不同菌量感染大鼠尿路对尿道上皮组织CNF1、CD36蛋白表达水平的影响

目的探讨尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)的量与尿路感染模型大鼠尿道上皮组织细胞毒性坏死因子(CNF)1蛋白及CD36蛋白表达水平的关系。方法将50只6~8周龄雌性SD大鼠作为研究对象,随机选取10只作为对照组,其余40只用于感染不同梯次的UPCE建立尿路感染模型,分别为10^1CFU组、10^2CFU组、10^3CFU组和10^4CFU组,每组10只。感染5 d后,定量大鼠尿道上皮组织与尿液菌量,qRT-PCR检测CNF1 mRNA和CD36 mRNA水平,Western印迹检测CNF1蛋白和CD36蛋白表达水平。结果各组尿道上皮组织和尿液菌量均有显著差异(P<0.05),在10^1CFU组、10^2CFU组、10^3CFU组和10^4CFU组中,尿道上皮组织和尿液菌量依次升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、10^1CFU组、10^2CFU组、10^3CFU组和10^4CFU组中,CNF1和CNF1 mRNA表达水平依次升高,CD36和CD36 mRNA表达水平依次降低,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。尿道上皮组织和尿液菌量与CNF1表达呈正相关(P<0.05),与CD36表达呈负相关(P<0.05)。结论感染大鼠尿路菌量越高,其尿道上皮组织菌量、尿液菌量和CNF1表达越高,CD36表达越低,尿道感染可能与高菌量影响CNF1和CD36表达相关。     

大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达

背景：过氧化物酶体增生因子活化受体α是调节心脏脂肪酸氧化的重要核转录因子,利用基因工程技术构建其重组腺病毒载体对研究心脏能量代谢障碍机制具有重要意义。目的：构建大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体,评价其在原代培养的乳鼠心肌细胞中的表达效率。方法：采用RT-PCR法自SD大鼠肝脏扩增过氧化物酶体增生因子活化受体α基因,将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒载体pAd-Track-CMV。线性化重组穿梭质粒载体并转化入含有腺病毒骨架质粒pAd-Easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。用脂质体将线性化的重组腺病毒载体质粒转染于人胚肾293细胞以包装、扩增,纯化病毒后计算滴度。用纯化的重组腺病毒转染心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞过氧化物酶体增生因子活化受体αmRNA、蛋白表达。结果与结论：成功构建携带大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为3.5×1011pfu/L。重组腺病毒转染心肌细胞的效率达90%以上,被转染细胞目的基因mRNA、蛋白表达显著增高。该载体的成功构建为研究过氧化物酶体增生因子活化受体α基因在心肌能量代谢障碍中的作用奠定基础。     

基于精细化管理模式下对医学实验室安全管理的探究

医学高等院校实验室是培养医学生创新能力的主要场所,其建设和管理水平是高校科研实力、学科建设实力和人才培养能力的综合体现。将精细化管理模式引用到医学实验室安全管理中,为学生提供一个安全保障的实验环境,才能更有利于实验的顺利开展和高校对人才的培养。本文主要对医学实验室安全管理存在的主要问题进行剖析,并基于精细化管理模式下通过对强化安全教育管理、保障人员配备、引进现代化管理办法等方面创新实验室安全管理进行阐述,为医学高等院校实验室现代化建设提供基本保障。     

水通道蛋白3在人胎盘和胎膜中的表达及分布

目的 研究正常妊娠晚期人胎盘和胎膜水通道蛋白3(AQP3)的表达及分布.方法 收集5例正常足月妊娠剖宫分娩的胎盘和胎膜样本,用RT-PCR测定AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织中的表达;用Western印迹和免疫组织化学方法检测AQP3蛋白质水平在胎盘和胎膜的表达.结果 RT-PCR显示AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织均有表达.Western印迹结果显示胎盘组织在29 000左右有一特异性条带.免疫组织化学结果显示AQP3表达于合体滋养细胞,而在羊膜上皮细胞未见表达.结论 AQP3在胎盘母儿液体平衡中可能发挥重要作用.     

Toll样受体2在人胎盘和胎膜组织中的表达

目的 检测正常胎盘和胎膜组织中Toll样受体2(TLR2)的表达.方法 收集5例足月剖宫分娩胎盘和胎膜样本,运用RT-PCR法检测胎盘和胎膜组织中TLR2 mRNA的表达,运用免疫组织化学和Westen blot印迹方法检测TLR2蛋白质在胎盘和胎膜组织中的表达.结果 RT-PCR显示在mRNA水平,胎盘和胎膜组织中均有TLR2表达;Westen blot印迹显示TLR2抗体在胎盘和胎膜组织中相对分子质量为50000左右的位置有一条明显的条带;免疫组化研究显示TLR2在胎盘的合体滋养细胞、胎膜的羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜滋养细胞中有表达.结论 TLR2在人胎盘和胎膜组织中的表达,提示其在妊娠期先天性免疫中可能发挥重要作用.     

