雷公藤柱层析中段和末段组分的急性毒性实验

目的:比较雷公藤柱层析中段和末段组分对小鼠急性毒性和大鼠急性肝损伤的影响,评价中段和末段组分的毒性强弱和毒性物质基础,初步探讨中段和末段组分中成分与毒性的关系。方法:HPLC法测定中段和末段组分中6个有效成分(毒性成分)的含量。采用经典的急性毒性实验方法,Bliss法计算半数致死量(LD_(50))。SD大鼠单次灌胃中段和末段组分,观察急性肝损伤情况。给药后48 h眼眶采血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力,肝脏HE染色,光镜下观察肝组织形态学改变,原位末端转移酶标记技术(TUNEL染色法)检测中段和末段组分对肝细胞凋亡的影响。结果:中段和末段组分中所测成分的含量差异较大,LD_(50)分别为297.551、558.578 mg·kg~(-1)。大鼠灌胃后造成不同程度的急性肝损伤,与正常对照组比较,中段组分的高、低剂量组和末段组分的高剂量组均能明显升高大鼠血清中AST和ALT活性(P0.01),明显诱导大鼠肝细胞凋亡(P0.01)。结论:雷公藤柱层析中段组分毒性强于末段组分,毒性物质基础以二萜、生物碱类为主,毒性主要表现为急性肝损伤,毒性成分与毒性存在量效关系。     

核酸序列扩增早期诊断人类免疫缺陷病毒感染

人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)是艾滋病的病原体 ,ＨＩＶ的早期诊断具有非常重要的意义。目前 ,用于诊断ＨＩＶ早期感染的方法主要有细胞培养 (病毒分离 )、Ｐ2 4抗原检测和核酸检测。适合于ＨＩＶ的早期诊断[1 ,2 ] 。为此 ,我们采用核酸序列扩增对几组可能处于ＨＩＶ感染早期的高危人群的 86份样品进行了检测 ,并结合抗体检测结果进行分析 ,报告如下。一、材料和方法1 .研究对象 :来自四川、云南、河南和北京的ＨＩＶ 1抗体阳性母亲的婴儿、ＨＩＶ 1抗体阳性的配偶、ＨＩＶ 1抗体检测阴性 ,但自述近段时间有过高危行为的人群及发生针刺事故的…     

血清乙肝病毒DNA煮沸抽提法的建立和应用

目的 建立一种简便的血清HBVDNA抽提方法一煮沸抽提法，并将其应用于巢式PCR扩增。方法 选取16份CHB血清，分别应用直接煮沸法和异硫氰酸胍-酚／氯仿法进行HBVDNA抽提后，进行荧光定量PCR测定；并以煮沸法抽提样品为模板，进行HBVDNAP区部分片段巢式PCR扩增。结果 将上述两种抽提方法的荧光定量PCR结果取对数后进行直线相关分析和配对样本I检验，结果显示：两种方法的定量PCR结果之间存在良好的相关性(r=0．696，P=0．003)，且二者定量PCR结果无差异(P=0．663)。16份标本巢式PCR扩增均为阳性，PCR产物分子量大小与预期值相符。结论 直接煮沸法抽提HBVDNA，简便、快速、效果好，适用于HBV的科研和临床检测工作。     

非甲—庚型肝炎患者TT病毒感染的检测及序列分析

在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎及爆发性肝炎中，有相当比例的患者用现有甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎实验室诊断方法尚不能分型，在排除已知的致病因素外，仍有３．５０～１５％的肝炎病人病因不明。通常将这些不明原因的肝炎称之为非甲－庚型肝炎。１９９７年日本学者报道发现一种新的肝炎病毒，并命名为ＴＴ病毒（ＴＴＶ）［１］。我们根据日本报道的ＴＴＶ基因序列，建立套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）方法，在我国北京地区非甲庚型肝炎患者中检测出ＴＴＶ基因，并进行了序列分析，现将结果报道如下。材料与方法一、标…     

浙江省热原检查用兔敏感性状况调查

目的调查浙江省热原检查用兔对细菌内毒素的敏感性情况,为提高热原检查结果的准确性和可靠性提供参考。方法对全省所有取得生产许可证单位的家兔,用国家颁发的细菌内毒素标准品,"热原检查法"进行检查,剂量分别为5EU/Kg和10EU/Kg,记录并比较各单位家兔的平均升温值和升温率。结果对细菌内毒素,各兔场家兔的敏感性有一定的差异。静脉注射5EU/kg,平均升温值为0.40℃～0.87℃,升温率为35%～83%;静脉注射10EU/kg,平均升温值为0.74℃～1.16℃,升温率为70%～94%。结论不同生产单位的家兔对细菌内毒素的敏感性不同,有必要对热原检查用家兔进行细菌内毒素敏感性检查。     

