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目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析,并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。结果 HSP20基因序列全长865bp,最大开放阅读框(ORF)为567bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21443.2 Da,等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Origmi B/DE3中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da,诱导12 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。 相似文献
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目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制.方法 利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理.结果 经20、40及80 μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89%,而对照组占45.25%,比实验组高33%.结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用. 相似文献
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目的:分析和预测家蝇黏蛋白mucin-46基因及其编码蛋白的结构和特性.方法:利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇黏蛋白mucin-46基因cDNA序列,采用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析.结果:家蝇黏蛋白mucin-46基因的cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF),全长1 383 bp,编码460个氨基酸;其编码的蛋白质理论分子量为46.42 kDa,等电点4.13;无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有4个几丁质结合功能域,含有4个糖基化位点及多个蛋白磷酸化作用位点;二级结构β折叠(E)和无规则卷曲(L)的比例是14.13∶85.87,没有α螺旋(H)结构类型;主要分布于细胞核.结论:应用生物信息学方法从家蝇cDNA文库中筛选出了家蝇黏蛋白mucin-46基因序列并预测了其结构及功能等生物学信息,为进一步研究家蝇围食膜蛋白的功能奠定了一定的基础. 相似文献
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家蝇抗菌肽对细菌感染小鼠外周血多项指标的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的了解在腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽的干预作用下,大肠埃希菌感染小鼠的外周血细胞过氧化物酶及多项血液指标的变化。方法将实验小鼠随机分为空白对照、模型对照、抗菌肽干预3个组,并分别于处理后24 h、48 h、72 h取样分析;外周血细胞过氧化物酶染色采用四甲基联苯胺法,全自动血细胞分析仪检测血红蛋白、血小板、白细胞、红细胞计数及白细胞细胞分类情况。结果在各检测指标中,白细胞数、中性粒细胞绝对值在实验处理间具有显著性差异;感染72 h抗菌肽干预组白细胞数高于模型对照组(P0.05);与空白对照组比较,抗菌肽干预组和模型对照组各检测时间点白细胞数均有显著性差异(P0.05);感染72 h抗菌肽干预组中性粒细胞绝对值显著高于模型对照组(P0.05);血细胞过氧化物酶染色及其余指标在处理因素间无统计学差异。结论腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽对小鼠大肠埃希菌感染具有一定的干预作用。 相似文献
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目的 研究蝇蛆壳聚糖(HMC)对过氧化氧(H2O2)诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用.方法利用H2 O2诱导的内皮细胞损伤模型,采用不同剂量HMC预培养,通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,生化法和放免法检测细胞培养液超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和内皮素(ET)水平.结果中、高剂量HMC组细胞存活率A值分别为(0.714 0±0.059 5)、(0.811 9±0.059 7),均高于H2O2损伤组(0.5972±0.042 2) (P <0.01);低、中、高剂量HMC组细胞SOD活性分别为(14.76±1.59)、(16.99±1.69)、( 19.22±2.31) NU/mL,明显高于H2O2损伤组(P<0.05,P<0.01);低、中、高剂量HMC组细胞MDA含量分别为(10.11 +1.91)、(8.23±1.64)、(6.74±1.26) nmol/L,明显低于H2 O2损伤组(P<0.01);各剂量HMC组细胞NO水平明显高于H2 O2损伤组,而ET含量则明显低于H2 O2损伤组(P<0.01).结论HMC具有保护血管内皮细胞的作用,机制可能与减少细胞NO释放、增加ET水平、维护内皮细胞结构和功能完整及增强其抗氧化能力有关. 相似文献
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目的 研究家蝇幼虫分泌物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、乳酸脱氢酶(LDH)活性及一氧化氮(N0)含量的影响.方法 以甲醇为洗脱液,用固相萃取法初步分离家蝇幼虫分泌物,液体培养法检测各萃取组分抗菌活性,比色法检测萃取组分对巨噬细胞吞噬中性红能力及LDH活性的影响;Griess法测定NO含量.结果 分泌物经甲醇萃取分离后,30%,40%萃取组分显示较强抗大肠埃希菌活性;经该两个梯度萃取组分作用后,巨噬细胞的吞噬率分别为(1.48±0.12)%,(1.26±0.08)%; LDH活性单位分别为(450.32±1.15)及(306.57±2.06);诱生NO的浓度分别为(28.5±3.4) μmol/L,(25.6±2.8) μmol/L,与对照组相比均有明显的统计学意义(P<0.05).结论 家蝇幼虫分泌物经初步纯化后,对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、LDH活性及NO的诱生均有显著的增强作用. 相似文献