凝胶G-75(Sephadex G-75)柱色谱法分离与纯化。采用紫外分光光度法(UV)及1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化-HPLC对北沙参多糖的含量及其单糖组成进行分析,采用傅里叶红外光谱仪(IR)及多角度激光散射仪对GRP-1进行结构表征及相对分子质量测定,并考察北沙参多糖体外对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响。结果:GRP经柱色谱分离可获得GRP-1,GRP-2,GRP-3共3种多糖组分,UV测得三者的多糖质量分数分别为96.16%,48.64%和89.73%。其中,GRP-1为具有相对均一分子质量的多糖组分,相对分子质量23.01 k Da,由甘露糖-葡萄糖醛酸-鼠李糖-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖组成,摩尔比为81.86∶0.12∶0.17∶1 259.7∶0.54∶0.33,红外光谱表明其结构中存在α型糖苷键。体外免疫活性结果表明GRP-1组分对体外脾脏淋巴细胞的增殖具有较好的促进作用,此外GRP-2及GRP-3对脾脏淋巴细胞的增殖也具有一定的推动作用。结论:GRP-1是由多种单糖组成的相对均一的多糖组分,并具有较好的体外免疫活性。     

北沙参多糖分离纯化及经肠道菌群降解对体外免疫细胞增殖的影响

目的 分离纯化北沙参多糖并探讨经肠道菌群降解对体外免疫细胞增殖的影响.方法 采用水提醇沉法制得北沙参多糖,经DEAE-52阴离子交换柱分离纯化.紫外分光光度法分析北沙参多糖及蛋白质含有量,糖腈化衍生化-GC法分析北沙参多糖的单糖组成.采用高效凝胶渗透色谱测定降解前后多糖的保留时间.MTT法分析北沙参多糖及肠道菌群降解产物对小鼠巨噬细胞、脾淋巴细胞增殖活性的影响.结果 北沙参多糖经DEAE-52阴离子交换柱分离可得2种多糖组分,分别命名为D1、D2.其质量分数分别为72.99%、80.04%,蛋白质含有量分别为0.03%、0.14%.其中,D1组分只含有葡萄糖,D2组分由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖组成.高效凝胶渗透色谱法测得降解后多糖较D1、D2多糖的保留时间明显增加.MTT法测得北沙参多糖在经小鼠肠道菌群降解后对巨噬细胞、脾淋巴细胞的增殖作用优于降解前.结论 北沙参多糖在肠道菌群作用下降解为分子量较小的多糖,在经小鼠肠道菌群降解后对巨噬细胞、脾脏细胞的增殖作用增强.     

基于代谢组学的麻黄细辛附子汤治疗流感小鼠的作用机制研究

该研究运用代谢组学方法,研究麻黄细辛附子汤(MXF)干预的流感小鼠血清中内源性代谢物的变化,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,探讨MXF的药效及作用机制。实验选用昆明(KM)小鼠36只,随机分为正常组、流感组、MXF组,使用流感病毒H1N1滴鼻感染,建立流感小鼠模型;MXF组使用药物干预,其他组给予等体积的生理盐水,每日1次,连续6 d,记录小鼠的体重、肛温等药理指标,末次给药24 h后收集血清样本,采用HPLC-TOF-MS检测。结果显示,与正常组相比,流感组小鼠体重、肛温均出现不同程度下降,肺指数和死亡率明显升高(P0.05),MXF组各药理指标出现良好的回调趋势;血清样本采集的原始数据,使用R语言,MPP,SIMCA-P等软件进行处理,发现3组小鼠血清中14种内源性物质发生显著性变化(P0.05),经MXF干预后代谢物水平均出现不同程度的回调;进一步利用Met PA数据平台分析发现,14种代谢物涉及的通路包括糖代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等。通过对这些差异性代谢物生理功能的分析,并结合测定的宏观药理指标的分析,推测MXF可能从改善糖代谢,调节花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等多途径,发挥其药效作用。     

半夏多糖脱蛋白工艺研究

目的:筛选半夏多糖除蛋白的最优工艺。方法:以半夏多糖保留率和蛋白脱除率为考察指标,研究3种脱蛋白方法对半夏多糖脱蛋白的影响,并用正交试验优选出最佳工艺。结果:确定了胰蛋白酶结合三氯乙酸的脱蛋白方法,最优脱蛋白工艺为:在胰蛋白酶最适酶解条件下酶解,酶解液与TCA溶液(5%)的体积比为4:1,振摇时间10 min,静置时间30 min;在此条件下半夏多糖蛋白脱除率为94.96%,多糖保留率为91.51%。结论:优选出的脱蛋白方法可以有效的去除蛋白,纯化多糖,为半夏多糖制备工艺的进一步研究提供了参考。     

基于部分酸水解-亲水作用-LC-MS的北沙参多糖结构表征

由于中药多糖结构复杂、相对分子质量大,难以表征,该研究以中药北沙参40%乙醇沉淀多糖(Glehniae Radix polysaccharides,RGP)为研究对象,应用"自下而上"法完成对RGP的结构表征。该文最初采用部分酸水解方法水解RGP,分别考察了酸浓度、水解时间和温度对其水解效率的影响。在最佳条件(1.5 mol·L~(-1)TFA,4 h,80℃)下,RGP被水解为特征性寡糖片段。之后,采用HILIC-LC-MS对RGP部分酸水解产物进行分离和结构表征。同时结合几种标准二糖的MS和MS/MS分析,建立依靠质谱分析确定多糖糖苷键类型的方法。结果确定了4种糖苷键连接类型在MS/MS中的断裂规律,并发现RGP为含有1,4-糖苷键的线性葡聚糖,水解得到聚合度4~11的葡寡糖。     

HPLC法同时测定柴胡桂枝汤中6种成分

目的建立HPLC法同时测定柴胡桂枝汤(柴胡、桂枝、黄芩等)中肉桂酸、芍药苷、黄芩苷、汉黄芩素、甘草苷、甘草酸的含有量。方法该药物水提液的分析采用Diamonsil C_(18)色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相0. 1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量1. 0 mL/min;柱温27℃;检测波长230、260、280 nm。结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r 0. 999 0),平均加样回收率99. 06%~100. 37%,RSD 1. 75%~2. 26%。结论该方法稳定可靠,可用于柴胡桂枝汤的质量控制。     

基于中药血清药物化学的桂枝加葛根汤干预流感病毒性肺炎功效组分表征

目的：采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）对桂枝加葛根汤（GGT）干预流感病毒性肺炎的功效组分进行表征。方法：雄性BALB/c小鼠12只，随机分为空白组和GGT组（36 g·kg-1·d-1），每组6只，GGT组连续灌服GGT提取液5d，空白组灌服等量超纯水。给药结束后收集血清及肺组织，应用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS表征小鼠血清及肺组织中GGT原型及代谢成分。同时存在于小鼠给药血清及肺组织中的GGT成分定义为其功效组分，利用SwissTargetPrediction数据库对功效组分的靶点进行检索，通过GeneCards数据库查询流感病毒性肺炎的靶点，进而取交集得到GGT干预疾病的潜在靶点。通过STRING数据库对潜在靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析，利用Metascape对潜在靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果：在小鼠含药血清中共检测到GGT原型成分29个，代谢成分28个，其中有11个原型成分和4个代谢成分在小鼠肺组织中被检测到。主要代谢途径...