元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响

目的采用血清药理学实验方法 ,观察元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物的影响。方法缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素E诱发小鼠痛经模型法,对大鼠离体子宫收缩活动的影响。结果元胡止痛胶囊的含药血清能减少缩宫素所致大鼠扭体反应次数和前列腺素E1所致小鼠扭体反应次数,并能拮抗缩宫素对大鼠离体子宫的收缩作用。结论元胡止痛胶囊的含药血清对痛经模型动物有镇痛作用,并对大鼠离体子宫收缩有解痉作用。     

丙泊酚、依托咪酯对小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响

目的观察丙泊酚、依托咪酯对小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响。方法制备孕9d雌性ICR小鼠子宫平滑肌肌条,采用Med—Lab—U／4cs生物信号采集处理系统记录不同浓度的丙泊酚（2．7、5．4、10．8ug／mL）和依托咪酯（0．2、0．4、0．8ug／mL）对子宫平滑肌收缩张力、强度、频率的影响。结果与基础值比较,2．7ug／mL的丙泊酚使子宫平滑肌的张力、强度降低（P〈0．05）,对其频率、活动力无影响（P〉0．05）;5．4ug／mL、10．8ug／mL丙泊酚使子宫平滑肌的张力、强度、活动力显著降低（P〈0．01）,对频率无影响;而三种浓度依托咪酯对子宫平滑肌的张力、强度、频率、活动力均无影响（P〉0．05）。结论浓度为2．7、5.4、10．8ug／mL的丙泊酚对子宫平滑肌收缩功能有浓度依存性抑制作用。     

临床诊断为非甲～戊型肝炎患者的病原学研究

目的探讨临床诊断为非甲-戊型肝炎患者的病原学。方法 采用巢式PCR（nPCR)检测HBV、TTV、B19、和SENV DNA；用逆转录巢式PCR（RT-nPCR)检测HGV和HCV RNA。结果 60例临床诊断为非甲-戊型肝炎患者中，单独HBVDNA阳性30例（阳性率为50.0%)，HBV和TTVDNA阳性10例（16.7%)，HBV和B19DNA阳性6例（10.0%)，HCVRNA、HBV和SENVDNA阳性1例（1.7%)，单独HCVRNA阳性1例（1.7%)，HCVRNA和B19DNA阳性1例（1.7%),HGVRNA无一例阳性，单独B19DNA阳性2例（3.3%)。单独TTVDNA阳性1例（1.7%)，另8例（13.3%)上述病毒核酸均为阴性。HBV合并感染TTV或B19对其血清学生化指标无影响。结论HBV是临床诊断为非甲-戊型肝炎的主要病原，HGV、TTV、B19和SENV与非甲-戊型肝炎无关。     

SARS病人外周血T淋巴细胞的动态变化及其在发病进程和发病机理中的意义

目的 :通过研究严重急性呼吸综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS)患者外周血免疫细胞的动态变化 ,探讨外周血免疫细胞在SARS发病进程中的意义 ,初步探讨SARS的发病机理 ,并为SARS的诊断和治疗提供有力的实验室依据。方法 :回顾性动态观察我院收治的已治愈SARS病例和SARS死亡病例外周血CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞 ,评估外周血免疫细胞在SARS发病进程及预后中的作用。实验方法为流式细胞术检测和分析免疫细胞表面特异性荧光抗体标记 ,T细胞表面标志组合为CD3 CD8 CD4 5 CD4。结果 :所有治愈的SARS病人的CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞都有不同程度的可逆性下降 ,而所有的死亡病例有不可逆性显著下降 ,直至死亡。T细胞下降程度和维持的时间与病情密切相关。普通型SARS病例最低CD4 + T淋巴细胞数为 30 5± 15 0cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 139± 6 9cells μl(P <0 .0 0 1) ,普通型SARS病例最低CD8+ T淋巴细胞数为 2 2 3± 89cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 171± 92cells μl(P <0 .0 0 1)。所有普通型病例和大部分重型病例T淋巴细胞恢复正常 ,个别重型病例低于正常或接近正常 ,恢复后普通型平均为 991± 2 86cells μl,重型平均为 5 4 5± 2 2 5cells μl。恢复时间有所不同 ,普通型平均为 17± 5天     

我国旋毛虫Ts254 DNA探针制备及序列测定

我国云南猪体旋毛虫分离株（ＢＳ）经随意扩增的多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法产生的２５４ｂｐ条带，以地高辛（ｄｉｇｏｘ－ｉｎｉｎ）标记制成探针（Ｔｓ２５４），将此探针与７株旋毛虫总ＤＮＡ进行斑点杂交，出现明显的杂交斑点，检出的ＤＮＡ量为１ｎｇ。但与其它相关寄生虫、质粒ｐＢＲ３２２、昆明株小鼠肌肉ＤＮＡ均未出现杂交反应，表明Ｔｓ２５４探针具有一定的特异性和较高的敏感性。将此Ｔｓ２５４ＤＮＡ片段克隆进Ｍ１３ｍｐ１８／１９噬菌体，扩增后，筛选阳性重组子，抽提单链后测序。经Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ序列数据库检索，Ｔｓ２５４序列与真核ＤＮＡ及结构ＲＮＡ序列无有意义的同源性，此旋毛虫ＤＮＡ序列为我国首次报道。