人脂肪源性干细胞的分离及生物学性状的鉴定

目的 建立从人脂肪抽吸物中分离培养脂肪来源干细胞(ASCs)的方法,并从形态学、生长动力学、表面标记物和分化能力等方面进行鉴定.方法从4例行腹部脂肪抽吸术的健康成年女性患者获得脂肪组织,通过酶消化法分离和培养脂肪干细胞,并传代培养至20代,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定和比较第3、9、15和20代细胞生长...     

铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1～ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。     

醋酸锌对谷氨酸诱导的小鼠脑片即早基因过度表达的抑制作用

目的：探讨谷氨酸对脑组织即早基因表达的影响以及醋酸锌对谷氨酸诱导c-fos和c-jun过度表达的拮抗作用。方法：体外小鼠海马脑片培养；在培养基中加入200μmol/L的谷氨酸（或同时加入谷氨酸和醋酸锌），作用0.5,1,2,3h，然后进行RT-PCR实验，检测c-fos和c-jun的表达变化。结果：200μmol/L谷氨酸处理的脑片中，1-2h期间c-fos的表达升高，当谷氨酸与100μmol/L醋酸锌共同处理脑片时，1-3h期间c-fos表达基本恢复正常；200μmol/L谷氨酸作用下，脑片c-jun表达水平从0.5h起即明显升高，谷氨酸与醋酸锌共同作用时，可见c-jun基因在各检测时段表达基本接近正常。结论：谷氨酸可引起c-fos及c-jun的过度表达，锌离子可拮抗谷氨酸诱导的c-fos和c-jun过度表达作用，使二基因表达恢复正常。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

铅与幼鼠脑组织蛋白激酶C活性及记忆功能改变的关系

背景：铅暴露引起的动物学习记忆障碍与脑细胞中蛋白激酶C（protein kinase C．PKC)活性改变是否有关系呢?目的：研究慢性铅暴露下发育期小鼠大脑组织PKC活性变化规律及其对小鼠记忆发育的影响。设计：以实验动物为研究对象，随机对照的验证性实验研究。单位：卫生部细胞生物学重点实验室。材料：实验在中国医科大学生物化学与分子生物学实验室完成。选择五六周龄昆明种小白鼠72只。方法：以不同浓度的醋酸铅饲喂交配后的雌鼠，其幼崽通过哺乳和直接饮水接触铅。在幼崽生后1d(P1)，8d(P8)，15d(P15)，22d(P22)，30d(P30)将其分别处死，取出脑组织。采用[γ-^32P]ATP放射性磷标记法于体外测定铅暴露小鼠大脑组织的PKC的活性；另外取暴露于不同浓度醋酸铅的发育期小鼠，通过被动回避反应实验进行记忆行为学训练和测试，观察不同浓度的铅对小鼠记忆的影响。主要观察指标：①不同浓度铅暴露对发育期小鼠大脑组织内PKC活性的影响。②不同浓度铅暴露对发育期小鼠记忆行为的影响：结果：对幼鼠脑PKC的活性测定显示：在发育初期铅暴露小鼠脑中PKC活性高于正常，发育后期则低于正常，高浓度铅对PKC活性抑制较强；记忆行为学测试可见低浓度铅使小鼠发育初期记忆曲线升高，而使中长期记忆曲线减低；铅浓度升高，记忆曲线降低。结论：铅对小鼠大脑组织中PKC活性发育有抑制作用．铅浓度越高，抑制越明显；低浓度铅在短时间内似有刺激记忆的作用，长时间低浓度铅暴露使记忆抑制；高浓度铅使记忆能力降低作用更明显。铅对发育期小鼠脑中PKC活性及记忆功能的影响有一定的相关性。     

铅与幼鼠脑蛋白激酶C活性及记忆功能改变的关系

铅具有很强的神经亲和性 ,可在神经组织中蓄积 ,引起神经系统功能 (主要是学习记忆功能 )的长期损害[1～ 4 ] 。铅可干扰神经发育和学习记忆机制中的多个环节。现已知 ,铅通过对ＰＫＣ(ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ ,蛋白激酶Ｃ)的异常激活或抑制而干扰ＬＴＰ(长时程增强 )的形成和维持 ,并影响发育期大鼠脑海马中ＰＫＣ活性和ＰＫＣγ同工酶的分布[5～ 6 ] 。在本研究中我们在体外测定了铅暴露的不同发育期小鼠脑组织ＰＫＣ活性变化 ,并结合动物行为学测试 ,分析研究了不同浓度铅对不同发育期小鼠脑组织中ＰＫＣ活性变化及其对小鼠记忆功…     

寡核苷酸醛基芯片点样条件的优化

对点样探针的浓度、探针缓冲液的浓度及pH值对醛基玻片探针固定效果的影响进行了探讨,实验结果表明:pH=9、探针浓度为200mmol/L时,探针固定效果较好,所制备的芯片的灵敏度高.     

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用侯伟健，王殿鸿（基础医学院生物化学教研室）关键词肝细胞生长因子，受体，酪氨酸，磷酸化作用肝细胞生长因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）是一种无种属特异性，对肝细胞增殖和...     

肺癌与良性胸腔积液蛋白质双向电泳图谱差异分析

目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱进行分析,识别差异表达的蛋白质。结果:肺癌与肺良性胸腔积液的蛋白质组分布的基本框架很相似,并可发现二者之间有差异蛋白点;两种胸腔积液电泳图谱平均蛋白质点数分别为326±16和343±12,平均匹配点数为286±14和298±21,匹配率87.7%,86.9%.差异蛋白点82个,其中37个在肺癌胸腔积液中高表达,24个在肺癌胸腔积液中低表达。有17个点仅在良性胸腔积液表达,4个点仅在肺癌胸腔积液表达。结论:用双向电泳法得到了分辨率较高且重复率较好的肺癌与肺良性胸腔积液蛋白质组图谱,二者存在一些表达差异蛋白质。