人卵巢癌相关自然反义转录子的系统筛选

目的 高通量地筛选人卵巢癌相关的自然反义转录子,为深入研究自然反义转录子在卵巢癌发生、发展中的作用奠定基础.方法 以人正常卵巢组织和卵巢癌组织为材料,用RNase Ⅰ保护分析法分离出两种组织中的正-反义转录子双链RNA,经逆转录后用抑制性消减杂交特异性扩增两种组织间的差异片段,最后对差异片段克隆、测序.结果 分离出的两种组织的正-反义转录子经克隆和鉴定后,共获得20个测序结果,其中有3个分子与卵巢癌等肿瘤可能密切相关,说明该方法可用于肿瘤相关NAT分子的系统筛选,并为深入研究卵巢癌相关NAT分子提供了靶标.     

Androsterone在血管内皮细胞Eahy926中对SR-BI表达的影响

目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)表达的调控.方法 FXR配体androsterone不同浓度处理Eahy926细胞,RT-PCR检测FXR特异靶基因小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)表达量的变化.RT-PCR和Real-time PCR分析经androsterone处理后Eahy926细胞中SR-BI mRNA表达的变化.用Western blot检测SR-BI蛋白表达的变化.结果 经androsterone刺激,Eahy926细胞中SHP的表达明显升高,表明FXR被活化.在经androsterone刺激的血管内皮细胞中,SR-BI在转录水平和翻译水平,表达均显著上升.结论 FXR可在血管内皮细胞系Eahy926中上调SR-BI的表达水平.

Abstract：

Objective To investigate the effect of FXR on scavenger receptor class B type Ⅰ(SR-BI) expression.Methods Human vascular endothelium Eahy926 cells were treated with FXR agonist androsterone,and the specific target gene of FXR SHP mRNA was detected by RT-PCR. SR-BI mRNA and protein were determined using RT-PCR, real-time PCR and Westem blotting. Results The level Of SHP mRNA in Eahy926 cells increased after androsterone treatment at different concentrations for 24 h,demonstrating FXR activation in the cells.RT-PCR,real-time PCR and Western blotting detected increased SR-BI expression at both mRNA and protein levels after FXR activation.Conlusion FXR increases the expression of SR-BI in human vascular endothelium cells.     

肝X受体对血管内皮细胞EA.hy926内皮素1表达的调节作用

目的 研究肝X受体(liver X receptor,LXR)对血管内皮细胞珠EA.hy926中内皮素1(endo-thelin-1,ET-1)表达的影响,并初步探讨LXR调节ET-1表达的分子机制.方法 在培养的EA.hy926中加入LXR的特异性配体GW3965,作用28 h后收集细胞及培养上清液.细胞经Trizol法提取总RNA,以RT-PCR检测ET-1 mRNA水平的变化,以放射免疫法测定细胞上清液ET-1含量的变化;将克隆有ET-1启动子区的荧光素酶报告基因质粒phET1-Luc(克隆于pGL3-Basic)、pCMX-LXRα、pCMX-RXRα和内参照质粒psv-β-gal共同转染于EA.hy926细胞,经荧光素酶报告基因检测研究LXR对ET-1启动子活性的影响,从而初步了解LXR调节血管内皮细胞ET-1表达的分子机制.结果 LXR特异性配体GW3965能够抑制血管内皮细胞EA.hy926中ET-1的mRNA和蛋白表达水平,并且抑制ET-1启动子的转录活性.结论 活化血管内皮细胞LXR可下调ET-1的表达,且该作用与LXR抑制ET-1基因启动子的活性有关.     

法尼醇 X 受体对 HepG2 细胞蛋白 C 表达的影响及机制的初步研究

目的 观察法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的天然激动剂鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)对HepG2细胞蛋白C(protein C,PC)表达的影响,探讨其引起变化的可能机制. 方法 以不同浓度(25、50、75 μmol/L)FXR激动剂CDCA刺激HepG2细胞,RT-PCR分别检测各组细胞FXR特异性靶基因小异源二聚体伴侣分子 (small heterodimer partner,SHP)及PC mRNA表达变化,并用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析各组PC的表达量;ELISA检测各组细胞培养上清液中PC蛋白分泌量的变化;瞬时转染结合报告基因检测在人胚肝L02细胞中转入组成性活化的FXR表达质粒(VP-FXR),观察PC启动子活性的改变. 结果 经FXR配体CDCA刺激的HepG2细胞,随着CDCA浓度的增高,SHP、PC mRNA的表达逐渐增高,细胞培养上清液中PC蛋白表达也逐渐升高,呈剂量依赖性;在人胚肝L02细胞中,活化的FXR可增强PC启动子的活性约2.9倍. 结论 CDCA活化FXR引起HepG2细胞中PC mRNA和蛋白表达的升高,其调控机制与PC启动子的活化相关.     

法尼酯X受体在增强胎肝细胞中对B类清道夫受体Ⅰ表达的研究

目的 探讨法尼酯x受体(farnesoid X receptor,FXR)在肝细胞中对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B type Ⅰ,SR-BI)表达的影响及可能机制.方法 用FXR的特异性激动剂GW4064刺激胚胎肝细胞L02,经RT-PCR检测FXR特异性靶基因SHP(small heterodimer partner)mRNA的表达;经RT-PCR、荧光实时定量PCR和Western blot检测SR-BI的表达;在线分析、预测SR-BI基因启动子区中FXR的可能结合位点;最后经RT-PCR检测FXR的靶基因PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)mRNA的表达.结果 FXR的特异性配体GW4064作用于L02细胞后,SHP mRNA表达明显上调,表明FXR在L02细胞中具有功能活性.FXR活化后可在转录和翻译水平上调SR-BI的表达,同时上调PPARγ的表达.经在线分析,未在SR-BI启动子区域找到FXR的经典结合位点.结论 FXR在肝细胞中可上调SR-BI的表达,其机制可能与上调PPARγ有关.