基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

中药方剂辅助西医治疗急性脑梗死的疗效观察

目的探讨中药方剂辅助西医治疗急性脑梗死疗效及对过氧化氢酶(CAT)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法选取急性脑梗死患者共104例,随机分为对照组与观察组共52例,分别采用常规西医疗法和在此基础上辅以中药方剂治疗。比较两组临床疗效及治疗前后中医证候积分、美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、BI评分、全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降率、血小板聚集率、血管性血友病因子、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、CAT、VEGF及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平。结果观察组临床疗效显著优于对照组(P<0.05);观察组治疗后中医证候评分、NIHSS评分、BI评分、全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降率、血小板聚集率、血管性血友病因子、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间及纤维蛋白原显著优于对照组治疗后及本组治疗前(P<0.05);观察组治疗后CAT、VEGF及bFGF水平均显著优于对照组治疗后及本组治疗前(P<0.05)。结论中药方剂辅助西医治疗急性脑梗死可有效缓解神经损伤症状,提高生活质量,改善血液流变学指标,并有助于降低血液黏稠度;而中西医结合方案疗效更佳可能与其对于CAT、VEGF及bFGF水平具有更佳调节作用有关。     

四季抗病毒合剂治疗小儿新型冠状病毒肺炎的可行性分析

目的:探索四季抗病毒合剂治疗小儿新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的物质基础和潜在机制。方法:本研究以四季抗病毒合剂治疗小儿COVID-19的可行性为切入点,首先对四季抗病毒合剂的临床用药进行meta分析,然后采用网络药理学方法对抗炎成分、靶点和作用机制进行了探索性研究。最后通过分子对接技术,筛选对新型冠状病毒3CL水解酶有抑制作用的活性成分。结果:Meta分析结果显示,四季抗病毒合剂在治疗小儿呼吸系统感染方面具有较好的疗效和安全性,是具有治疗COVID-19潜力的复方。通过构建的"中药-成分-疾病-靶点"网络,筛选得到与干预COVID-19相关的活性成分88个,相关靶点24个。分子对接结果显示,黄酮类成分是四季抗病毒合剂中主要的抗病毒成分。结论:综合结果预测,四季抗病毒合剂可通过调控白介素-17(IL-17)信号通路和花生四烯酸代谢通路,缓解病毒感染诱发的全身免疫反应和炎症效应,达到"治标"作用;还可能通过抑制3CL水解酶,达到干扰病毒复制的"治本"作用。     

不同剂量丙种球蛋白治疗小儿川崎病的临床疗效

目的 探讨不同剂量丙种球蛋白治疗小儿川崎病的临床疗效及安全性。 方法 本研究将收集2012年1月—2016年12月住院的川崎病患儿按照数字表法随机分为对照组和治疗组，2组患儿均服用阿司匹林作为基础治疗，其中对照组给予丙种球蛋白1 g/(kg·d)静脉输注，使用1~2 d(若热不退用2 d)；研究组给予丙种球蛋白2 g/(kg·d)静脉输注，使用1 d。比较2组患者的临床治疗效果及不良反应发生情况。 结果 研究组患儿的退热时间较对照组明显缩短，且差异具有统计学意义(t=5.853，P＜0.05)；而2组患儿的黏膜充血、颈部淋巴结肿大及手足肿胀消退时间比较差异无统计学意义(t=1.418、1.552、0.719，均P＞0.05)。2组患儿治疗后白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)及血小板计数(PLT)等实验室指标均较治疗前明显改善(均P＜0.05)；治疗后2组间上述实验室指标比较差异无统计学意义(均P＞0.05)。治疗后，研究组有7例发生冠状动脉病变，对照组有13例发生冠状动脉病变，研究组患儿治疗后冠状动脉病发生率(14.00%)明显低于对照组(26.00%)，且差异具有统计学意义(χ2=4.089，P=0.043)。研究组有1例患儿在静滴丙种球蛋白后出现不良反应，表现为畏寒、恶心，减慢静脉滴注速度后缓解并最终消失，所有患儿未发生其他不良反应。 结论 对于川崎病，丙种球蛋白2 g/(kg·d)的治疗效果明显优于1 g/(kg·d)，且并发症少，发生冠状动脉病变率低，安全性高。      

Th17/Treg失衡与毛细支气管炎发病关系研究

目的探讨毛细支气管炎患儿外周血辅助T淋巴细胞17（Th17）/调节性T淋巴细胞（Treg）和相关细胞因子的水平与本病发展的关系。方法选取毛细支气管炎患儿83例为病例组,分为轻症组（42例）、中症组（21例）和重症组（20例）,同期健康体检的儿童30名为对照组。采用流式细胞学检测外周血辅助T细胞17（Th17）和调节性T细胞（Treg）占CD4+T细胞的比值,应用ELISA方法检测血清白细胞介素6（IL-6）、IL-10、IL-17和IL-35的浓度,比较各组间上述指标差异。结果病例组Th17细胞比值及其分泌的促炎因子IL-17、IL-6较对照组明显增高（P<0.05）,而Treg细胞比值及其分泌的抑炎因子IL-10、IL-35则明显降低,重症组愈加显著（P<0.05）。Pearson相关分析显示Th17与Th17/Treg、IL-17、IL-6呈正相关;Treg与IL-10、IL-35呈正相关,与Th17/Treg负相关;Th17/Treg、Th17和IL-17与IL-35负相关（P<0.05~P<0.01）。logistic回归分析显示Th17/Treg、IL-7和IL-6是重症毛细支气管炎的危险因素（P<0.05~P<0.01）。结论Th17/Treg失衡在毛细支气管炎发病中起着重要的作用,Th17/Treg、IL-17和IL-6是重症毛细支气管炎的危险因素。     

