青蒿素基于PI3K/AKT信号通路对人急性髓系白血病细胞凋亡的作用机制

目的分析青蒿素基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的作用机制。方法以44例AML患儿原代细胞及K562细胞株4株为研究样本,平均分为对照组、实验组(分别加入12.5、25.0、50.0μg/ml青蒿琥酯),细胞计数法观察72 h内细胞生长趋势,采用流式细胞术检测不同浓度青蒿琥酯对细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白(PI3K、AKT、P-AKT、Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN)的表达。结果 AML原代细胞、细胞株K562 24 h内细胞存活率≥80%,对照组AML原代细胞、细胞株K562 48～72 h细胞存活率仍≥70%,而实验组AML原代细胞、细胞株K562培养48 h细胞存活率均降至50%以下,且明显低于对照组(P<0.05);青蒿琥酯呈浓度依赖性诱导人AML原代细胞及K562细胞株凋亡,且25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率低于12.5μg/ml组及对照组(P<0.05),25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养48 h后,实验组原代细胞及K562细胞株的PI3K、P-AKT、Bcl-2均明显下调(P<0.05),而Bax、caspase-3、PTEN表达上调(P<0.05),且青蒿琥酯浓度为25.0μg/ml组各项指标变化最明显,AKT无明显变化(P>0.05)。结论青蒿素类衍生物青蒿琥酯可经PI3K/AKT信号通路调节其Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN等凋亡相关蛋白表达,促进人AML细胞凋亡,25μg/ml浓度时效果较佳。     

噬血细胞综合征患儿细胞因子的变化与临床分析

目的:探讨噬血细胞综合征(HLH)患儿血清中细胞因子的变化及意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患儿入院时IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平变化,与健康对照组进行比较。HLH组各细胞因子间相关性分析采用Spearman rank相关性分析。结果:HLH组患儿血清IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ及新碟呤水平均升高,与健康对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α升高不明显,与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-10与NF-Kβ及新碟呤均呈正相关(r=0.747 P<0.05,r=0.567 P<0.05),IL-18与IL-12、TNF-α也呈明显正相关(r=0.542 P<0.05,r=0.686 P<0.05)。结论:IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤在HLH发病机制中起重要作用,IL-10和新碟呤明显升高和IL-18、IL-12及NF-Kβ中等程度的升高对儿童HLH早期诊断有重大意义。     

婴儿白血病的诊疗进展

<正>婴儿白血病(infant leukumia,IL)非常罕见,由于其常伴有严重的临床表现,对现有治疗手段的耐受性低,以及其越来越多的新治疗靶点出现,引起了越来越多研究者的兴趣。由于IL患儿常表现出的严重临床表现,使得其初期治疗面临挑战性。IL尽管给予最大限度的加强治疗,包括化疗或者化疗加造血干细胞移植HSCT,但是仍然存在治疗后复发等方面问题。随着分子生物学技术的发展和治疗方法的改进,分子     

白血病细胞可变铁池的检测及其意义

为了研究细胞可变铁池（1abile iron pool,LIP）的检测方法,用不同浓度的去铁胺（DFO）与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小时,用钙荧光素（caicein）负荷K562及HL-60细胞,荧光分辨仪检测细胞荧光量;用快速铁螯合剂螯合铁,使恢复荧光,然后计算2次荧光差值.结果表明：浓度为50和100μmol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后,荧光值明显高于对照组（P＜0.05）,且LIP的荧光差值（△LIP）随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低,即呈一定的时间及剂量依赖性.结论：DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;calcein AM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法.     

噬血性淋巴组织细胞增生症20例

目的 探讨噬血性淋巴组织细胞增生症(HLH)的临床特点.方法回顾性分析2009年4月-2010年5月本院血液科收治的20例HLH患儿临床表现及血常规、肝功能、血液生化、病原学、免疫学检测、血清铁蛋白及骨髓涂片检查等实验室指标,参照HLH-2004治疗方案治疗.结果患儿主要表现为持续发热,肝、脾、淋巴结大,全血细胞减少,肝功能受损,凝血障碍,低纤维蛋白血症,高三酯甘油血症,自然杀伤细胞比例降低.12例中性粒细胞＜1.0×109 L-1,16例Hb<90 g·L-1,18例血小板<100×109 L-1,血细胞二系降低者18例,三系同时降低12例.ALT升高20例,AST升高18例,LDH升高20例,胆碱酯酶升高13例.三酰甘油升高18例,血清铁蛋白＞1 500 μg·L-1 8例,ESR增快9例;CRP增高11例,自然杀伤细胞比例降低12例,骨髓增生活跃17例,增生低下3例,12例骨髓涂片找到噬血细胞.20例发病与感染相关者中,与EB病毒感染相关性噬血细胞综合征3例,巨细胞病毒感染相关4例,铜绿假单胞菌感染1例.治愈3例,好转15例,疗效不佳自动出院2例.结论 HLH临床表现多样,及时诊治可改善预后.     

