复合重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球的引导组织再生膜的制备

目的设计制备包含活性生长因子的引导组织再生生物膜(以下称功能性复合膜)。方法利用天然材料右旋糖酐(dextran,dex)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dextran-glycidylmethacrylate,dex-GMA)作为重组人骨形态发生蛋白-2(recombinedhumanbonemorphogeneticprotein-2,rhBMP2)新型缓释载体,采用乳化交联技术制备dex-GMA凝胶微球,考察其形态、溶胀系数、载药、释药及降解性能;以壳聚糖为材料,复合载rhBMP2的dex-GMA凝胶微球制备生物膜并对其进行生物学评价。结果dex-GMA在一定条件下可以成球;该凝胶微球溶胀、载药和降解性能良好,体外释药可达20d以上,利用简单的工艺就可以制备复合rhBMP2缓释载体的功能性复合膜,其理化性能与没有复合该缓释载体的生物膜没有变化。结论利用生长因子缓释载体可以制备功能性复合膜,其生物学性能有待进一步研究。     

载rhBMP2凝胶微球控释系统的设计与合成实验

目的:设计与合成rhBMP2新型控释载体,初步探讨其载药及降解性能。方法:用右旋糖酐 (dextran,dex)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(glycidylmethacrylate,GMA)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐 (dex GMA),测定该凝胶微球溶胀系数Q,并对其载药、降解性能进行初步研究。结果:dex GMA在一定条件下可以成球,粒径与制备工艺密切相关;该凝胶微球溶胀参数 10. 9±5. 3;载药性能良好,在葡聚糖酶的作用下 20~40d内可以完全降解。结论:右旋糖酐基凝胶微球具有良好的溶胀性能,可生物降解,其粒径可控,作为生长因子载体,有望达到控释给药的目的,其制备工艺及理化性能有待进一步研究。     

HEMA-胶原抗菌药物缓释膜的制备与性能测定

目的 :研制甲基丙烯酸羟乙酯 (HEMA) 胶原抗菌药物缓释膜 ,考察其各项性能 ,为进一步应用于临床奠定基础。方法 :制备包裹有磺胺嘧啶银 (SD Ag)的HEMA 胶原抗菌药物缓释膜 ,测定膜的物理特性、载药量和包裹率等 ,并采用动态透析法考察体外药物释放特性。结果 :制备后得到乳白色半透明状、均匀有弹性的凝胶膜状物。平均载药率为 4.97% ,平均包裹率为 99.3 4%。体外 4h内释放接近 5 0 %的SD Ag ,8h内释放近70 % ,48h释放 99%以上的药物。结论 :此制备方法简单快速 ,成膜性好。HEMA 胶原抗菌药物缓释膜的体外累积释放量测定结果明显好于对照组 (P <0 .0 0 1)。     

脐带间充质干细胞对重度烧伤大鼠肾脏保护作用的研究

目的：观察脐带间充质干细胞（UCMSCs）移植对大鼠严重烧伤后肾脏损伤的影响,为干细胞应用于烧伤后的脏器保护研究奠定基础。方法：获取并分离培养孕大鼠UCMSCs并用流式细胞技术鉴定细胞表面抗原。48只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（n=12）、生理盐水组（n=12）、乌司他丁组（n=12）和UCMSCs组（n=12）。正常对照组不作任何处理,立即活杀取材;其余3组制备20％TBSAIII度烧伤模型（98℃,12s）,于伤后48h分别静脉注射生理盐水0．1ml／g（生理盐水组）、乌司他丁1．6×105U／kg（乌司他丁组）和UCMSCs106／k（uCMSCs组）,于给药后7、14d观察大鼠肾脏组织病理学,免疫组化法观察组织凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并进行血尿素氮（BUN）、肌酐（cr）水平的测定。结果：烧伤后7、14d的组织病理学观察显示,干细胞移植后的大鼠烧伤后肾脏组织充血、肿胀等病理学改变较乌司他丁组及生理盐水组有所减轻,随时间延长减轻更加明显;免疫组化观察显示UCMSCs组伤后7d和14d肾组织中Bcl-2的表达较乌司他丁组和生理盐水组明显增多,表明肾组织抗凋亡能力增强。大鼠烧伤后BUN和Cr均较正常对照组显著升高。乌司他丁治疗组除14dBUN较生理盐水组升高外,其余时间BUN和Cr均明显下降。UCMSCs组伤后7和14d两肾功能指标均明显下降,与生理盐水组和乌司他丁组比较差异均有显著性（P〈0．05）,显示干细胞治疗对肾功能有明显改善作用。结论：UC—MSCs移植可有效减轻重度烧伤后大鼠‘肾脏组织的损伤并改善肾脏功能。     

沿皮浅刺脑缺血大鼠内关及公孙穴：细胞凋亡调控基因和血管活性物质的变化

治疗脑缺血的针刺多是将针刺入肌层及深部组织,从皮肤表层浅刺的治疗研究相对较少。实验以血栓法大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,沿皮浅刺其双侧内关、公孙,发现浅刺和常规针刺均能不同程度改善脑缺血模型大鼠神经功能,提高缺血脑组织抗凋亡基因bcl-2表达,抑制促凋亡基因bax及血清血管活性物质一氧化氮合酶及内皮素1表达,浅刺的调节作用更佳。     

