三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后行为学变化及细胞凋亡的影响

目的:观察三七总皂甙对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用并分析其可能的作用途径。方法:实验于2005-06/11在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。实验共选取64只SD大鼠,随机分为损伤组和三七总皂甙组,每组32只,采用改良Allen’s重物打击法造成大鼠中度脊髓损伤,三七总皂甙组于伤后30min腹腔注射50g/L三七总皂甙(100mg/kg),伤后2,4h用50mg/kg,以后1次/d,剂量200mg/kg,连用12d。损伤组于伤后各时间点腹腔注射等体积生理盐水。观察比较治疗后不同时间大鼠行为评分、斜板试验、组织学检查及脊髓神经细胞凋亡指数变化。结果:64只SD大鼠全部纳入结果分析。①三七总皂甙组和损伤组大鼠在7d时行为评分分别为2.50±0.53、1.38±0.74,14d时分别为3.25±0.89、1.75±0.71,两组比较差异有显著性(t=-3.473,-3.742,P<0.05)。②三七总皂甙组与损伤组1,3,7,14d各时间点斜板最大角度差异均有显著性(t=-4.081,-4.235,-4.245,-4.687,P<0.05)。③苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组。④损伤组大鼠脊髓损伤后1d在灰质及白质中均可见标记阳性细胞,损伤3d后凋亡指数渐增,7d达高峰;三七总皂甙组大鼠脊髓神经细胞凋亡指数较损伤组低,高峰提前,发生在损伤后3d,以后逐渐降低。两组比较差异均有显著性(t=4.196,2.627,7.732,3.547,P<0.05)。结论:三七总皂甙能抑制脊髓损伤神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。     

柚皮苷对破骨细胞分化的影响

目的: 探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响. 方法: 通过100 μg·L^-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB 受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响. 结果: 采用100 μg·L^-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达. 结论: 柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.     

柚皮苷联合运动对去势大鼠骨量和骨强度的影响

目的观察柚皮苷（NG）联合中强度跑台运动对去势大鼠骨质疏松模型的治疗效果。方法2月龄雌性SD大鼠80只,用随机数字法分为假手术组（SHAM）、去势组（OVX）、去势＋不同浓度（40、100、200 mg/kg）柚皮苷组（OVX＋NG）、去势＋跑台＋柚皮苷组（OVX＋EX＋NG）、去势＋跑台组（OVX＋EX）、雌激素组（OVX＋E2）,每组10只。大鼠切除卵巢2个月后开始给药,给药60 d后观察各组大鼠股骨骨密度（BMD）,Micro-CT参数,血清生化指标及及股骨力学性能与组织学改变。结果柚皮苷与跑台运动干预60 d后,OVX＋EX＋NG组大鼠股骨颈力学强度、股骨BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th等均高于单纯去势组（P〈0.05）,OVX＋EX＋NG组治疗效果与柚皮苷浓度呈正相关,以200 mg/kg柚皮苷效果最佳;200 mg/kg柚皮苷联合中强度跑台运动可进一步提高治疗效果。OVX＋NG组大鼠血清骨钙素升高,Ⅰ型胶原C端肽（CTX-1）降低;OVX＋EX组大鼠骨钙素与CTX-1均降低;OVX＋EX＋NG组大鼠骨钙素水平与柚皮苷组（200 mg/kg）无差异,但高于OVX＋EX。OVX＋EX＋NG组CTX-1水平低于单纯柚皮苷组和单纯跑台组（P〈0.05）。结论柚皮苷联合中强度跑台运动可提高去势大鼠股骨BMD,增加骨小梁数目,改善骨代谢指标,提高股骨力学性能。     

右心室不同部位起搏显示左侧隐匿性房室旁路一例

患者男性,41岁.阵发性心悸16年,1年来发作1～2次/月,呈突发突止.心电图V1导联逆性P波直立,RP间期＞70 ms(图1),超声心动图、X线胸片无异常.心内电生理检查     

