乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达、纯化及血清学评价

目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原,表达产物经液相层析纯化;用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽抗原进行评价。结果重组质粒pET22b-JEB经双酶切,其插入的外源基因片段为372 bp,与预期DNA片段大小一致。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约16kD的外源基因蛋白带,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA血清学评价,表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论成功构建了表达载体pET22b-JEB,在原核系统中表达的B区多肽抗原具有良好的血清学检测价值。     

氟康唑对HIV感染者口腔白色念珠茵抗真菌后效应的体外研究

目的评估氟康唑体外最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）和检测暴露于小剂量氟康唑后白色念珠菌口腔分离株的抗真菌后效应（post—antifungal effect,PAFE）。方法将白色念珠菌标准株和10株临床分离株分别暴露于4×MIC和6×MIC的氟康唑后,使用自动化的浊度分析测撮法检测白色念珠菌PAFE的存在。结果由4×MIC和6×MIC的氟康唑在RPMI1640液体培养基巾诱导的白色念珠菌标准株产生的PAFE平均持续时问分别为0．12h和3．14h;诱导的10株临床分离株产生的PAFE持续时间平均分别为（0．19±0．24）h和（2．08±0．25）h。其中6×MIC氟康哗的PAFE在临床菌株内差异有统计学意义（P=0．000）,而×MIC氟康唑的PAFE在临床菌株内差异没有统计学意义（P=0．529）。结论氟康唑能有效地抑制白色念珠菌的生长,在白色念珠菌中引起PAFE。     

2012-2014年广东省哨点医院诺如病毒GII.4 Sydney变异株流行状况及暴发疫情特征分析

目的：分析2012年1月至2014年6月广东省哨点医院诺如病毒GII.4 Sydney变异株流行状况,以及由诺如病毒GII.4 Sydney变异株感染引起的暴发疫情特征。方法2012年1月至2014年6月在广东省选取22家医院的门诊科室为监测哨点,将采集的腹泻病例粪便样本（共10750份）送至市级CDC,进行病毒核酸提取及诺如病毒核酸检测,所有阳性样本递送至广东省CDC,并按照随机数字法抽取了855份进行诺如病毒基因分型,共成功测序样本690份。采用χ2检验比较不同年龄组、不同时期内腹泻病例诺如病毒感染情况。通过广东省突发公共卫生事件管理信息系统,收集2012年1月至2014年6月广东省13起由诺如病毒GII.4 Sydney变异株感染引起的社区暴发疫情数据,进行社区流行病学分析。结果2012年8月首次检出诺如病毒GII.4 Sydney变异株,2012年11月检出比例为13/15。2012年11月至2013年1月（T1时期）,各月份中腹泻病例诺如病毒感染阳性率分别为23.8%（100/421）、15.9%（61/383）、19.2%（95/495）,2013年11月至2014年1月（T2时期）,各月份中腹泻病例诺如病毒感染阳性率分别为17.0%（90/529）、8.7%（37/426）、11.2%（46/409）,均低于T1时期（χ2值分别为6.65、9.93、10.74,P值分别为0.010、0.002、0.001）。T1时期内≥15、<15岁组腹泻病例诺如病毒感染阳性率分别为26.3%（143/543）、14.9%（113/756）（χ2=25.90,P<0.001）;T2时期≥15、<15岁组阳性率分别为10.1%（52/516）、14.3%（121/848）（χ2=5.09,P=0.024）。13起暴发疫情中,食源性传播占10/13。结论广东省2012年8月首次检出诺如病毒GII.4 Sydney变异株,2012年11月起呈现社区流行,流行1年后,强度降低;由诺如病毒GII.4 Sydney变异株引起的暴发疫情主要以食源性传播为主。     

2010年珠江广州段至出海口微表层水重金属污染状况监测

目的:了解2010年珠江广州段至出海口微表层水重金属污染状况。方法:从2010年1月开始,每月中旬在珠江流域广州段上、中、下游及出海口处设置24个固定采水点,采集珠江微表层水。用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)法测定水样中的砷、镉、铅、铬重金属含量。结果:Cd属轻微检出,As、Pb和Cr虽然整体含量稳定,但特定采样点、特定时间曾同时出现异常高含量。结论:珠江广州段及经广州的出海口微表层水受到以上4种重金属不同程度的污染,防控污染仍是当前刻不容缓的重任。     

