免疫组化法检测非甲-非庚型肝炎患者肝组织中输血传播病毒

目的　检测非甲-非庚型肝炎患者肝组织输血传播病毒(TTV)感染状况,TTV感染与肝组织炎症程度 及与血液学指标的相关性。方法　应用免疫组织化学法检测52例非甲-非庚型肝炎患者肝组织中TTV,并经原位 杂交证实;对TTV阳性和阴性组的血液学生化指标,诸如血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血清天冬氨酸转氨酶(AST)、血 清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、γ 球蛋白(γ G)、凝血酶原活动度(PTA)及组织学活动指数(HAI)进行了比较。 结果　非甲-非庚型肝炎患者肝组织中TTV抗原(TTVAg)阳性15例,检出率为28.8%;阳性物质主要定位于肝细 胞浆内,呈棕黄色细小颗粒,偶见肝细胞核内有表达;TTV阳性表达细胞呈单个、散在或片簇状分布;TTVAg阳性的 组织切片经苏木素-伊红(HE)染色后,可观察到病毒性肝炎的一些病理变化,如肝细胞胞浆疏松化、气球样变、嗜酸 样变、灶性坏死、凋亡、小叶内及汇管区炎细胞浸润;从15例TTVAg阳性病例中任选10例进行TTV DNA原位杂交 检测,结果8例阳性,二者符合率80.0%;同时对5例免疫组化TTVAg阴性肝组织进行TTV DNA原位杂交检测,结 果5例均为阴性,二者符合率100%;TTVAg阳性组ALT、AST、TBIL、γ G均值均高于TTVAg阴性组,ALB、PTA 均值均低于TTVAg阴性组,但两组比较差异无统计学意义(P>0.0     

重型病毒性肝炎中丁型肝炎病毒的检测

为了探讨丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染在重型病毒性肝炎中的作用，对北京佑安医院１９８０年至１９８９年收治的５４例急性和亚急性重型肝炎和３８例急性乙肝患者血清，应用国产ＨＤＶＥＬＩＳＡ试剂测定抗－ＨＤ、抗－ＨＤＩｇＭ和ＨＤＡｇ，应用斑点杂交技术测定ＨＤＶＲＮＡ。结果发现重型肝炎组ＨＯＶ－Ｍ检出率明显高于急性乙肝组（２７．８％比５．３％．Ｐ＜０．０５）。单独ＨＢＶ感染和ＨＤＶ／ＨＢＶ混合感染的重型肝炎患者均有较高的病死率。提示ＨＤＶ感染是重型肝炎中重要的病原学因素之一，ＨＤＶ与ＨＢＶ具有协同作用加重肝损害，导致肝衰竭。     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

抗丁型肝炎病毒mAb的制备及其初步应用

目的 :以基因工程表达丁型肝炎病毒抗原蛋白 (HDAg)为抗原 ,建立分泌单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞系 ,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 :用Ni NTA技术纯化HDAg免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组化技术进行鉴定。结果 :筛选出 2株能稳定分泌特异性抗 HD的mAb杂交瘤细胞株 (HD1,HD2 ) ,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体 ,特异性强 ,效价高。应用于ELISA测定患者血清HDAg均呈特异性阳性反应。免疫组化检测肝组织显示 ,针对该mAb的抗原主要分布于细胞核或浆内。结论 :此两株丁肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丁肝抗原具有特异亲和性 ,为丁型肝炎病毒的临床诊断及病理检测提供技术基础     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中丙型肝炎…

以国外引进的含丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ的质粒ＤＮＡ为模板，应用地高辛素作为标记物，经聚合酶链反应制备探针，建立原位杂交方法，对４１例石蜡包埋肝组织进行ＨＣＶ，ＲＮＡ测定。探针标记的ＨＣＶ基因片段位于５‘非编码区，其长度为２２１ｂｐ。结果：抗ＨＣＶ阳性组的ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率为５６．５％，抗－ＨＣＶ阴性组为１６．７％。     

逆转录—聚合酶链反应在丁型肝炎病毒感染的应用及意义

本项技术选取丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ的非抗原编码区的相对保守区为靶序列,设计两对引物,进行巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＤＶＲＮＡ。血清及肝组织采用蛋白酶消化法提取ＲＮＡ。结果发现９８例各型病毒性肝炎血清中,ＨＤＶ—Ｍ阳性组ＨＤＶＲＮＡ检出率为５６６％（３０／５３）,ＨＤＶ—Ｍ阴性组为８９％（４／４５）（Ｐ＜００１）;ＨＤＡｇ或／及抗ＨＤＩｇＭ阳性血清测定ＨＤＶＲＮＡ的阳性率为５７１％（２８／４９）,抗ＨＤ阳性血清的阳性率为５００％（２／４）;９例ＨＤＶ—Ｍ阳性肝组织测定ＨＤＶＲＮＡ阳性者６例,２例ＨＤＶ—Ｍ阴性肝组织均阴性。本项技术是在分子水平上检测病毒核酸、操作简便、稳定、可靠、特异性高、重复性好,可以作为ＨＤＶ血清学指标的佐证和补充,肝组织ＨＤＶＲＮＡ的测定可应用于回顾性研究,在临床病原诊断、抗病毒疗效判定、病毒复制、重叠感染等研究方面提供重要实验依据。     

直接酶标法检测肝组织中丙型肝炎病毒抗原（HCAg—NS3）的研究

以单克隆抗－ＨＣＶ－ＮＳ３直接酶标法对石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒抗原（ＨＣＡｇ－ＮＳ３）进行测定，该抗体系应用基因重组表达丙肝抗原（ＨＣＶ－ＮＳ３区－Ｃ３３－Ｃ）免疫小鼠并通过细胞融合术后获得，４９例病毒性肝炎患者肝组织测定结果，抗－ＨＣＶ阳性组的ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５１．９％（１４／２７），抗－ＨＣＶ阴性组为１３．６％（３／２２），两组有显著性差异（Ｐ〈０．０１），以慢性重症肝炎和肝硬化患者     

肝细胞癌及相关慢性肝病肝组织中乙型肝炎病毒的研究

目的：初步探讨HBV感染与肝细胞癌之间的关系。方法：应用免疫组化和原位杂交分别在检测慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌及癌旁肝组织中HBsAg和HBVDNA的基础上，选择HBsAg和HBVDNA均为阳性的标本进行免疫组化与原位杂交双标记。结果：癌组织中HBsAg及HBVDNA阳性率低，信号少，且HBVDNA多在核内；而慢性肝炎、肝硬化和癌旁肝组织中HBsAg及HBVDNA阳性率高，信号多而强，HBVDNA可在胞浆或胞核。HBVDNA与HBsAg可共存于同一细胞或分布于不同肝小叶或同一肝小叶的不同部位。结论：大多数肝细胞癌的发生与HBV感染所致的慢性肝炎和肝硬化密切相关；双标记法有利于分析2种不同病毒标志物之间的关系。     

乙型肝炎病毒感染诱发肝细胞癌机理的研究进展

原发性HCC的发生是一个多因素、多阶段极其复杂的过程，HBV长期慢性感染是其致病因素之一。HBV感染引起肝细胞的反复损伤坏死和增生、HBVDNA基因整合到肝细胞基因组、HBV基因表达产物HBx反式激活作用以及HBx和M—HBst引发细胞内ROS水平的升高等原因，都会引起HCC的发生。了解HBV引起肝细胞癌的致病机理，对于肝细胞癌的治疗和预防乙肝患者发展为肝细胞癌将有很大的帮助。