氨茶碱在大容量全肺灌洗术中的应用

目的探讨氨茶碱在大容量全肺灌洗中的作用与机制。方法选择40例符合全肺灌洗条件的Ⅰ期煤工尘肺患者,根据病情随机分层将其分为观察组与对照组各20例,观察组患者在第一侧肺灌洗毕给予氨茶碱0.25 g静脉推注,记录两组患者肺灌洗术前、灌洗毕及灌洗后30 min、60 min、120 min呼吸力学参数值、动脉血氧分压及双肺灌洗间隔时间、手术时间。结果在肺灌洗术中应用氨茶碱后气道阻力减小,肺顺应性增加,双肺灌洗间隔时间及手术时间明显缩短。结论氨茶碱具有扩张支气管、强心利尿及促进肺泡表面物质生成等作用,在双肺大容量灌洗中应用氨茶碱,可以改善肺通气、恢复灌洗肺顺应性及缩短双肺灌洗间隔时间及手术时间。     

内镜下幽门括约肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄的护理配合

先天性肥厚性幽门狭窄（Congenital hypertrophic pyloric stenosis，CHPS）是新生儿常见的疾病，发病率为10—33／10万，占消化道畸形的第三位。传统的治疗方法是全麻下行Fredeet—Ramstedt幽门括约肌切开外科手术或腹腔镜下行幽门括约肌切开术，但这些手术对患儿造成的创伤较大，恢复时间长，并发症多，而且住院费用昂贵。2005年英国学者lbarguen-Seechia E首次报道在内镜下行幽门括约肌切开术治疗CHPS患儿10例，取到了良好治疗效果，该治疗手段有着恢复快、治疗总费用低、没有手术瘢痕等优点，同时避免了全身麻醉及手术切口感染等风险。我院自2006年8月开始在躅内首次采用内镜下幽门括约肌切开术治疗9例CHPS患儿，取得良好的效果，现将护理配合体会报道如下。     

黄芪关节腔内注射后兔骨关节炎模型软骨退行性变及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性的变化

目的:观察关节腔内注射黄芪后,对兔前交叉韧带切断骨关节炎模型中软骨退行性变以及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量的影响。方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院动物实验中心完成。①选用成年日本大白兔16只,随机数字表法分为模型对照组、黄芪治疗组,8只/组。②两组兔均行单侧前交叉韧带切断术建立骨关节炎模型。黄芪治疗组于术后1周开始,关节内注射黄芪0.3mL/次,1次/周,连续6周。模型对照组于同一时间点关节内注射0.3mL生理盐水。③术后第7周处死两组动物,采用关节软骨病理改变评分(0～4分,分数越高病理变化越严重)对比观察两组兔股骨髁关节软骨的大体变化;采用关节软骨退行性变Mankin’s评分(包括软骨结构、软骨细胞、臧红O染色、潮线的完整性4个指标)对比观察光镜下两组兔关节软骨的退行性变情况;并检测滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量。结果:16只兔均进入结果分析。①术后第7周关节软骨病理改变评分结果:黄芪治疗组软骨退行性变评分明显低于模型对照组(z=-2.595,P<0.05)。②术后第7周关节软骨退行性变Mankin’s评分结果:黄芪治疗组明显低于模型对照组[(5.9±1.46),(8.8±1.39)分,t=-4.039,P<0.05]。③术后两组滑膜组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的比较:与模型对照组比较,黄芪治疗组超氧化物歧化酶活性明显升高(t=8.206,P<0.05),而丙二醛含量明显降低(t=-4.039,P<0.05)。结论:黄芪能明显降低软骨退行性变的程度,并增加骨关节炎滑膜组织中超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的含量,有可能成为防治骨关节炎的良好药物。     

