完整大鼠连续间断取血法研究黄芪甲苷的药动学

目的：建立黄芪甲苷（astragaloside,AGS-IV）在完整大鼠体内血药浓度的测定方法及初步的药动学评价。方法：运用液质联用仪（HPLC-MS）测定大鼠血浆AGS-IV浓度。6只雄性SD大鼠,AGS-IV溶液静脉给药（2 .0 mg/kg） ,单只大鼠连续取血法,取血点分别为0 .025、0 .05、0 .1、0 .25、0.5、1、2、4、6、10、14和24 h。固相萃取小柱提取血浆样品,地高辛为内标（I .S.）,LC-ESI-MS测定血药浓度。AGS-IV的m/z为807 .5 ,内标地高辛的m/z为803 .5。结果：AGS-IV的标准曲线线性范围为1 ～1 000 ng/mL（r=0 .9992） ,日内和日间精密度分别小于6 %和8%,血浆样品AGS-IV的回收率为92 .8 %～98 .4 %,内标的回收率为80 .0 %～90 .9 %,最低检测限为0 .5ng/mL。CAPP软件拟合,AGS-IV的消除符合二室模型,药动学参数t1/2β（h） ,CL（L.kg-1.h） ,Vc（L/kg）,AUC0 -∞（μg·mL-1.h）分别为：3 .46±0 .52 ,0 .47±0 .02 ,0 .76±0.16和4274±186。结论：连续间断取血法结合HPLC-MS技术,适用于测定AGS-IV在小动物的血药浓度和药动学评价。     

甲萘威对雌性大鼠血清雌激素水平及抗氧化系统功能的影响

目的观察甲萘威对雌性大鼠的生殖毒性并初步探讨其机制。方法雌性SD大鼠经口染毒甲萘威,剂量为0、1.028、5.140、25.704mg·kg-1·d-1。阴道脱落细胞涂片法观察大鼠动情周期的变化;放射免疫法测定其血清雌二醇(E2)、孕酮(P4)水平;分光光度法测定其血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活力以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果各剂量甲萘威染毒组大鼠动情周期数明显低于对照组。染毒后15d大鼠动情各期出现变化,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。25.704mg·kg-1·d-1组大鼠体重增长明显低于对照组。各剂量染毒组大鼠的多个脏器系数均明显降低。25.704mg·kg-1·d-1组大鼠血清中E2水平为(19.93±2.21)nmoll,1.028mg·kg-1·d-1组大鼠P4水平为(1.21±0.40)nmoll,与对照组[(28.76±6.12)、(0.63±0.39)nmolL]的差异均有统计学意义(P<0.05)。随染毒剂量增高,大鼠SOD活力在卵巢先降后升,在血清中略升后下降;MDA含量则呈在卵巢中渐升高、在血清中略升后降低趋势;GSH含量和GST活力在卵巢中呈先降后升趋势,但在血清中,GSH含量呈下降趋势,GST活力先上升后下降。结论甲萘威可致雌性大鼠动情周期紊乱及雌激素水平改变,对大鼠的抗氧化系统产生一定影响。     

黄芪甲苷包合体的药动学和绝对生物利用度研究

 目的 应用完整大鼠间断连续取血模型研究黄芪甲苷包合体的药动学和绝对生物利用度。方法 30只雄性SD大鼠分为5组,每组6只,分别给予黄芪甲苷水剂(20 mg·kg-1、黄芪甲苷包合体(5.0, 10.0和20.0 mg·kg-1灌胃,以及黄芪甲苷水剂(2.0 mg·kg-1注射。每只大鼠间断连续取血,所有的血样以地高辛为内标,用液质联用仪(HPLC-MS测定。结果 黄芪甲苷和地高辛m/z比分别为 807.5和803.5。黄芪甲苷包合体(5.0, 10.0和20.0 mg·kg-1的t_1/2β分别为(10.73±3.34,(11.47±3.28和(12.88±2.03 h, CL分别为(0.88±0.09,(0.90±0.63和(0.85±0.04 L·h-1, V_c分别为(6.73±1.78,(5.66±2.23和(5.72±2.41 L·kg-1,AUC_0-t分别为(1 099.09±84.32,(2 174.68±232.98和(4 800.24±214.86 ng·h·mL-1。黄芪甲苷包合体的绝对生物利用度为10.2％～11.2％,而黄芪甲苷水剂的绝对生物利用度只有3.2％。结论 包合体是提高黄芪甲苷绝对生物利用度的有效剂型,值得深入研究。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。     

