磷酸奥司他韦不同时序干预对A型H1N1流感病毒感染小鼠模型药效及炎症因子调控作用研究北大核心CSCD

目的针对目前抗病毒体内实验给药时间点偏早的现状,本研究以磷酸奥司他韦(达菲)作为“工具药”,比较不同时序干预对病毒感染小鼠的影响,为抗病毒药物研究选择合理的模型干预时间点提供依据。方法将Balb/c小鼠随机分成6组,滴鼻感染流感病毒(0.25 TCID_(50))建立病毒感染小鼠模型,达菲-1组、达菲-2组分别在染毒后d 1和d 4灌胃给药。测定体质量,计算生存率、脏器指数,测定病毒载量及炎症因子含量。结果与空白对照组比较,模型组小鼠的体质量降低,肺指数均明显升高(P<0.05);模型-2组13个炎症因子表达水平差异有显著性(P<0.05)。与模型-1组相比,达菲-1组肺指数、脾指数明显降低(P<0.05),病毒载量为模型-1组的0.54倍;与模型-2组相比,达菲-2组肺指数明显降低(P<0.05)、胸腺指数明显升高(P<0.05),病毒载量为模型-2组的0.03倍,13个炎症因子表达水平差异具有显著性(P<0.05)。结论方案2的小鼠染毒后症状更明显、稳定、给药后减轻了肺部炎症损伤,考虑了潜伏期,待模型动物出现症状开始进行药物干预符合临床用药指征,无论是在模型评估还是药物评价将更合理和准确。     

麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感小鼠及正常小鼠的效-毒作用研究

目的研究麻黄细辛附子汤(MXF)干预肾阳虚外感小鼠的药效作用及其对正常小鼠的毒性作用差异,并考察其效-毒作用机制。方法BABL/C雄性小鼠随机分为正常组、正常毒性低、中、高剂量组;肾阳虚外感模型组;肾阳虚外感低、中、高剂量组,连续灌胃给药6 d,记录体重、肛温等药理指标并观察小鼠的一般体征,检测生化指标、炎症因子。结果药效实验中,与正常组小鼠相比,肾阳虚外感模型组小鼠生化指标肌酸激酶(CK)、肌酸激酶-同工酶(CK-MB)、羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、乳酸盐脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(urea)含量明显升高(P<0.05),炎症因子白介素-6(IL-6)、单核细胞去化蛋白(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、干扰素-γ(INF-γ)以及白介素12(IL-12p70)含量升高明显(P<0.05)。经给药治疗后,各给药组CK、ALT、urea等生化指标含量较模型组有所回调,各给药组IL-6、IL-10、IFN-γ等炎症因子含量较模型组有不同程度的回调;毒性研究中,各给药组生化指标CK、urea、半胱氨酸(CYS-C)的含量较正常组显著升高(P<0.05),炎症因子白介素-10(IL-10)含量明显上升、白介素-12(IL-12p70)含量明显下降(P<0.05)。结论经MXF给药治疗后,肾阳虚外感给药组小鼠的一些生化指标均有不同程度的回调,MXF可通过调节IL-6、IL-10、IFN-γ、MCP-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子改善机体的炎症反应;而正常小鼠给予不同剂量的MXF后心脏、肝脏和肾脏功能出现失调,机体通过细胞转移、打破免疫应答的平衡,从而使正常小鼠出现炎症反应。     

偏最小二乘法(PLS)建模分析麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感小鼠的干预作用

目的:采用偏最小二乘法(PLS)整体判断麻黄细辛附子汤对肾阳虚小鼠外感模型的干预作用。方法:KM雄性小鼠91只随机分空白对照组、模型组、利巴韦林组、连花清瘟组和麻黄细辛附子汤(MXF)低、中、高、剂量组。除空白对照组外其余各组小鼠采用腹腔注射苯甲酸雌二醇(8mg/kg)法复制肾阳虚小鼠模型,采用流感病毒FM1尿囊液(血凝滴度为1:320)滴鼻感染小鼠,建立肾阳虚小鼠外感模型。感染1d后各组分别给药,每日1次,共6d。观察各组小鼠的体重、肛温变化。采用SIMCA-P软件处理小鼠的体重、肛温、各脏器指数、死亡率等指标,应用偏最小二乘法通过整体评价,综合判断造模情况及不同药物的干预效果。结果:PLS分析处理表明,与空白对照组比较,模型组综合药效分值显著较低(P <0.01);各给药组综合药效分值与模型组比较都有显著性差异(P <0.01),各给药组都表现出了一定的治疗效果,其中麻黄细辛附子汤中剂量效果更佳。结论:采用PLS分析方法对肾阳虚外感模型及各组药物干预进行综合评价,能较好地反映证候及中药复方整体调控作用的特点,避免某一个或几个指标评价容易引起片面结论的弊端。     