凤香洗液中“丁香-苦参”配伍干预子宫内膜癌的活性成分及作用机制预测分析

目的:基于网络药理学研究凤香洗液中“丁香-苦参”配伍治疗子宫内膜癌(EC)的作用机制。方法:使用中药系统药理学分析平台(TCMSP)对丁香-苦参的活性成分进行检索和筛选,通过Gene Cards数据库、OMIM数据库筛选EC相关靶点,构建活性成分-靶点网络图。将筛选到的靶点利用String数据库构建蛋白互作(PPI)网络,并进行GO功能注释和KEGG通路富集分析,最后构建活性成分-靶点-信号通路网络图。结果:共筛选到31个潜在活性分子,690个中药成分靶点,1627个EC相关靶点,药物-疾病的共同靶点146个,共同靶点以多种方式参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、凋亡过程的负调控等595个生物过程,并参与癌症通路、PI3K/Akt信号通路、乙肝通路、癌症蛋白聚糖信号通路等115条信号通路。结论:丁香-苦参通过作用于PTGS2、Akt1、PTGS1、RELA、PRSS1、MAPK1等靶点调控癌症、PI3K/Akt、乙肝、癌症蛋白聚糖等信号通路,从而发挥干预EC的作用。     

调肝汤联合温针灸治疗崩漏临床观察

目的:观察自拟调肝汤联合温针灸治疗崩漏的临床疗效。方法:将40例崩漏患者随机分为两组各20例,对照组予炔诺酮片治疗,治疗组予调肝汤联合温针灸治疗,连续治疗3个月后评价疗效。结果:治疗组的临床总有效率85.00%明显高于对照组的60.00%,组间比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗组在控制出血、完全止血方面优于对照组(P﹤0.05)。结论:调肝汤联合温针灸治疗崩漏疗效较好,优于单纯采用西药治疗。     

秦七风湿方HPLC指纹图谱研究

目的建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据。方法采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 m L/min;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认。结果建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro(12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷IVa(14号峰)、人参皂苷F2(17号峰)。结论所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据。     

秦七风湿方水提液和醇提液对巨噬细胞功能的影响

目的:研究秦七风湿方水提液和醇提液对巨噬细胞RAW264.7增殖和分泌一氧化氮(NO)的影响。方法:采用水煎煮和乙醇超声分别制备秦七风湿方水提液和醇提液,通过HPLC测定水提液和醇提液指标性成分含量;利用CCK-8研究水提液和醇提液对RAW264.7增殖的影响;通过Greiss法测定水提液和醇提液对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:含量测定发现醇提液的指标性成分含量高于水提液,说明不同提取溶剂所得秦七风湿方指标性成分具有差异;水提液和醇提液对RAW264.7增殖的影响呈现浓度依赖性,具有促进和抑制的作用;水提液和醇提液对LPS诱导的巨噬细胞分泌NO具有显著的抑制作用。结论:通过研究发现秦七风湿方水提液和醇提液对RAW264.7增殖和分泌NO均具有一定的影响,呈现浓度依赖性,并且初步证实了水提液和醇提液均具有一定的抗炎活性,为将其发展为治疗RA的临床新药提供理论参考。     

鞘内注射MRS2211对糖尿病神经痛大鼠脊髓炎症因子和JAK2/STAT3表达及NR2B磷酸化的影响

目的:观察鞘内注射MRS2211对糖尿病神经痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠脊髓背角IL-1β、IL-6及JAK2/STAT3和NR2B(p Tyr1336,p Tyr1472)表达的影响。方法:成年SD大鼠随机分为5组(n=8):(1)对照组(鞘内注射生理盐水)、(2)糖尿病组(糖尿病+鞘内注射生理盐水)、(3)~(5)DNP+MRS2211组(糖尿病+鞘内分别注射10、50、100 pmol/L MRS2211)。大鼠腹腔注射链脲菌素50 mg/kg,2周后热痛阈明显下降认为造模成功。随后鞘内给药2次/日,4周。STZ注射前1 d、注射后第2、4和6周末测定给药后热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);酶联免疫吸附试验测定背角IL-1β和IL-6表达,免疫印迹检测背角JAK2/STAT3和NR2B表达。结果:与对照组相比,糖尿病组TWL明显降低(P<0.01);鞘内分别给予10、50、100pmol/L MRS2211可明显缓解STZ注射4周时的TWL(P<0.05),但STZ注射6周时,抑制TWL效果不明显。与对照组相比,在STZ注射2、4和6周后糖尿病大鼠脊髓背角IL-1β、IL-6和STAT3以及p Tyr1336NR2B、p Tyr1472NR2B表达明显上调(P<0.01);在STZ注射4和6周后脊髓背角JAK2表达明显上调(P<0.01)。在STZ注射4周时,MRS2211(100 pmol/L)处理组脊髓背角IL-1β、IL-6、JAK2/STAT3表达下调(P<0.05),同时Tyr1336NR2B磷酸化减弱(P<0.05),但在STZ注射6周时抑制效果不明显。鞘内注射MRS2211(100 pmol/L)不影响糖尿病大鼠脊髓背角p Tyr1472NR2B磷酸化。结论:鞘内注射MRS2211可明显缓解DNP大鼠热痛敏症状,其机制可能与抑制脊髓背角IL-1β和IL-6表达,进一步下调JAK2/STAT3表达,间接抑制背角神经元p Tyr1336NR2B磷酸化有关。