妇人,母猪,雌性大白鼠食用大豆后,尿中大豆异黄酮代谢物

目的：研究妇人，母猪，雌性大白鼠食用后，尿中大豆异黄酮代谢物成份的比较。方法：妇人食用大豆食品或以含大豆饲料喂食母猪，雌性大白鼠后，收集尿液，以液质联用分析仪分析尿液中大豆异黄酮代谢物的种类及含量。结果：在尿液样品中检测出大豆异黄酮及其糖苷酸代谢物。在大白鼠尿液中的大豆异黄酮代谢物主要为7—4’—异黄烷二醇葡萄糖百酸(equol glucuronide conjugate)，其次为7，5，4’—三羟基异黄酮糖苷酸(genistein glucuronide conjugate)及7，4’—二羟基异黄酮糖苷酸(daidzein glucuronide conjugate)。在妇人尿液中大豆异黄酮糖苷酸代谢物超过90％，在母猪尿液中大豆异黄酮糖苷酸代谢物介于80．5％—84．5％之间。在雌性大白鼠尿液中大豆异黄酮糖苷酸代谢物约有50％的大豆异黄酮糖百酸代谢物。结论：7．4’—异黄烷二醇为大白鼠尿液中的主要大豆异黄酮代谢物。猪模型比大白鼠模型较合适用来模拟人类食用大豆食品后的代谢研究。     

丙烯酰胺的毒性研究

丙烯酰胺作为一种常见的化工原料,在工业中广泛应用,是职业环境中的一种污染物。近年来,科学家提出丙烯酰胺存在于高温加热的淀粉类食品中,成为非职业人群暴露的一个重要途径,引起了有关各方的关注。本文就丙烯酰胺可能引起的神经、生殖、胚胎发育毒性以及与肿瘤的关系做一综合报道。     

液相色谱串联质谱法同时检测饮用水中8种氨基甲酸酯类农药的方法学研究

目的:建立自来水中8种氨基甲酸酯农药(仲丁威,异丙威,速灭威,甲萘威,灭多威,残杀威,苯氧威,猛杀威)的液相色谱-串联质谱分析方法。方法:水样在离心或液液萃取后通过C18色谱柱,以含0.2%的甲酸的甲醇和0.2%的甲酸溶液进行梯度洗脱,采用电离喷雾电离方式(ESI ),通过多反应监测(MRM)定量。结果:在20 m in完成分析,离心处理后8种农药在0.05~5μg/m l浓度范围内线性相关系数>0.9973。加标回收率为96.67%~111.52%(添加水平分别为0.1,1和5μg/m l),相对标准偏差5.4%~14.2%,最低检出限介于0.02~0.03μg/m l。对0.1μg/L的加标样在液液萃取后回收率在75.5%~128.3%,相对标准差4.7%~31.5%。结论:本法灵敏度高,选择性强,分析时间短,适合于对水中该8种氨基甲酸酯类的分析。     

去卵巢裸鼠人乳腺癌移植模型的建立

目的:采用雌激素皮贴刺激的方法,建立去卵巢(模拟妇女绝经后)裸鼠人乳腺癌移植模型,并探讨其部分生物学特性.方法:16只裸鼠切除卵巢后,背部给予雌激素皮贴,再接种雌激素受体阳性(ER )的MCF-7人乳腺癌细胞株,观察肿瘤块生长情况,30天后处死荷瘤裸鼠,切除肿块作病理切片及免疫组化.结果:接种后第4天即在接种部位可见结节,4周后肿瘤块平均表面积为(10.0±2.1)mm2,肿瘤移植成功率(成瘤率)为75%(12/16).病理学检查为浸润性导管癌,免疫组化雌激素受体表达呈阳性.结论:该方法采用了外部给予雌激素皮贴,刺激肿瘤的生长,成瘤率较高,且操作简便,成功的建立了去卵巢(绝经后)裸鼠人乳腺癌移植模型,经实验证明肿瘤可保持人乳腺癌生物学特性,为研究妇女绝经后雌激素依赖性乳腺肿瘤的发生机制提供了重要的科研工具.     

工作场所空气中1,1-二氯-1-氟乙烷溶剂解吸气相色谱测定方法的研制

目的：建立工作场所空气中1，1-二氯-1-氟乙烷溶剂解吸气相色谱测定方法。方法：按照《工作场所空气中毒物检测方法的研究规范》的要求，进行实验室实验及现场试验。结果：本方法在1．0—1410μg／ml范围内呈线性关系，样品在碳管内可保存7d；方法的重现性好，不同浓度的相对偏差为2．5％-6．1％，方法的最低检出限为1μg，空气中HCFC-123、HCFC-142b等在本方法条件下不干扰测定。结论：此方法各项指标均达到《工作场所空气中毒物检测方法的研究规范》的要求，适用于工作场所空气中1，1-二氯-1-氟乙烷的现场检测。     

同时测定大鼠血清中大豆异黄酮及其代谢产物含量的液相色谱-串联质谱方法研究

目的:建立大鼠血清中大豆异黄酮及其代谢产物(染料木黄酮、大豆苷元、雌马酚)的液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定方法.方法:以芒柄花素为内标,血清中的大豆异黄酮酶解后经乙酸乙酯提取,进行HPLC-MS/MS测定.色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18(150 mm×2.1 mm×5μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,离子源为ESI(-),多反应临测(MRM)方式检测.结果:血清中染料木黄酮、大豆苷元和雌马酚在10～1000 ng/ml范围内线性良好,相关系数分别为0.9994、0.9959、0.9978.提取回收率范围为86.1%～103.0%,方法的准确性和精密度良好.结论:本方法操作简单、专属性强、灵敏度高、准确性好,可用于血清中大豆异黄酮代谢产物的测定.