食蟹猴静脉注射抗HER2人源化抗体急性毒性研究

目的 评价抗HER2 人源化抗体的急性毒性。方法 将食蟹猴随机分为4 组,包括溶媒对照和抗HER2 人源化抗体75、150 和250 mg/kg 组,单次iv 溶媒对照组或供试品,进行各项毒理学指标检测。结果 给药后各组动物临床症状、体质量、摄食量、体温、心电图、血压和血液学检测均未见明显异常;血清生化结果显示,150 mg/kg 组与250 mg/kg 组动物给药后血清IgG 水平出现一过性增加;各组动物均未见大体病理学改变。结论 食蟹猴单次iv 抗HER2 单抗,总体上动物具有良好的耐受性,最大耐受剂量可达250 mg/kg,这些结果为进一步临床前评价抗HER2 人源化单克隆抗体的安全性奠定了基础。     

大鼠尿中酶类参考值检测

目的调查正常大鼠尿液样本中酶类参考值范围。方法采集95只正常SD大鼠的4 h尿液,用生化仪检测尿液中的N-乙酰基-β-D氨基葡萄糖酶(NAG)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰氨基转移酶(γ-GT)和乳酸脱氢酶(LDH)的值,参考范围以95%百分位上界表示。结果参考值范围为,雌性:NAG<5.3 U/L,ALP<110.8 U/L,γ-GT<753.0 U/L,LDH<32.6 U/L;雄性:NAG<27.3 U/L,ALP<329.0 U/L,γ-GT<769.8 U/L,LDH<40.0 U/L。以/g Cre为单位的参考值范围,雌性:NAG<28.9 U/g,ALP<723.5 U/g,γ-GT<1763.2 U/g,LDH<113.1 U/g;雄性:NAG<84.3 U/g,ALP<680.2 U/g,γ-GT<2522.3 U/g,LDH<121.8 U/g。结论尿中酶类参考值范围为药物肾毒性评价提供了背景数据。     

Beagle犬药物诱导急性肾损伤模型的研究

目的建立顺铂诱导的Beagle犬急性肾损伤模型,为开展肾毒性生物标志物研究奠定基础。方法通过对Beagle犬单次静脉注射3、4和5 mg/kg顺铂,探讨采用顺铂建立急性肾小管损伤模型的给药方案。密切观察动物给药后临床症状,测定不同时间点的传统血清及尿液新型肾损伤生物标志物的动态变化,在试验结束时解剖动物并进行肾脏组织病理学检查。结果Beagle犬单次静脉注射3 mg/kg顺铂后,临床症状轻微,随后恢复正常。组织病理分析结果显示该动物肾脏发生了损伤病变,包括轻度肾小管变性、坏死或再生;而动物在接受4 mg/kg和5 mg/kg顺铂给药后,动物临床症状严重,并发生濒死和死亡,肾脏也出现了中度肾小管变性、坏死或再生,以及轻度的间质、炎性细胞浸润和肾小管蛋白管型。血清和尿液生物标志物检测结果显示3 mg/kg顺铂给药剂量,动物体内尿素氮和肌酐仅轻微升高,而尿液中丛生蛋白、白蛋白、骨桥蛋白和单核细胞趋化蛋白-1浓度在给药后明显升高,且持续增长。结论Beagle犬单次静脉注射3 mg/kg顺铂可成功构建轻度损伤的急性肾小管损伤模型,为后续在非啮齿类动物中发现早期、灵敏、特异的药物临床前肾毒性生物标志物研究奠定了基础。     

SD大鼠单次及重复28天给予尿素毒性研究

目的：开展SD大鼠在单次及重复28天经口给予尿素的毒性研究,评价其毒性风险。方法：以尿素为受试物,分别采用单次和重复28天给予2种给药方案。单次给药毒性试验中,将20只SD大鼠分为对照组(给予去离子水)和给药组(给予尿素,10000 mg·kg^-1),受试物经口灌胃给予,之后连续观察临床症状并测定体重,给予尿素后第15天进行大体病理学检查。重复28天给药毒性试验将80只SD大鼠分为4个剂量组,即对照组(给予去离子水)、100 mg·kg^-1组、300 mg·kg^-1组和1000 mg·kg^-1组,每组 20只。连续28天经口灌胃给予受试物,观察动物临床症状,定期测定体重及摄食量。末次给药前进行眼科学检查和尿生化检测;末次给药结束后进行血液学、血液凝固和血清生化学检测,采集脏器称重并进行组织病理学检查。结果：试验期间,所有给药组动物在给药后观察期内均未见异常临床症状。连续给予尿素28天后,给药组动物体重、摄食量与同期对照组比较均未见显著统计学差异(P＞0.05),各项血液学检测、血液凝固和血清生化学检测,所有称重的组织脏器与同性别对照组动物比较均未见显著性差异(P＞0.05),且眼科学检查未见异常,对照组和给药组所有动物的主要组织器官的病理学检查均未见异常。但给予尿素可导致动物尿液中尿蛋白含量升高(P＜0.01)、尿颜色加深(P＜0.01)和尿比重升高 (300 mg·kg^-1组与对照组相比,P＜0.05;1000 mg·kg^-1组与对照组相比,P＜0.01),该现象与给药组动物体内大量尿素经肾脏代谢有关。结论：本研究单次经口给予尿素后未见动物死亡,认为其半数致死率的剂量在10000 mg·kg^-1以上。大鼠对尿素的最大耐受剂量和未见毒性反应剂量均为1000 mg·kg-1。     

单克隆抗体药物临床前安全性评价中的几个问题

单克隆抗体的本质是免疫球蛋白,与化学小分子药物和中药制剂相比,具有较慢的分布动力学、半衰期长、免疫原性强等特点.有些单克隆抗体的作用机制还不完全清楚,因此在单克隆抗体安全性评价实际操作时有一定难度.综述单克隆抗体临床前安全性评价中所遇到的问题,诸如动物种属/模型选择、药理/毒理学研究和免疫原性研究,为单克隆抗体的临床前安全性评价提供值得借鉴的方法和评价依据.     