广州地区儿童急性呼吸道感染患者中偏肺病毒的感染调查

目的 了解广州地区14岁以下急性呼吸道患儿人类偏肺病毒(humanmetapneumovirus,hMPV)的感染情况,分析广州地区儿童感染hMPV的流行病学特征及临床特征,为hMPV的预防和治疗提供一些依据.方法 2006年9月至2008年8月,在广州某医院的儿科门诊及住院部的急性呼吸道患儿中采集521份鼻咽拭子标本,提取总核酸,用逆转录聚合酶链反应(RT-PER)扩增hMPV的核蛋白(N)基因的213个核苷酸片段,对16份强阳性的扩增产物进行测序和序列分析,同时对采集病例的流行病学资料进行统计分析.结果 521份标本用RT-PCR方法检测后,共有39份标本为N基因阳性,检出率为7.49%,hMPV发病高峰期在10月和4月份,对N基因进行序列测序与分析,结果与北京株BJ1897N基因的同源性高达99%,与泰国AY550156株N基因的同源性高达97%,基因型别以B型为主.结论 广州地区的儿童急性呼吸道感染中hMPV感染是原因之一,且以6岁以下的儿童感染为主,但不同性别的感染率差异无统计学意义,感染hMPV的临床症状主要表现为:高热、咳嗽、头痛、咽痛、卡他症状、肺部影像学改变等,其中大部分患者表现有高热和咳嗽,且有41.03%的hMPV患者合并感染其他呼吸道病毒.     

广东省疾病预防控制机构传染病实验室现状调查分析

目的了解广东省各级疾病预防控制机构传染病实验室的现状。方法采用填写调查表,并结合现场调查核实的方式,对广东省46家不同级别的疾控机构传染病实验室进行人员情况、设备设施及检测能力的调查。结果(1)人员情况:高级职称、中级职称、初级职称及以下所占比例分别为15.57%、30.94%、53.49%,博士、硕士、本科、大专、中专及以下学历所占比例分别为2.20%、7.98%、33.93%、26.75%、29.14%,各级别实验室不同职称、不同学历人员构成上差异有统计学意义(均P<0.01)。(2)实验室设施和仪器设备:省、市级疾控中心二级生物安全实验室覆盖率为100%,县区级疾控中心仅66.67%建有二级生物安全实验室;省级疾控中心微生物实验室设备达到了标准配置数,地市、县区级疾控中心基本购置了微生物检测所必需的仪器,但达不到标准配置数。(3)检测能力:省级疾控中心、地市级疾控中心、县区级疾控中心的检验项目实际开展率分别为91.39%、59.57%、46.70%。结论广东省地市级和县区级疾控机构传染病实验室检测设备配置数量普遍达不到要求,必需开展的检验项目实际开展率偏低。说明各级政府对疾控机构传染病实验室重视不够,投...     

2008年广东省手足口病实验室检测结果分析

目的对广东省2008年手足口病实验室检查结果进行分析,了解2008年广东省手足口病病原学特征,为实验室诊断手足口病提供参考。方法采集2008年4—12月广东省各地送检的292例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液等标本426份和98名手足口病病例接触者的粪便、肛拭子和咽拭子等标本98份,应用RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)。结果292例手足口病患者的426份各类样本中,检测到肠道病毒阳性267份,EV71病毒特异性基因片段阳性169份,CVA16特异性基因片段阳性36份,EV71和CVA16病毒核酸同时阳性3份。292例手足口病病例中,EV71的检出率较CVA16高,分别为50.68%(148/292)和11.99%(35/292),20例手足口病死亡病例均为EV71感染病例。手足口病病例粪便样本的肠道病毒、EV71和CVA16的检测阳性率最高,分别为76.72%(178/232)、45.26%(105/232)和14.66%(34/232),且在发病9 d后仍能检测到EV71病毒。98名手足口病病例接触者的各类样本中,分别检测...     