青蒿虎酯对人急性髓系白血病原代细胞及其细胞株K562增殖和凋亡的影响研究

背景　目前急性髓系白血病（AML）长期治疗仍面临着高复发率、治疗相关死亡风险及化疗相关毒副作用等多重挑战。而青蒿素作为我国学者首次从菊科植物黄花蒿中提取出的化合物（青蒿琥酯为其类衍生物）,其近年来在白血病、肿瘤疾病治疗中的作用逐渐引起广泛关注。目的　探究青蒿虎酯对人AML原代细胞、细胞株K562增殖和凋亡的影响。方法　采用密度梯度法分离2016年10月-2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的骨髓液中的AML原代细胞。并购买AML细胞株K562进行研究。将AML原代细胞及细胞株K562均分为对照组和实验组（依次为对照组1和实验组1,对照组2和实验组2）,其中对照组1及对照组2不予青蒿琥酯干预,实验组1和实验组2分别添加终浓度为12.5、25.0、50.0 μg/ml的青蒿琥酯液（分别记为终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1及终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2）。采用细胞计数法观察AML原代细胞、细胞株K562存活情况;采用MTT法检测其生长抑制情况;采用流式细胞术检测其凋亡情况。结果　终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞存活率低于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预72 h AML原代细胞存活率低于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML细胞株K562存活率低于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预72 h AML细胞株K562存活率低于终浓度12.5μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。结论　青蒿琥酯能够有效抑制AML原代细胞及细胞株K562的增殖并诱导其凋亡,可为青蒿素治疗AML提供实验依据。     

中枢神经系统白血病患儿脑脊液β2-MG、IL-2、IL-6水平测定

为了解β2-微球蛋白(β2-MG)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)合并中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia,CNSL)患儿脑脊液中的变化,作者以血象正常的外科手术患儿及ALL不伴CNSL患儿为对照,观察了26例ALL伴CNSL     

银杏叶提取物对在体缺血保存再灌注后肺组织ICAM-1和P-选择素基因mRNA表达的影响

目的 探讨银杏叶提取物对在体缺血冷藏再灌注后肺组织ICAM-1和P选择素基因mRNA表达的影响。方法 新西兰白兔30只。随机分为3组：对照组、LPD组和GBE组．建立兔在体缺血冷藏再灌注模型，对照组左肺不灌注肺保护液，阻断左肺门后直接将左肺下叶载体冷藏于10℃肺保存器内2h，再灌注2h；LPD组左肺门阻断后经肺动脉灌注LPD液，余同对照组；GBE组灌注液为合银杏叶提取物（Ginkgo Biloba Extract，GBE）的LPD液，余同LPD组。分别于左肺门阻断前、缺血2h、再灌注2h取左肺组织，RTPCR技术检测P-选择素和ICAM-1基因mRNA的表达；免疫纽化技术检测P-选择素和ICAM-1基因蛋白质产物量。结果 三组在缺血前及缺血2h再灌注前P—selectin基因mRNA表达量及其蛋白质产物免疫组化评分组间均未有显著性差异。再灌注2h后，GBE组P—selectin基因mRNA表达量厦其蛋白质产物免疫组化评分显著低于LPD组和对照组。，缺血前，所有三组ICAM—1基因mRNA表达量均未有显著性差异，在缺血2h后再难注前及再灌注2h后，ICAM—1基因mRNA表达量及其蛋白质产物免疫组化评分在GBE组均显著低于对照组和LPD组。结论 银杏叶提取物可抑制P—selectin和ICAM—1基因mRNA的表达上调，使肺组织P—selectin和细胞间粘附分子-1蛋白产物减少，从而减轻保存肺的缺血再灌注损伤。银杏叶提取物作为肺保护液添加剂，在进一步研究后可以试用于临床肺移植，为中药提取物的开发应用展示了光明的前景。     

HL-60细胞铁池变化与凋亡相关基因关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞铁池改变对凋亡相关基因表达的影响及可能的分子机制。方法实验分组为去铁胺(DFO)组、DFO+三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测HL-60细胞LIP、流式细胞术观察HL-60细胞凋亡和RT-PCR测定HL-60细胞bax、c-myc、rbmRNA表达。结果(1)不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。(2)不同浓度的DFO作用于HL-60不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、rb和baxmRNA表达(P<0.05)。结论DFO通过螯合细胞内铁,降低HL-60细胞LIP,诱导细胞凋亡;诱导HL-60细胞凋亡的作用可能与其降低细胞动态铁池,上调细胞凋亡相关基因c-myc、rb、baxmRNA表达密切相关。     

铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制

目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测A值（570nm）,绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺（DFO）（12.5μmol/L）处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加（25、50、100μmol/L）,细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO（50、100μmol/L）处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异（Pa〈0.001）。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。