荧光定量PCR技术在基因治疗药物组织分布研究中的应用

介绍应用荧光定量PCR技术对基因治疗药物组织分布研究的实验方法。从以下几个方面,即定量PCR技术原理、实验设计思路、各种检测方法的比较来说明这一问题。其中,可以使用的检测方法包括紫外定量法和引入内参基因法,后者又可以分为外标法和内标法。充分对比了这些方法的优缺点,并结合本实验室的研究现状,介绍了本监测中心在选用外标法进行研究时所取得的一些成果和实验经验。     

抗HER2靶点抗体偶联药物大鼠重复给药毒性研究

目的：通过对大鼠尾静脉重复注射给药重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1,对其进行临床前安全性评价。方法：大鼠随机分成5个试验组,包括空白对照组、受试物低（5 mg·kg^-1）、中（11 mg·kg^-1）、高（22 mg·kg^-1）剂量组和已知对照药品组（22 mg·kg^-1,Kadcyla?）,每组30只动物,雌性各半。尾静脉注射给药,每周给药1次,连续给药3次,末次给药后恢复3周。研究期间,在不同时间点对动物临床症状、体重、摄食量、体温、尿液、血液学、血清生化及组织病理学等指标进行检测。结果：给药后,动物出现一定程度的不良反应,且作用强度呈剂量依赖性递增。毒副反应症状包括摄食量减少、尿液pH值改变;血液学检查发现,动物Lymph、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、APTT下降,WBC、Neut、Mono、Eos、Baso、Retic计数升高;血清生化检查发现,动物TG、A/G、Na⁺、K⁺下降,ALT、AST、ALP、GGT、CHO、LDH、BUN、TP升高;骨髓检查发现,受试物影响动物红系细胞成熟分化;受试物引起动物肝脏、脾脏、肺（含支气管）重量增加,睾丸、附睾重量减少;组织病理学检查发现,肝脏、肾脏、脾脏、垂体、肾上腺、舌、皮肤细胞有丝分裂项增加,睾丸生精细胞数目减少和变性坏死,附睾精子减少和纤维组织增生。对照品组动物,给药后出现上述同样的改变。试验结果表明,受试物和已知对照药品两种药物的大鼠毒性研究结果具有相似性。结论：大鼠尾静脉重复注射给予重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1后,毒性靶器官为肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、肺（含支气管）、肠系膜淋巴结、十二指肠、睾丸、附睾、眼球、垂体、肾上腺、皮肤、舌、胸骨（骨髓）。未见毒性反应剂量（NOAEL ≤ 5 mg·kg^-1）。上述研究结果支持该药物成功获得临床试验批准,为后续开展临床研究提供了参考依据。     

HSV-1基因转移载体在荷瘤裸鼠体内的生物分布研究

目的 研究HSV-1基因转移栽体在BALB/c荷瘤裸鼠体内的生物分布.方法 BALB/c裸鼠注射人乳腺癌MCF-7细胞制备肿瘤模型,瘤体内注射1×107pfu HSV-1,每2天给药1次,共给药3次.分别于给药后24h、5d和17d采集组织脏器,采用Taqman实时荧光定量PCR法,检测不同组织脏器中HSV-1基因拷贝数.结果 成功制备裸鼠肿瘤模型.在不同时间点,肿瘤中检测到的病毒载体最多,且随着时间延长不断增加;淋巴结、背根神经节和性腺中也有较高水平的病毒载体;其他组织器官中病毒载体量较少.结论 HSV-1能为基因转移提供有效、安全的载体平台,并能用于构建溶瘤基因治疗产品.     

荧光定量PCR技术在基因治疗药物组织分布研究中的应用

介绍应用荧光定量PCR技术对基因治疗药物组织分布研究的实验方法。从以下几个方面,即定量PCR技术原理、实验设计思路、各种检测方法的比较来说明这一问题。其中,可以使用的检测方法包括紫外定量法和引入内参基因法,后者又可以分为外标法和内标法。充分对比了这些方法的优缺点,并结合本实验室的研究现状,介绍了本监测中心在选用外标法进行研究时所取得的一些成果和实验经验。     

顺铂诱导的Beagle犬急性肾损伤模型中尿液生物标志物研究

目的:应用顺铂诱导Beagle犬急性肾损伤模型,评价新型尿液生物标志物的诊断效能.方法:通过对Beagle犬单次给予3 mg·kg-1顺铂静脉注射(iv),建立了急性肾损伤模型,应用ELISA和Luminex液相芯片方法检测分析尿液中9种新型生物标志物浓度,并与传统血清指标尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)进行比较,结合肾...