医学留学生药理学全英语教学实践

留学生教育是我国声等教育的一个重要组成部分。了解留学生的特点,选用适宜药理教材,提高教师综合素质,完善药理课堂教学,对留学生教育进行适时反馈和总结,是提高留学生药理教学的重要措施。     

HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

目的：构建HCV NS3基因真核表达载体，为进一步研究和解析HCV NS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法：将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1-3011质粒转化感受态菌JM109并扩增；提取pBRTM/HCV1-3011质粒；从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCV NS3片段；并将其插入到克隆载体pMD18-T中，再与表达载体pcDNA3.1(-)重组，以得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3；最后限制性酶切鉴定HCV NS3表达载体。结果：从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCV NS3片段大小正确，经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列；凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3.1/NS3内。结论：成功地构建了HCV NS3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。     

α2，6-唾液酸转移酶（ST6GalⅠ）的表达对结肠癌细胞唾液酸化的影响

目的 研究结肠癌细胞LS174T转染正义和反义的α2，6唾液酸转移酶(ST6GalⅠ)cDNA对结肠癌细胞表面唾液酸化及肿瘤细胞粘附功能的影响．方法 结肠癌细胞株LS174T转染正义ST6GalⅠcDNA或反义ST6GalⅠcDNA的部分序列的表达载体pcDNA3.1，以RT—PCR检测转染子ST6GalⅠmRNA的表达．流式细胞仪检测细胞表面α2，6唾液酸含量．结果 转染正义ST6GalⅠcDNA的克隆显示ST6GalⅠmRNA的表达增强以及接骨木凝集素(SNA)与细胞表面成分的结合增加；而转染反义ST6GalⅠcDNA的部分序列的细胞克隆的ST6GalⅠmRNA的表达减少．SNA与细咆表面成分的结合力降低．结论 ST6GalⅠ的表达直接影响细胞表面α2．6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的粘附功能利用反义核酸技术抑制ST6GalⅠ的表达并降低肿瘤细咆表面α2，6-唾液酸水平可能成为减少癌细胞转移的一种手段．     

细胞表面唾液酸及其连接方式对乳腺癌细胞黏附的影响

目的 研究肿瘤细胞总唾液酸及α2，6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法 乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2，6唾液酸转移酶（ST6Ga1-I）cDNA，以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2，6唾液酸细胞克隆．检测各转染细胞的同源凝集作用，并比较唾液酸酶处理前后肿瘤细胞对胶原Ⅳ黏附力的变化。结果 顺义转染克隆细胞．细胞之间的同源黏附能力下降．与胶原Ⅳ的黏附增强；反义转染克隆细胞-细胞之间同源黏附能力增强，而与胶原Ⅳ的黏附降低。唾液酸酶处理后肿瘤细胞与胶原Ⅳ的黏附力下降至未处理前的31％-57％。结论 乳腺癌MDA-MB435细胞表面唾液酸及α-2，6唾液酸化对肿瘤细胞的黏附有重要影响。     

反义寡核苷酸对Daudi细胞α2,6唾液酸的下调作用研究

 目的　研究反义寡核苷酸对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞α2 ,6 唾液酸转移酶 (ST6GalI)的活性和细胞表面α2 ,6 唾液酸水平的下调作用。方法　以修饰后的ST6GalI的反义寡核苷酸处理Daudi细胞 ,以RT PCR检测Daudi细胞ST6GalImRNA的表达 ,荧光定量法测定ST6GalI的活性及以流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6 唾液酸的含量。结果　和对照组比较 ,以反义寡核苷酸处理的Daudi细胞ST6GalImRNA的表达下调 ,ST6GalI酶活性下降 ,并导致细胞表面α2 ,6 唾液酸水平降低。结论　反义寡核苷酸可有效降低Daudi细胞表面α2 ,6 唾液酸化水平 ,内源性减少α2 ,6 唾液酸对Daudi细胞CD2 2受体的屏蔽作用     

结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定

目的 从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定.方法 以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒.然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG.结果 通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符.测序结果与报道一致.结论 成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.     

