MicroRNA与胃癌的关系

微小RNA(microRNA)是一类内源性、长度约为16～29 nt非编码小RNA,在细胞发育、增殖、分化、凋亡等方面都起了重要作用.通过与靶mRNA完全或不完全互补配对,引起mRNA的降解或翻译抑制,从而对基因转录后水平进行调控.microRNA既可作为促癌基因参与恶性肿瘤的发生和发育过程,又可作为抑瘤基因控制恶性肿...     

PUMA和BIM表达与结直肠癌浸润转移及预后的关系

目的 研究BH3-only蛋白家族中p53上调凋亡调控因子(PUMA)和与bcl-2相互作用的细胞死亡调解因子(BIM)在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌侵袭、转移和预后关系.方法 采用免疫组化染色方法(EnVision),检测PUMA和BIM蛋白在30例正常大肠黏膜、30例大肠腺瘤及142例结直肠癌组织中的表达.分析PUMA、BIM蛋白表达与患者临床病理特征、预后及化疗耐药相关蛋白[P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)]的相关性.结果 PUMA蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为82.4％,低于其在大肠腺瘤和正常大肠黏膜组织中的阳性表达率(均为96.7％)(x2=3.93、3.93,P＜0.05).BIM蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为62.7％,明显低于其在大肠腺瘤组织中和正常大肠黏膜的阳性表达率(90.0％和96.7％)(x2 =8.42、13.29,P＜0.01).PUMA蛋白与BIM蛋白在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.747,P=0.000).PUMA蛋白的表达与肿瘤的分化程度(x2 =11.87)、浸润深度(x2=11.59)、淋巴结转移(x2=12.82)、TNM分期(x2=33.47)以及P-gp表达(x2=18.30)有关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理组织学类型以及GST-π表达无关(P＞0.05).BIM蛋白的表达与分化程度(x2=16.19)、淋巴结转移(x2=14.95)、TNM分期(x2=52.66)以及P-gp表达(x2 =10.60)有关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、病理组织学类型以及GST-π表达无关(P＞0.05).PUMA、BIM阳性表达者的术后1、3、5年生存率明显高于阴性表达者(x2=6.10、27.60,P＜0.05).淋巴结转移(RR=0.238)、TNM分期(RR=7.895)、PUMA(RR=1.691)和BIM蛋白的表达(RR =0.440)可作为结直肠癌独立的预后指标(P＜0.05).结论 PUMA、BIM在结直肠癌中的表达与结直肠癌的侵袭、转移和预后明显相关.PUMA和BIM蛋白表达降低的结直肠癌患者病期晚、预后差.     

益胃饮对小鼠移植性前胃癌术后复发转移及MMP-9、BCL-2、VEGF的影响

目的:研究益胃饮治疗胃癌的可能作用机制,为临床应用益胃饮治疗胃癌提供理论依据。方法:①动物试验:通过建立小鼠肺转移瘤模型,研究益胃饮灌胃给药对615小鼠肺转移瘤形成与生长的影响;②免疫组化试验:通过对小鼠肿瘤标本免疫组织化学染色分析,研究益胃饮对肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、细胞黏附分子变异体6(CD44v6)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL-2)表达的影响;③酶联免疫吸附试验:通过对小鼠血清酶联免疫吸附试验检测,研究益胃饮灌胃给药对荷瘤小鼠血清VEGF、MMP-9表达水平的影响。结果:益胃饮可抑制小鼠肺转移瘤的形成与转移,并抑制肿瘤组织表达VEGF、MMP-9和BCL-2,下调荷瘤小鼠血清VEGF、MMP-9表达水平。结论:益胃饮具有抑制胃癌细胞复发及肺转移作用,其分子机制可能是益胃饮抑制了MMP-9、BCL-2及VEGF的表达。     

再生蛋白4的相关表达在胰腺癌诊断中的意义

目的：探讨检测血清中再生蛋白4（REG4）水平在胰腺癌诊治中的作用。方法：分别采用ELISA法和化学发光免疫法对84例胰腺癌血清REG4和CA19-9进行测定,并与58例胰腺良性疾病和70名正常人进行比较,分析REG4对胰腺癌的临床诊断价值。结果：胰腺癌病人血清REG4水平[（2.34±1.37）μg/L]明显高于胰腺良性疾病[（0.82±0.57）μg/L]（P〈0.001）和正常人[（0.73±0.43）μg/L]（P〈0.001）;Ⅰ＋Ⅱ期胰腺癌REG4升高的病人数明显高于CA19-9升高的病人数（P=0.031）。联合检测血清REG4和CA19-9可将诊断灵敏度提高至90.5%,术后监测表明,胰腺癌切除术后血清REG4下降。血清REG4表达与胰腺癌细胞REG4表达明显相关（χ2=7.54,P〈0.001）。结论：血清REG4是一个潜在的胰腺癌血清标志物,对胰腺癌的诊断和随访具有临床价值。     