乌鲁木齐地区MRSA的分子分型及耐药性研究

目的：研究乌鲁木齐地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的分子分型及其耐药情况。方法：收集金黄色葡萄球菌163株,PCR方法扩增mecA及pvl基因,检测MRSA及pvl检出率,用SCCmec、spa、MLST等方法对MRSA进行分型,VITEK2进行药敏测定。结果：MRSA检出率39.3%,pvl阳性率45.3%,HA-MRSA为87.5%,CA-MRSA为10.9%,未定型MRSA1株。有SCCmec型5种、spa型12种及ST型6种,其中HA-MRSA以ST239-MRSA-Ⅲ-t030、ST239-MRSA-Ⅲ-t037和ST5-MRSA-Ⅱ-t002为主,CA-MRSA以ST59-MRSA-Ⅳ-t437为主,耐药结果显示未发现耐万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等MRSA。结论：乌鲁木齐地区MRSA较低,以HA-MRSA为主,MRSA的多种药物敏感性呈下降趋势,值得重视。     

广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及耐药性分析

目的 了解广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)分子型别及其对临床常用抗生素的耐药情况,为防控MRSA感染提供依据.方法 收集2010年10月至2011年4月广州地区两家教学医院临床分离的MRSA 142株,应用SCCmec、spa、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)等方法进行分子分型,检测这些菌株对苯唑西林、克林霉素等17种临床常用抗生素的药物敏感性,分析临床MRSA的耐药情况.结果 142株MRSA中121株为医院获得型金葡菌(HA-MRSA),20株为社区获得型金葡菌(CA-MRSA),1株未定型MRSA.这些MRSA可分为16种spa型,8种ST型及13种PFGE型.HA-MR-SA中的ST239-MRSA-Ⅲ-t030、ST239-MRSA-Ⅲ-t037和ST5-MRSA-Ⅱ-t002为主要流行克隆,也发现CA-MRSA中ST59-MR-SA-Ⅳ-t437克隆的流行,且这些流行克隆有特定的耐药谱.结论 广州地区流行的金葡菌仍以HA-MRSA为主,同时也有一定量的CA-MRSA检出和传播,且CA-MRSA的多重药物敏感性已在下降.     

黄芩药材中2’，5，6＇,7-四羟基二氢黄酮醇的分离与鉴定

目的：分离并鉴定黄芩药材中2＇,5,6＇,7-四羟基二氢黄酮醇。方法：依托以LipidA为靶点的抗内毒素（LPs）药物筛选平台,应用大孔吸附树脂、膜和高效液相色谱法对黄芩水提液进行针对LipidA的逐级分离纯化,对所得目标化合物采用质谱、核磁共振和红外光谱等技术进行结构解析。结果：从黄芩水提液中分离出活性化合物5KL-1B,其与LipidA的特异性结合值为208．6arc seconds,结构鉴定确证5KL-1B为2＇,5,6＇,7-四羟基二氢黄酮醇。结论：本试验建立的定向分离模式目的性强、效率高,可用于天然药物中抗LPS活性物质的富集与分离纯化。     

大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达☆

背景:过氧化物酶体增生因子活化受体α是调节心脏脂肪酸氧化的重要核转录因子,利用基因工程技术构建其重组腺病毒载体对研究心脏能量代谢障碍机制具有重要意义. 目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体,评价其在原代培养的乳鼠心肌细胞中的表达效率. 方法:采用RT-PCR法自SD大鼠肝脏扩增过氧化物酶体增生因子活化受体α基因,将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒载体pAd-Track-CMV.线性化重组穿梭质粒载体并转化入含有腺病毒骨架质粒pAd-Easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒.用脂质体将线性化的重组腺病毒载体质粒转染于人胚肾293细胞以包装、扩增,纯化病毒后计算滴度.用纯化的重组腺病毒转染心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞过氧化物酶体增生因子活化受体α mRNA、蛋白表达. 结果与结论:成功构建携带大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为3.5×1011 pfu/L.重组腺病毒转染心肌细胞的效率达90%以上,被转染细胞目的基因mRNA、蛋白表达显著增高.该载体的成功构建为研究过氧化物酶体增生因子活化受体α基因在心肌能量代谢障碍中的作用奠定基础.