妊娠相关糖蛋白Glycodelin抑制E型选择素介导的细胞黏附

目的探讨来源于孕妇羊水和血清的高纯度Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响程度。方法以色谱仪分离和纯化孕妇羊水和血清的Glycodelin,测定铬51标记的肝癌细胞系-HepG2细胞在不同来源、不同浓度Glycodelin作用下和重组E型选择素的黏附能力,从而评价Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响。结果血清和羊水Glycodelin能有效抑制Hepg2细胞和重组E型选择素之间的黏附,其抑制作用呈浓度依赖关系,其相对抑制力分别为纯四糖结构Sialyl-Lewisx(sLex)的9.4×105和4.0×105倍。结论妊娠相关糖蛋白Glycodelin高度抑制E型选择素介导的细胞黏附。     

角质细胞生长因子对1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用

目的观察角质细胞生长因子(KGF)对胸腺上皮来源1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用。方法鼠胸腺上皮髓质和皮质来源的1C6细胞、4C18细胞和鼠腹腔巨噬细胞来源的RAW细胞,分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培养液(对照组)作用24、48和72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,并绘制细胞增殖率曲线。结果 MTT法检测显示,在低浓度(200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为200ng/ml时,1C6细胞增殖率达最高值;在高浓度(200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对1C6细胞均具有明显的促增殖作用(均P0.05)。在低浓度(100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为100ng/ml时,4C18细胞增殖率达最高值;在高浓度(100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为50、100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对4C18细胞均具有明显的促增殖作用(均P0.05)。但不同浓度的KGF对RAW细胞均未见促增殖作用。结论 KGF对胸腺上皮来源的1C6细胞和4C18细胞均具有明显的促增殖作用。     

姜黄素类似物L50H8 对卵巢癌OVCAR3细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及其机制研究

目的:研究姜黄素类似物L50H8对卵巢癌OVCAR3细胞增殖、侵袭与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法检测L50H8对细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式细胞法检测L50H8对细胞凋亡的影响;Transwell法检测L50H8对细胞侵袭力的影响;Western blot法探讨L50H8影响细胞侵袭的机制:检测其对细胞侵袭相关因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶(MMP) 2、MMP9和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响;探讨其诱导细胞凋亡的机制:检测其对内质网应激(ERS)启动因子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)及前凋亡因子C/EBP-同源蛋白(CHOP)表达的影响。结果:L50H8能显著抑制OVCAR3细胞增殖,24 h的IC50为(3.08±0.08)μmol/L。L50H8能诱导OVCAR3细胞凋亡,其凋亡诱导效应强于姜黄素。Western blot法发现L50H8能下调CD147、MMP2、MMP9及VEGF的表达,上调GRP78及CHOP的表达。结论:L50H8能显著抑制OVCAR3细胞增殖,通过下调CD147、MMP2...     

姜黄素对bFGF诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的 通过观察姜黄素（Cur）对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）增殖的影响,探讨Cur治疗乳腺癌的作用机制.方法 将人乳腺癌细胞MDA-MB-231用含10%胎生血清的RPMI-1640培养基培养.同时根据加入Cur的不同浓度将实验分为7组：空白对照组、bFGF组（bFGF 5 ng/ml）、干预1组（bFGF 5ng/ml＋Cur 1 μmol/L）、干预2组（bFGF 5ng/mI＋Cur 2.5 μmol/L）、干预3组（bFGF 5 ng/ml＋Cur 5 μmol/L）、干预4组（bFGF 5ng/ml＋Cur 10 μmol/L）、干预5组（bFGF 5 ng/ml＋Cur 20 μmol/L）,并在倒置显微镜下观察各组细胞形态,通过MTT法检测Cur对细胞增殖的影响.结果 bFGF组可显著促进人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的增殖,与对照组的差异有统计学意义（P〈0.05）,且其作用随着处理时间的延长而增强.各干预组均可显著抑制人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的增殖,且呈时间和浓度依赖性.结论 Cur可有效抑制bFGF诱导的人乳腺癌细胞增殖,可能为其用于乳腺癌治疗的机制所在.