2008--2009年广东省手足口病病毒分离和鉴定

目的了解广东省手足口病病原特征,为科学防治手足口病提供依据。方法采集2008-2009年广东省疑似手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液、脑脊液等标本,对其中肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用肠道病毒通用引物、EV71引物、CoxAl6引物进行RT—PCR鉴定。结果对892份肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离,共分离出毒株484株,分离率为54．26％;其中EV71型302株,占62．40％;CoxAl6型143株,占29．55％。2008年和2009年不同类型标本的病毒分离率差异均有统计学意义（均P〈0．01）,2年均以粪便标本的分离率最高,分别为70．79％（126／178）和73．89％（232／314）;不同类型病例的病毒分离率之间差异无统计学意义（P〉0．05）,2年死亡和重症病例均以EV71型为主。结论2008—2009年广东省手足口病疫情主要由EV71和CoxAl6引起,今后应加强对多种病原及其变异情况的监测。     

广东省福氏志贺菌F4c的病原学特征分析

目的了解广东省新型福氏志贺菌F4c菌株的流行与病原学特征。方法对2000—2004年广东省痢疾监测收集的227株志贺菌进行血清学分型,并对其中46株福氏志贺菌F4c菌株以及2004、2007年2起痢疾暴发监测收集的5株和2005年散发病例收集的2株F4c菌株（共53株）进行生化、血清学试验、药敏试验和PFGE分型;并用气相色谱仪测定其中6株的脂肪酸成分。结果 2000—2004年广东省痢疾监测发现：227株志贺菌除20株为宋内氏志贺菌外,其余均为福氏志贺菌,其中F2a的菌株数最多,有55株（占菌株总数的24.2%）,其比例从2000年的44.0%下降至2004年8.6%,F4c有46株,占20.3%,从2000年未检出F4c菌株,至2003年F4c占菌株总数的比例上升至71.7%（38/53）。53株F4c的生化结果符合志贺菌特征,血清学均为福氏多价＋,IV型因子＋,7,8群血清＋;53株F4c菌株对头孢曲松、诺氟沙星、头孢噻肟和环丙沙星4种药物敏感,敏感率分别为100.0%、92.9%、92.9%、71.4%,对四环素、复方新诺明、萘啶酸、氯霉素和氨苄西林均产生耐药,除氨苄西林的耐药率为91.7%外,其余均达到100.0%。PFGE对43株F4c进行分子分型,共分为21个不同的型别;6株志贺菌F4c的主要脂肪酸成分为12∶0酸、14∶0酸、Sum In Feature2、Sum In Feature 3、16∶0酸、17∶0 cyclo、Sum In Feature 8和19∶0 cyclo w8c等8种脂肪酸。结论福氏志贺菌4c菌株用PFGE进行分子分型在整体上表现出较大的遗传多样性;福氏志贺菌4c在广东省的流行出现上升趋势,并在部分地区暴发疫情,提示F4c菌型可能逐步演变成为一类稳定的福氏志贺菌菌株。     

3′端锚定随机引物检测与鉴定未知DNA病毒方法研究

目的建立一种用3′端锚定随机引物检测与鉴定未知DNA病毒核酸的方法。方法将本实验室分离到的1株DNA病毒分离物用过滤器过滤后,加入适当的核酸酶消化,提取消化物中的病毒核酸,分别用3′锚定随机引物RP1和RP2对上述病毒核酸进行PCR扩增,凝胶电泳并纯化该PCR产物,纯化后的PCR产物与T载体连接并转入JM109感受态细胞,蓝白斑筛选挑选阳性克隆进行测序,登录NCBI网站,利用BLAST软件进行序列比对和确认。结果凝胶电泳显示2种3′端锚定随机引物PCR产物大小均在500bp以上,并呈涂布状,RP1的PCR产物较RP2小;分别挑取RP1和RP2随机引物PCR产物克隆各7个,分别有6、2个克隆携带有目的病毒核酸片段,挑取上述8个阳性克隆进行测序,其中获得500bp以上的序列7条,500bp以下序列1条,其中最长的达741bp,最短的398bp;序列分析证实这些片段均与腺病毒2型同源性最高,同源性高达98％～99％。结论RPI和RP2引物均能成功鉴定目标病毒,且RP1较RP2具有更高的扩增效率和敏感性。初步建立一种利用3′端锚定随机引物检测与鉴定未知DNA病毒的方法。