基于代谢组学的麻黄细辛附子汤治疗流感小鼠的作用机制研究

该研究运用代谢组学方法,研究麻黄细辛附子汤(MXF)干预的流感小鼠血清中内源性代谢物的变化,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,探讨MXF的药效及作用机制。实验选用昆明(KM)小鼠36只,随机分为正常组、流感组、MXF组,使用流感病毒H1N1滴鼻感染,建立流感小鼠模型;MXF组使用药物干预,其他组给予等体积的生理盐水,每日1次,连续6 d,记录小鼠的体重、肛温等药理指标,末次给药24 h后收集血清样本,采用HPLC-TOF-MS检测。结果显示,与正常组相比,流感组小鼠体重、肛温均出现不同程度下降,肺指数和死亡率明显升高(P0.05),MXF组各药理指标出现良好的回调趋势;血清样本采集的原始数据,使用R语言,MPP,SIMCA-P等软件进行处理,发现3组小鼠血清中14种内源性物质发生显著性变化(P0.05),经MXF干预后代谢物水平均出现不同程度的回调;进一步利用Met PA数据平台分析发现,14种代谢物涉及的通路包括糖代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等。通过对这些差异性代谢物生理功能的分析,并结合测定的宏观药理指标的分析,推测MXF可能从改善糖代谢,调节花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等多途径,发挥其药效作用。     

基于谱-效相关黄芩提取物抑菌药效物质基础及质量评价系统的研究

目的： 建立黄芩提取物抑菌谱-效相关质量评价系统,对其药效物质基础进行分析。方法： 自制黄芩提取物,建立HPLC指纹图谱检测方法;采用微量稀释法测定黄芩提取物样品水提液的抑菌率。利用灰色关联分析、相关分析及偏最小二乘回归分析对谱-效数据进行关联分析,挖掘药效物质基础;同时采用最小二乘支持向量机（LS-SVM）方法建立数学模型。结果： 成分4,7,8,9,10与抑菌率呈正相关关系;相关分析显示,成分3,7,4,5,6,9与抑菌率药效呈（非常）显著的相关关系;偏最小二乘回归分析显示,成分3,4,5,6,7,9的标准化回归系数绝对值较大,VIP值大于或接近于1,对抑菌率贡献率较大;数学模型预测值与实测值相对误差在6%以下。结论： 初步确定黄芩提取物抑菌药效物质基础主要为汉黄芩苷、汉黄芩素以及白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷;数学模型的建立,达到了从抑菌作用评价黄芩提取物质量的目的,并为中药谱-效相关质量评价系统的建立提供了详细的数据支撑。     

Ki-67水平对乳腺癌骨转移患者预后的影响

目的探讨Ki-67水平对乳腺癌骨转移患者预后的影响。方法回顾性分析2009年6月至2015年6月郑州大学第一附属医院收治的347例乳腺癌骨转移患者的临床资料,包括确诊乳腺癌骨转移时的年龄、原发肿瘤大小、组织学分级、有无其他部位转移、Ki-67、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(HER2)、骨转移前无进展生存期(PFS)、骨转移后无进展生存期(BM-PFS)和骨转移后总生存期(BM-OS)等。利用统计学软件分析相关指标与预后的关系。结果 Ki-67水平与骨转移前PFS有关(P<0.05)。Ki-67(-)组BM-PFS分别与Ki-67(+)组、Ki-67(++)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ki-67(++)组BM-PFS较Ki-67(+)组短, Ki-67(+++)组BM-PFS较Ki-67(-)组、Ki-67(+)组、Ki-67(++)组短,差异有统计学意义(均P<0.05)。Ki-67低表达组BM-OS较Ki-67高表达组长,差异有统计学意义(P<0.05)。PR阴性、PFS≤2 a、存在其他转移、多发骨转移是影响乳腺癌骨转移患者BM-OS的独立危险因素(P<0.05)。结论 Ki-67高表达的乳腺癌患者易较早发生骨转移,骨转移后疾病控制效果较差。Ki-67高表达的乳腺癌患者BM-OS较短。PR阴性、PFS≤2 a、多发骨转移、伴有其他转移是乳腺癌骨转移患者预后不良的独立危险因素。     

研究生培养唯论文现象及解决思路

通过对目前高校研究生培养中的“唯论文”现象展开分析,认为该现象与职能部门导向、研究生培养过程的形式化以及研究生导师的主体职责缺失密切相关。基于以上认识,提出了职能部门调整和完善培养方案;研究生培养中,应避免一刀切的评价体系,加强研究生培养活动的过程管理;强化导师的主体责任,将研究生的“以德为先”教育始终放在人才培养的首位,“重论文”但不“唯论文”,综合施策,实现德才兼备的人才培养目的。     