血管内皮生长因子受体1及其可溶性受体亚型在血管新生中的作用

血管新生是指从原有的血管内皮细胞增殖、游走,形成新的血管网,并在原来存在的血管结构上长出新血管的生物学过程。血管新生参与体内许多重要生理和病理进程的发生发展。正常情况下血管新生仅发生在胚胎发育期（胚胎发育早期涉及血管发生,即血管从无到有的过程）,创伤愈合期和女性的生理周期等。病理条件下会出现异常的血管新生,如糖尿病血管病变、肿瘤等均伴随异常的血管新生。在生物体内,血管新生需经过多步精细调控历程,研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及其受体(VEGFR)所介导的信号级联通路是其中关键性的调节途径,对生理和病理性血管新生均有重要调节作用[1]。对VEGF/VEGFR信号传导通路作用机制的深入了解,有助于相关疾病的研究和新药的研发。其中有关血管内皮生长因子受体1(VRGFR?1,Flt?1)及其可溶性受体亚型(sFlt?1)的研究对于研究血管新生的病理生理机制十分必要,也是目前研究的热点和难点。     

复合汗腺的组织工程三维皮肤模型的构建

目的：运用组织工程化方法在体外建立复合汗腺的三维皮肤模型,阐明汗腺体外再生的可行性,并为初步建立含有汗腺的仿生化功能性组织工程皮肤奠定实验基础。方法：分离培养人表皮细胞、成纤维细胞和汗腺细胞,将表皮细胞与汗腺细胞按1：1的比例共培养,在培养体系中分别加入含表皮细胞生长因子（EGF）的微球,噻唑蓝（MTT）法观察细胞增殖情况,并与培养时直接加入EGF及不加EGF的对照组进行比较。将共培养的细胞接种于复合成纤维细胞的胶原基质并通过三维培养方式构建组织工程皮肤模型,在模型中加入复合EGF的微球释放载体促进汗腺再生和上皮化进程,HE染色和免疫组织化学方法检测所构建组织工程皮肤以及体外再生汗腺的结构,并与模型中直接加入EGF和未加EGF的对照组进行比较。结果：MTT检测结果显示,与两对照组相比较,通过共培养方式获得的表皮与汗腺细胞团在复合EGF微球作用下生长良好,有明显增殖作用;组织学观察结果显示所构建组织工程皮肤模型具有和正常皮肤相似的结构,并在真皮浅层形成了类似汗腺结构的细胞密集区域,存在大量汗腺特异性标志——角蛋白19（CK19）和癌胚抗原（CEA）阳性的细胞,这种现象在单纯EGF组仅有微弱表现,在空白对照组则无此现象出现。结论：构建具有汗腺结构的体外皮肤模型具有可行性,这为汗腺再生和功能性组织工程皮肤的研究开创了新的途径。     

间充质干细胞用于慢性创面治疗的作用途径及其相关机制

<正>间充质干细胞(MSCs)是一类存在于大多数成体器官中的类成纤维细胞群,在特定条件下能够向不同的谱系细胞分化。Falanga等[1]将MSCs与造血细胞共同培养,发现MSCs可以促进造血干细胞的增殖,提示MSCs具有分泌生物活性因子并调节其他细胞功能的能力。MSCs在进入创面或是其他损伤组织时会被激活,起到促进创伤愈合和改善局部缺血的作用。目前MSCs作用于创面的机制尚未完全清楚,但MSCs在调节免疫应答和免疫排斥反应方面的功能,以及在促     

组织工程皮肤修复皮肤缺损成功率与手术方法的相关性

背景：皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植，需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床，标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的：通过组织工程皮肤修复皮肤缺损，分析手术方法与愈合率的关系，为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。设计：随机对照观察。单位：解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科，组织病理学教研室，组织工程实验中心。材料：实验于2003-10／2004-03在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织工程实验中心完成。选用2．5-3月龄健康清洁级约克猪6只，随机分为3组：组织工程全层组、组织工程真皮＋自体表皮组、自体移植组，2只／组。每只猪制作8个直径50mm的圆形皮肤缺损创面，16个创面／组，共48个创面。方法：①制备组织工程全层皮肤和组织工程真皮。②组织工程全层组：沿画线自脂肪层切除全厚皮肤，彻底止血，以湿生理盐水纱布覆盖创面备用，此时取出组织工程全层皮肤并于组织工程皮肤上均匀打引流孔以利引流，用生理盐水冲去组织工程皮肤表面的培养液，使表皮层向上平铺于创面上，注意与创面间不能产生气泡。其上分别覆盖单层油纱布，生理盐水纱布、无菌干纱布、弹性海绵垫，每层厚度约为3～5mm，常规打包包扎，最后再以弹性绷带加压包扎。③组织工程真皮＋自体表皮组：以同样方法切除全厚皮肤，将取下的皮肤用取皮鼓反取厚约0．1～0．2mm的刃厚表皮泡于生理盐水中备用。以同样方法取出处理组织工程真皮后覆盖于创面上，即刻覆盖自体刃厚表皮。其余处理同组织工程全层组。④自体移植组：切除全厚皮肤并去除脂肪组织后，回植于自体创面，覆盖各层敷料，加压包扎。⑤每次换药打开创面时，移植皮肤无感染、坏死、脱落且直径不小于3mm即为成活，否则即为失败。于术后4周统计各组创面成活率。主要观察指标：术后4周各组移植皮肤成活情况。结果：术后4周时，组织工程全层组移植皮肤成活率75％，组织工程真皮＋自体表皮组移植皮肤成活率87％，自体移植组移植皮肤成活率94％，3组比较基本相似（χ^2=2．34，P〉0．05）。结论：组织工程皮肤移植修复皮肤缺损的效果与自体表皮移植接近，证明组织工程皮肤修复皮肤缺损是可行的。