三七总皂苷干预脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化

目的：观察三七总皂苷注射液对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的作用机制。方法：实验于2005—06／1l在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。将64只SD大鼠数字表法随机分为损伤组和三七总皂苷组（n=32），2组按存活时间分为1，3，7，14d4个时间点，每个时问点8只。所有大鼠采用Allen’s法制备脊髓中度损伤模型（致伤能量为40g&;#183;cm），三七总皂苷组伤后30min腹腔注射50mg／L三七总皂苷100mg／kg，伤后2h及4h再次给予50mg／kg，以后1次／d，剂量200mg／kg，连用12d。损伤组相同时间点腹腔注射等体积生理盐水。2组均于预定对间点处死大鼠，取出伤段脊髓（以损伤处为中心，长约10mm），用苏术精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率。结果：64只大鼠全部进入结果分析。①苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂苷组明显轻于损伤组。②诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（21．38&;#177;3．69）％。（36．24&;#177;3．27）％，（30．56&;#177;2．89）％．（21．64&;#177;5.31）％；（39．48&;#177;3．78）％。（58，69&;#177;5．67）％。（68．97&;#177;5．34）％，（40．35&;#177;4．36）％。t=9．692，9．701，17．893，3．171，P〈0．05]。⑧半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（26．29&;#177;3．21）％，（35，42&;#177;2．25）％，（48．58&;#177;2．64）％。（23．72&;#177;3．26）％：（32．43&;#177;2，69）％，（46、18&;#177;3．07）％，（60．31&;#177;5．35）％，（31，98&;#177;4、80）％，t=4．147。7．996，5．561，11．231，P〈0．05]。结论：三七总皂苷注射液能抑制脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达，从而减轻细胞损伤和凋亡。     

药物三联疗法对急性脑梗死患者血清学指标及神经功能的影响

目的探讨药物三联疗法(尤瑞克林、丁苯酞和阿司匹林)对急性脑梗死患者血清白细胞介素-6(IL-6)、胱抑素C(Cys-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及神经功能的影响。方法选取196例医院确诊并治疗的急性脑梗死患者,随机分为研究组和对照组,每组各98例。研究组采用基础治疗联合尤瑞克林、丁苯酞和阿司匹林治疗,对照组采用基础治疗联合阿司匹林治疗。比较两组患者治疗前后血清IL-6,Cys-C,TNF-α水平及神经功能评分。结果治疗前,两组患者血清IL-6,Cys-C,TNF-α水平和生活能力(mRS)评分、美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分无显著性差异(P>0.05);治疗后,两组患者上述指标均显著性降低(P<0.05),且研究组患者明显低于对照组(P<0.05)。结论采用药物三联疗法(尤瑞克林、丁苯酞和阿司匹林)治疗急性脑梗死,能显著降低患者血清IL-6,Cys-C,TNF-α水平,改善神经功能损伤。     

三维丝素支架材料制备及其与骨髓间充质干细胞的生物相容性

目的:成为组织工程合适的三维支架材料,关键在于支架材料与骨髓间充质干细胞的生物相容性,实验应用天然高分子材料丝纤维制备三维丝素蛋白支架材料,并探索其方法的可行性。方法:实验于2006-07/2007-06在华中科技大学同济医学院协和医院中心实验室和骨科实验室完成。①用全物理相过程制备三维疏松多孔的丝素蛋白支架材料,将鼠骨髓骨髓间充质干细胞与上述载体材料体外复合培养。②观察指标:应用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞与材料复合生长情况;复合培养1周后流式细胞仪检测细胞周期了解材料有无致畸性;在培养第2,4,6,8天用MTT法测定细胞增殖情况;诱导培养条件下在第2,4,6,8天测定碱性磷酸酶活性,了解材料对骨髓间充质干细胞分化的影响。结果:①倒置相差显微镜和扫描电镜观察显示材料为疏松多孔结构,孔隙大小较均一,骨髓间充质干细胞能在材料上良好地黏附、增殖和生长。②复合培养条件后流式细胞仪检测显示细胞周期未受材料的影响,未检测到有异倍体细胞。③MTT法检测显示细胞增殖未受材料的影响,诱导培养条件下检测碱性磷酸酶活性显示其未受到材料的影响结论:用全物理相过程可初步制备具有良好的生物相容性和较好孔隙率的三维疏松多孔的天然支架材料,其有望作为组织工程理想支架材料。