乙肝患者血清抗原与抗体双阳性两对半模式与HBV-DNA和体液免疫检测结果分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者HBsAg阳性的血清学标志物少见模式与HBV-DNA和体液免疫的关系。方法：选择63例HBsAg阳性患者其血清中检出同一种抗原抗体同时存在（HBsAg与HBsAb同时阳性或 HBeAg与HBeAb同时阳性）,以HBeAg是否阳性为标准分为2组：HBeAg阳性组（n=26）与HBeAg阴性组（n=37）。采用时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）定量测定乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）;采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测HBV-DNA含量;采用Olympus AU6400全自动生化分析仪检测免疫球蛋白（IgG、IgA 、IgM）和补体（C3、C4）。结果：63例HBsAg阳性的血清学标志物少见模式表现为5种模式,以HBsAg（＋） HBsAb（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）模式检出率最高,占52.38%（33/63）;各少见模式均不同程度地检出HBV-DNA;HBeAg阳性组HBV-DNA、IgG、IgM和C4与HBeAg阴性组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;IgA和C3的差异均无统计学意义（P〈0.05）。结论：患者在慢性HBV感染过程中,血清出现抗原与抗体共存这一个特殊阶段,虽然有HBsAb的出现,但并不意味着HBV-DNA停止复制或传染性消失;不同血清学模式,其HBV复制和体液免疫水平是有差别的。     

鼻咽癌高癌家系不同体质证型鼻咽癌患者鼻咽病灶组织蛋白双向凝胶电泳分析

目的 建立鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者气虚体质证犁及湿热体质证型高分辨率双向凝胶电泳特征图谱,探讨其证本质相关性蛋白质组学特征.方法 设鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者气虚体质组、湿热体质组、其他体质证型组,散发性鼻咽癌患者组,鼻明癌高癌家系健康成员对照组,共计5组.分别获取鼻咽组织标本,提取总蛋白质,固相pH梯度双向凝胶电冰分离,经考马斯亮蓝显色后,Image Master 2D Elite4.01图像分析软件进行电泳结果分析.结果 各组标本均获得分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为860±20,854±25,842±30,867±20及857±15.比较分析,发现鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者气虚体质组与湿热体质组,差异蛋白质点10个.结论 鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者不同体质证型蛋白质谱发生了明显变化,提示同病异证存在不同的本质内涵,为进一步研究鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者中医体质证型的本质内涵提供了实验依据.     

HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

目的：构建HCV NS3基因真核表达载体，为进一步研究和解析HCV NS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法：将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1-3011质粒转化感受态菌JM109并扩增；提取pBRTM/HCV1-3011质粒；从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCV NS3片段；并将其插入到克隆载体pMD18-T中，再与表达载体pcDNA3.1(-)重组，以得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3；最后限制性酶切鉴定HCV NS3表达载体。结果：从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCV NS3片段大小正确，经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列；凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3.1/NS3内。结论：成功地构建了HCV NS3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。     

结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定

目的 从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定.方法 以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒.然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG.结果 通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符.测序结果与报道一致.结论 成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.     

佛山地区男性尖锐湿疣患者HPV感染现状及基因型分布

目的 探讨佛山地区男性尖锐湿疣患者中人乳头瘤状病毒（HPV）的感染情况、基因型别及其临床意义。方法 选择500例临床诊断为尖锐湿疣的男性患者,从送检样本中提取病毒基因组DNA,通过聚合酶链式反应对病毒DNA进行扩增后,利用基因芯片对扩增产物进行导流杂交和分型检测。使用Excel对数据进行整理,并用SPSS 16.0统计软件对数据进行统计学分析。结果 500例尖锐湿疣男性患者中有388例检出HPV DNA阳性,其检出率为77.6%(388/500)。感染人群主要集中在21~40岁年龄段,占55.8%（279/500）。检出HPV阳性的患者中,低危型HPV感染291例,检出率为58.2%(291/500);高危型HPV感染仅有16例,检出率为3.2%(16/500);混合型HPV感染81例,检出率为16.2%(81/500)。单一型别感染291例,检出率为58.2%（291/500）;多重感染97例,检出率为19.4%(97/500)。HPV单一感染患者中,感染亚型主要是HPV 6型,HPV多重感染以二重感染和混合型感染为主。结论 佛山地区男性尖锐湿疣患者HPV感染以感染低危型HPV 6型为主,好发年龄段主要集中在21~40岁;单一感染居多,多重感染则以混合型二重感染为主;且HPV感染引起的尖锐湿疣具有一定的地域性差异。     

