家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析

目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析,并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。结果 HSP20基因序列全长865bp,最大开放阅读框(ORF)为567bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21443.2 Da,等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Origmi B/DE3中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da,诱导12 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

酶工程教学模式改革的探索

酶工程是生物技术专业的主干课程,其主要内容是研究酶的生产和应用,该文从优化教学内容、改进教学方法、加强实验和实践教学等方面,介绍了该门课程教学与建设的体会及其思考,以期提高教学效果和人才培养素质。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌抑制作用

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制.方法 利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理.结果 经20、40及80 μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89％,而对照组占45.25％,比实验组高33％.结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用.     

蝇蛆甲壳素的制备技术研究

目的 研究蝇蛆甲壳素的制备技术,优选出适宜制备工艺.方法 蝇蛆甲壳素的制备采用酸碱法,产物含氮量测定采用凯氏定氮法,灰分含量测定采用550℃灼烧法.结果 脱蛋白最佳工艺为以4%NaOH室温浸泡两天,并更换NaOH 1次;脱色工艺使用1% KMnO4;最佳脱钙工艺为2 mol·L-1盐酸在25℃下反应6 h.结论 使用酸碱法制备的蝇蛆甲壳素质量指标可达食品级甲壳素标准.     

家蝇黏蛋白mucin-46基因的序列分析

目的：分析和预测家蝇黏蛋白mucin-46基因及其编码蛋白的结构和特性.方法：利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇黏蛋白mucin-46基因cDNA序列,采用美国国家生物技术信息中心（NCBI）、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（Expasy）中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析.结果：家蝇黏蛋白mucin-46基因的cDNA序列具有完整的开放阅读框（ORF）,全长1 383 bp,编码460个氨基酸;其编码的蛋白质理论分子量为46.42 kDa,等电点4.13;无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有4个几丁质结合功能域,含有4个糖基化位点及多个蛋白磷酸化作用位点;二级结构β折叠（E）和无规则卷曲（L）的比例是14.13∶85.87,没有α螺旋（H）结构类型;主要分布于细胞核.结论：应用生物信息学方法从家蝇cDNA文库中筛选出了家蝇黏蛋白mucin-46基因序列并预测了其结构及功能等生物学信息,为进一步研究家蝇围食膜蛋白的功能奠定了一定的基础.     

蝇蛆蛋白粉对小鼠免疫功能的影响

目的:探讨蝇蛆蛋白粉对正常小鼠及免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法:利用正常及环磷酰胺(Cy)所致免疫低下模型小鼠,通过血清溶血素含量检测及碳粒廓清指数测定考察蝇蛆蛋白粉对巨噬细胞巨噬功能及体液免疫功能的影响。结果:蝇蛆蛋白粉可显著提高正常小鼠半数溶血值(HC50),对吞噬指数(α)无影响;对免疫功能低下小鼠HC50无影响,但可显著提高其α值。结论:蝇蛆蛋白粉可有效地增强正常小鼠体液免疫功能;对Cy造成的免疫功能低下有一定的预防和治疗作用。     

家蝇抗菌肽对细菌感染小鼠外周血多项指标的影响

目的了解在腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽的干预作用下,大肠埃希菌感染小鼠的外周血细胞过氧化物酶及多项血液指标的变化。方法将实验小鼠随机分为空白对照、模型对照、抗菌肽干预3个组,并分别于处理后24 h、48 h、72 h取样分析;外周血细胞过氧化物酶染色采用四甲基联苯胺法,全自动血细胞分析仪检测血红蛋白、血小板、白细胞、红细胞计数及白细胞细胞分类情况。结果在各检测指标中,白细胞数、中性粒细胞绝对值在实验处理间具有显著性差异;感染72 h抗菌肽干预组白细胞数高于模型对照组(P0.05);与空白对照组比较,抗菌肽干预组和模型对照组各检测时间点白细胞数均有显著性差异(P0.05);感染72 h抗菌肽干预组中性粒细胞绝对值显著高于模型对照组(P0.05);血细胞过氧化物酶染色及其余指标在处理因素间无统计学差异。结论腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽对小鼠大肠埃希菌感染具有一定的干预作用。     

蝇蛆壳聚糖黏均分子量的测定

目的:测定蝇蛆壳聚糖特性黏度,并计算其黏均分子量.方法:利用乌式黏度计,测定高聚物蝇蛆壳聚糖的黏度,采用外推法和一点法计算,进而得出其分子量.结果:外推法和一点法均可用于壳聚糖黏度及分子量的测定.结论:一点法只需测得1个浓度下的壳聚糖溶液的相对黏度和增比黏度,即可简便、快速、准确地测出壳聚糖的特性黏度,进而求得其黏均分子量,相对一步法更简便,但外推法的可靠性及准确性更高.     

家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达

摘 要：目的 对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ（MDC Ⅰ）基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中表达。 方法 采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDC Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDC Ⅰ基因进行扩增,以pET 28a（+）为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定。 结果 MDC Ⅰ 基因全长751bp,编码251个氨基酸,理论分子量28.62 kDa;等电点5.78,有一个chitinase 18家族的活性位点。构建了具有正确基因序列的MDC Ⅰ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。 结论 MDC Ⅰ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠免疫功能影响

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对正常小鼠免疫功能影响.方法 选用BalB/c小鼠,随机分为对照组(生理盐水)和家蝇幼虫分泌型抗菌肽(腹腔注射)5、10、20 mg/kg组,每天1次,7d后处死小鼠,测量体重、胸腺/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、刀豆蛋白A诱导小鼠脾T淋巴细胞转化率、碳粒廓清能力及半数溶血值.结果 10、20 mg/kg抗菌肽组小鼠脾脏指数分别为(7.41±0.93)和(7.56±1.05),胸腺指数分别为(3.80±0.69)和(3.51±1.02),巨噬细胞吞噬率为(38.81±7.88)％和(40.16±9.74)％,脾脏酸性磷酸酶活性分别为( 268.60±36.64)、(270.48±54.62) U/g,脾T淋巴细胞转化率分别为(0.31±0.11)％和(0.32±0.09)％,与对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).抗菌肽组小鼠体重及血清半数溶血值与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠具有增强免疫功能作用.