基于粪便代谢物组学分析麻黄细辛附子汤干预H1N1流感病毒感染小鼠的作用机制

目的:运用代谢组学方法研究麻黄细辛附子汤(Mahuang Xixin Fuzi Tang,MXF)干预H1N1流感病毒感染小鼠粪便样品中内源性物质的变化,寻找与疾病相关的生物标志物,探讨MXF干预H1N1流感病毒感染可能的作用机制。方法:将30只KM小鼠随机等分为空白组、模型组和MXF组,小鼠滴鼻感染H1N1流感病毒后灌服MXF(给药剂量20 m L·kg~(-1)),模型组和空白组灌服等量水,连续给药7 d并测量各组小鼠的体重和肛温,收集各组小鼠的粪便。采用Halo C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相0.05%甲酸水溶液-0.05%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,质谱扫描范围m/z 80~1 200,对粪便样品进行LC-MS测定并结合主成分分析和偏最小二乘判别分析寻找潜在生物标志物。结果:空白组、模型组和MXF组代谢模式显著不同,鉴定出了9个潜在生物标志物,分别为磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、吡哆醛、草酰乙酸、琥珀酸、褪黑素和L-犬尿氨酸。结论:MXF干预H1N1流感病毒感染的机制可能与其对色氨酸代谢、维生素B6代谢、甘油磷脂代谢和三羧酸循环等代谢紊乱的回调作用有一定相关性。     

党参乙酸乙酯提取物抑制上皮间质转化作用的谱效关系研究

目的:研究党参乙酸乙酯提取物硅胶柱不同洗脱部位(different Silica gel column elution fractions of ethyl acetate extraction from Codonopsis Radix,DSEF-Et OAc-CR)的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱与其抑制TGF-β1诱导的肺癌Ⅱ型上皮细胞A549上皮间质转化(Eepithelial-to-mesenchymal transition,EMT)活性作用的谱效关系。方法:建立党参DSEF-Et OAc-CR的HPLC指纹图谱;采用RT-PCR法和ELISA法分别测定colⅠmRNA相对表达量和HYP表达量,考察DSEF-Et OAc-CR对EMT的抑制作用;采用偏最小二乘回归分析法分析DSEF-Et OAc-CR HPLC特征指纹峰与其抑制EMT活性药效之间的谱效关系。结果:在标定的41个特征指纹峰中,有13个特征峰与colⅠmRNA相对表达量呈负相关,即与对EMT的抑制作用呈正相关,其中10、15、17号峰贡献较大;有10个特征峰与HYP表达量呈负相关,即与对EMT的抑制作用呈正相关,其中10号峰贡献较大。结论:DSEF-Et OAc-CR中含有对EMT有抑制作用的特征效应物质。     

麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感证模型小鼠TLRs应答及Cyt-CO介导的凋亡调控的影响

目的:研究麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感证模型小鼠Toll样受体(TLRs)应答及细胞色素C氧化酶(Cyt-CO)介导的凋亡调控的影响。方法:将48只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组(n=12)和造模组(n=36)。造模组小鼠采用腹腔注射苯甲酸雌二醇溶液(8 mg/kg)+滴鼻接种甲型H1N1流感病毒(20μL/只)的方法建立肾阳虚外感复合模型。然后将造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性药组(磷酸奥司他韦胶囊,0.195 g/kg)和麻黄细辛附子汤组(1.802 g/kg,以生药总量计),每组12只。各给药组小鼠灌胃相应药液,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水;灌胃体积均为20 m L/kg,每天1次,连续给药6天。给药期间,每天测量小鼠体质量、肛温,并计算其初始体质量百分率;末次给药后,计算其脏器(脾、胸腺、肺)指数,观察其肺组织病理学变化,检测其肺组织中甲型H1N1流感病毒的病毒载量(以M基因mRNA表达水平反映)以及心脏组织中TLR3、TLR7、髓样分化因子(MyD88)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达水平和Cyt-CO活性、细胞色素C(Cyt-C)含量。结果:与正常组比较,模型组小鼠的初始体质量百分率、肛温持续降低(P<0.05);脾指数、胸腺指数均显著降低(P<0.05),肺指数显著升高(P<0.05);肺组织病变严重;肺组织中病毒载量和心脏组织中TLR3、TLR7、MyD88、Caspase-3 mRNA表达水平及Cyt-C含量均显著升高(P<0.05或P<0.01),心脏组织中Cyt-CO活性显著降低(P<0.01)。与模型组比较,麻黄细辛附子汤组小鼠的初始体质量百分率、肛温自给药第4天起呈上升趋势(P<0.05或P<0.01);脾指数、胸腺指数均显著升高(P<0.05),肺指数均显著降低(P<0.05);肺组织病理损伤明显改善;肺组织中病毒载量和心脏组织中TLR3、Caspase-3 m RNA表达水平和Cyt-C含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),心脏组织中Cyt-CO活性显著升高(P<0.01)。结论:麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感病证模型小鼠具有改善作用,这可能与其可抑制TLRs应答和Cyt-CO介导的凋亡调控途径有关。