地高辛素标记探针原位杂交法检测肝及肝外组织中的TTV DNA

1997年底,日本学者报道了一种与肝功能异常有关的新型病毒,并将之命名为输血传播病毒(ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ)[1]。为了解我国病因不明患者肝及肝外组织中ＴＴＶ感染状况,我们采用原位杂交的方法进行了检测,现报道如下。一、对象与方法1标本来源:选自北京佑安医院1996～1999年经血清学方法及肝组织的免疫组织化学法检测,排除了甲～庚型肝炎病毒感染的27例患者的肝穿组织。患者年龄20～68岁,男19例,女8例,均无饮酒史、自身免疫疾病及药物史。另又选取8例1990～1997年收集的非甲～庚的慢性肝病死亡病…     

抗丁型肝炎病毒lgM抗体检测试剂盒的制备及应用

本文报告用基因工程生产的HDAg和高效价的抗-HD阳性血清,成功地制备了检测抗-HDIgM的ELISA试剂盒。同国外同类产品比较,其灵敏度为93.9％,特异性为100％。本试剂与甲乙肝抗原无交叉反应,不受类风湿因子的干扰。经临床应用及国内8省市的流行病学调查,均取得了较满意结果。     

非甲-非庚型肝炎患者血清及肝组织中TT病毒DNA的检测

1997年底 ,日本学者报道了一种与肝功能异常有关的ＤＮＡ病毒 ,并命名为ＴＴ病毒 (ＴＴＶ) [1] 。为了解我国病因不明肝炎患者中ＴＴＶ感染状况 ,我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)和原位杂交的方法检测了血清及肝组织中ＴＴＶ表达情况 ,现报道如下。一、研究对象及标本来源患者年龄 2 0～ 6 8岁 ,男 19例 ,女 8例 ,均无饮酒史 ,自身免疫疾病及药物肝损史等。肝组织标本 2 7份选自北京佑安医院 1996～ 1999年不明原因肝炎患者活检肝组织 (两例有随访 ) ,组织经甲醛固定 ,石蜡包埋 ,5 .0 μｍ厚连续切片备检。同时采集相应的血清标本冻存于 - 2 0…     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

定量聚合酶链反应检测慢性乙型和丁型肝炎患者血清HBV DNA

本研究应用新型定量PCRHBV检测法—AcuGenAmplisensorTMHBV法对70例慢性乙型与丁型肝炎病例进行血清HBVDNA水平测定，观察乙肝在丁肝病毒重叠感染时是否对HBVDNA复制存在抑制作用。实验结果：乙肝组（34例）及丁肝组（36例）定量PCR测HBVDNA阳性率为88．2％（30/34）和91．7％（33/36）（P＞0．05）。乙肝组HBeAg阳性与抗HBe阳性病例之HBVDNA复制水平无明显差异；而丁肝组则表现明显性差异（P＜0．01）。结果提示：本组丁肝重叠乙肝感染病例中血清HBVDNA复制被抑制的现象并不明显，其中HBeAg阳性病例HBVDNA大多处于高水平复制状态；而抗HBe阳性病例则以低水平复制为主，提示肝炎病情活动和慢性化趋向与病毒复制有密切关系，定量PCR检测HBVDNA的技术可以为该领域研究提供有效手段。     

肝组织中HBsAg,HBcAg与临床分型的关系

我们对61例不同临床类型的乙型肝炎及肝硬化患者作了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)的免疫组化染色,就其检出率、在肝细胞内的形态特点、与临床分型的关系作了初步分析。 1 材料和方法 1.1 病例 选自北京佑安医院病理科1989～1994年活检及尸检标本61例,依据全国第六届病毒性肝     

慢性乙型病毒性肝炎病人血清e抗原向e抗体转化的观察

对40例经临床及肝穿刺病理诊断的 HBsAg 阳性及 HBeAg 阳性的慢性病毒性肝炎病例的 e 系统追踪4～25月。12例出现抗 HBe 转化,12例 HBeAg 阴转,其余16例 HBeAg 持续阳性,据此分三组观察。结果表明:向抗 HBe 转化组中血清 HBsAg 滴度低于 HBeAg 阳性持续组(P<0.05),而其急性期 SGPT 水平则高于后者(P<0.01),该组病人多有急性肝炎病史。在缓解期,该组病例约有半数表现临床症状、肝功能、DNA-P 活性等全面好转,血消 HBsAg 阴转或转为低滴度,其近期预后明显优于 HBeAg 阳性持续组。对慢性乙型肝炎病程中出现 HBeAg 向抗-HBe 转化的有关因素、临床特点和转归问题进行了分析和讨论。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微,其检出率往往不能令人满意。本研究采用HCV-PCR-H.ELISA法测定血清中HCV RNA,是一项将丙肝毒PCR产物通过杂交及酶标记物显色反应判定结果的新     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增，扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交，通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中，HCV RNA的检出率为57．9％（88／152），其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示，HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异，为半定量指标，可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。     

Adr亚型HBV中蛋白基因的T载体克隆及序列分析

构建含适当限制酶切位点的ａｄｒ 亚型乙肝病毒（ＨＢＶ） 中蛋白基因克隆,比较分析序列变化,用作ＨＢＶ 疫苗表达及诊断试剂的研究。患者血清经蛋白酶Ｋ 消化,再以酚 氯仿抽提,对提取物进行ＰＣＲ 扩增。回收ＰＣＲ 阳性产物,经琼脂糖酶消化后直接克隆至Ｔ 载体。转化后提取质粒经ＰＣＲ 及酶切鉴定,再行序列分析。结果：１０ 份血清提取物的ＰＣＲ 有３ 份获阳性产物,分别经Ｔ 载体克隆后转化ＤＨ１０ｂ 菌,３ 株阳性克隆经酶切及序列分析显示同属于ａｄｒ 亚型,与国内已发表序列的同源性大于９９ ．６ ％ 。提示该克隆是用作ＨＢｓＡｇ 蛋白表达或探针标记研究的理想克隆。