老年2型糖尿病视网膜病变患者炎性指标与抗磷脂抗体水平变化的研究

目的观察老年2型糖尿病合并视网膜病变患者血清炎性指标和抗磷脂抗体水平的变化。方法选择老年2型糖尿病患者104例,根据有无视网膜微血管病变分为糖尿病无视网膜病变组(A组,32例)、糖尿病伴非增殖期视网膜病变组(B组,42例)和糖尿病伴增殖期视网膜病变组(C组,30例);检测各组患者血清中空腹血糖(FBG)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞计数(WBC)和抗心磷脂抗体(ACA)水平,并对检测结果进行统计学处理和分析。结果 FBG水平C组高于B组和A组,C、B 2组与A组比较,差异均有统计学意义(P0.05),B组与C组比较差异无统计学意义(P0.05);hs-CRP、ACA水平C组均高于B组和A组,3组间比较差异有统计学意义(P0.05);而WBC水平3组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论老年2型糖尿病患者hs-CRP、ACA水平与视网膜病变的严重程度密切相关,可作为预测老年2型糖尿病患者并发视网膜微血管病变的重要指标。     

联合检测CEA和CA199对结直肠癌的临床意义

目的:探讨单项及联合检测肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)与糖类抗原199(CA199)在结直肠癌患者手术前后的表达及临床意义.方法:利用化学发光免疫方法检测70例结直肠癌患者术前及术后化疗3个月血清CEA和CA199水平,分析CEA和CA199检测值与结直肠癌的诊断及术后化疗临床特征之间的关系.结果:结直肠癌患者术前血清CEA和CA199水平显著高于术后化疗与健康对照组(P<0.05),手术后,经过3个月的化疗,结直肠癌患者的CEA和CA199水平与正常健康人无显著性差异(P>0.05),联合检测既可以提高对结直肠癌诊断的阳性率,又可以对术后化疗的效果进行评价.结论:血清CEA和CA199联合检测可用于结直肠癌的辅助诊断以及预后的判断.     

抗核抗体定量与体液免疫指标及肝功能异常关系分析

目的探讨抗核抗体(ANA)水平与体液免疫指标的关系及其与肝功能异常检出率的临床意义。方法将2011年1月至2012年1月在该院住院接受ANA检查的患者160例,根据ANA测定结果分为阴性组(n=75)和阳性组(n=85),阳性组患者再根据ANA不同水平分为3个亚组,对其进行体液免疫和肝功能检测。分别比较各组免疫球蛋白和补体水平以及肝功能异常的情况。结果 ANA阳性组免疫球蛋白IgG和IgA水平明显高于ANA阴性组,而补体C3、C4水平低于ANA阴性组,差异有统计学意义(P<0.01);ANA阳性组免疫球蛋白IgM水平与ANA阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ANA阳性各亚组间免疫球蛋白和补体水平比较,随着ANA水平的增加,其血清免疫球蛋白水平逐渐升高,而补体水平明显下降,3组间进行方差分析,差异有统计学意义(P<0.05)。ANA阳性患者中检出肝功能异常者47例,占55.23%(47/85),其中,肝酶异常22例,占46.81%(22/47),总蛋白降低有26例,A/G倒置有22例,总蛋白、清蛋白/球蛋白比值(A/G)异常共38例,占78.72%(38/47)。结论 ANA水平与体液免疫变化有密切关系,ANA阳性患者肝功能损害与患者血清中存在多种自身抗体有密切关系,ANA高水平的患者,肝功能异常检出率较高,临床医生应予以重视。     

分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

目的 构建分泌型PD-L1真核表达载体，并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1（programmed death-1，PD-1）配体PD-L1的胞外段基因片段，定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质体将重组子导入NTT细胞，转染后的NTT命名为NITp。以Western blot鉴定重组蛋白的表达。MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响；用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响。结果 RT-PCR得到约730bp目的基因片段，测序结果显示该目的基因与Gen-Bank上的序列相符；Western blot分析提示NTTp分泌性表达目的蛋白；NTTp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖，其效应呈剂量依赖性；反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示，培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低，与正常对照组差异有统计学意义。结论 成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1，PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用，并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化。