益胃饮含药血清对胃癌细胞MFC增殖凋亡及NR4A3/HGF表达的影响

目的:探讨不同浓度益胃饮对体外培养的胃癌细胞MFC的增殖、凋亡及NR4A3蛋白表达的影响。方法:MFC细胞经不同浓度益胃饮含药血清处理后,采用MTT法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,显微镜观察细胞形态学改变;采用流式细胞仪及Annexin V/PI染色的方法检测益胃饮含药血清对MFC胃癌细胞周期及凋亡的影响,并以RT-PCR芯片技术(Mouse TumorM etastasis PCR Array)分析该方对胃癌细胞MFC肿瘤相关基因表达的影响;结果:益胃饮含药血清浓度在4%~12%时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而RT-PCR芯片技术分析结果显示NR4A3表达则随之增强而HGF显著下调。结论:益胃饮含药血清对人胃癌细胞MFC增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,其作用机制可能是益胃饮通过促进Nr4 a3表达,下调HGF而达到的。     

MicroRNA-101调控人胃癌细胞系增殖、迁移、侵袭的实验研究

目的 通过实验研究miRNA-101在胃癌中的表达水平,以及对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭力和皮下移植瘤的影响,以探讨将miRNA-101用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法 分子克隆技术构建miRNA-101重组腺病毒表达载体,MTT法检测细胞增殖能力,MilliporeTranswell小室法检测细胞迁移能力,Matirgel法检测细胞侵袭能力,q-PCR定量分析各基因表达水平,使用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立胃癌皮下移植瘤模型。结果miRNA-101在胃癌组织中的表达量为（0.661±0.396）,低于所对应的癌旁组织（1.128±0.697）,差异有统计学意义（t=10.091,P＜0.01）。胃正常上皮细胞GES-1中的miRNA-101表达量高于胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、MKN-45和AGS。miRNA-101对MKN-45细胞的增殖能力呈现明显的抑制作用,对胃癌细胞BGC-823、SGC-7901、MKN-45、AGS的迁移和侵袭均有抑制作用。选取MKN-45细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型后5周,Ad-miRNA-101组肿瘤体积为（333.56±46.71）mm3,小于Ad-EGFP组（806.41±51.83）mm3,差异有统计学意义（t=21.431,P＜0.01）。结论在胃组织中,miRNA-101是一个抑制性miRNA,miRNA-101表达水平下调参与胃癌的发生和发展。miRNA-101将有可能成为胃癌生物靶向治疗的新靶点。     

乌骨藤粗提物对大鼠胶质瘤C6细胞的体外实验研究

目的 观察乌骨藤粗提取物(MTE)不同组分对大鼠C6胶质瘤细胞增殖情况的影响,探讨其作用机制.方法 采用新型四氮唑盐法(MTS)检测MTE的Fr1、Fr2、Fr3组分对C6细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Fr2对C6细胞凋亡和周期的影响;采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测不同浓度Fr2对C6细胞的Bax、Bcl-2表达的影响.结果 MTE的Fr1、Fr2、Fr3均能显著抑制C6细胞的增殖(JP＜0.05),与阳性对照组5-氟尿嘧啶(5-FU)相比抑制率也较高(P＜0.05),其半数抑制浓度分别为:60.32、52.30、83.83 μ g/ml.经80、160 u g/ml的Fr2处理24 h后,可有效促进C6细胞早期和晚期凋亡(P＜0.05),其周期被阻滞在G2期;Fr2相同方式处理后,C6细胞中Bax表达水平分别提高到(124.80±7.68)％和(380.30±6 91)％;Bcl-2表达水平分别降低到(84.20±3.10)％和(34.20±4.80)％(P＜0.05).结论 MTE能够显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖,其中主要有效成分Fr2能够诱导C6细胞发生G2期周期阻滞,并通过影响Bax和Bcl-2的表达,促进其凋亡.     

紫草素诱导自噬抑制胰腺癌细胞增殖的实验研究 张

目的：探讨紫草素是否通过诱导自噬来抑制胰腺癌细胞增殖。方法：采用噻唑蓝比色法 （MTT法）研究紫草素对胰腺癌细胞Bxpc-3的增殖抑制作用     

联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质

目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例（58.3%）肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1（SBP1）表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础.     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。