清养透解法治疗系统性红斑狼疮伴视功能损害临床研究

目的:观察清养透解法治疗系统性红斑狼疮伴视功能损害的临床疗效。方法:将42例系统性红斑狼疮伴有视力损害患者随机分为2组。治疗组28例,采用常规西医综合疗法加用中医清养透解法辨治;对照组14例,采用常规西医综合疗法治疗。观察3月,评价其临床疗效、视力改善以及病情复发例数等。结果:总有效率治疗组为96.43%,对照组为85.71%,2组比较,差异有显著性意义(P0.05)。治疗组患者视力均有提高,对照组改善不明显。治疗组3例复发,对照组4例复发。结论:运用以清养透解法为主综合方案治疗伴有视力损害的系统性红斑狼疮疗效优于常规西医治疗,能缓解控制症状,减少复发,提高视力。     

蛋白芯片技术监测大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的发生

摘要：目的　利用蛋白质芯片技术双盲监测大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的发生。方法 采用弱阳离子交换芯片(WCX2)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术对穿透性角膜移植术后大鼠血清中表达的免疫排斥反应相关的低分子量差异蛋白进行筛选，并通过双盲法利用蛋白质芯片技术监测筛选结果。结果　质荷比0-20 000范围内，共检测到58个蛋白峰，其中6个蛋白质峰的表达有统计学意义。双盲法监测结果：血清中出现这6个蛋白质峰的大鼠角膜全部发生免疫排斥反应。结论 蛋白芯片技术能够筛选出灵敏度和特异性好的差异表达蛋白，为角膜移植排斥反应病情的治疗监测提供依据。     

双氢青蒿素滴眼液对血管化大鼠角膜磷酸化p38以及VEGFA mRNA表达的影响

目的：研究双氢青蒿素滴眼液对血管化大鼠角膜磷酸化p38（p-p38）以及血管内皮生长因子A（VEGFA）mR NA表达的影响,探讨其抑制角膜新生血管的可能机制。方法：角膜缝线法建立24只大鼠右眼角膜新生血管模型,随机分为双氢青蒿素滴眼液组和生理盐水组各12只。术后第7天,测量角膜新生血管长度,并计算新生血管面积;2组各随机选取6只大鼠并摘取角膜检测角膜p-p38的表达及VEGFA mR NA的表达。结果：双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜新生血管面积显著低于生理盐水组（P〈0.01）;双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜p-p38表达量低于生理盐水组;双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜VEGFA mR NA表达量显著低于生理盐水组（P〈0.05）。结论：20mg/L双氢青蒿素滴眼液可能通过抑制p-p38的表达以及VEGFA mRNA的转录,从而抑制大鼠角膜新生血管生长;p38信号转导通路可能参与调控大鼠角膜新生血管生长。     

缝线诱导大鼠角膜血管新生过程中环氧化酶2和基质金属蛋白酶2的表达

背景:研究表明环氧化酶2和基质金属蛋白酶2在角膜新生血管的发生中起重要作用,但其具体机制及相互关系仍不明确.目的:观察环氧化酶2和基质金属蛋白酶2在缝线法诱导的大鼠角膜新生血管中的表达,并分析其相关性,探讨角膜新生血管形成的有关机制.方法:采用缝线法建立SD大鼠角膜新生血管模型,术后每日裂隙灯观察角膜新生血管的生长情况,并于1,4,7,14,21 d取材,行免疫组化及RT-PCR检测环氧化酶2和基质金属蛋白酶2蛋白的分布及二者mRNA的相对表达量,并进行相关性分析.结果与结论:角膜缝线后三四天可见明显从角膜缘伸入角膜的毛刷状小血管,垂直角膜缘切线方向,角膜缝线处水肿;7 d角膜新生血管生长旺盛,角膜水肿继续加重,14 d新生血管延伸到达或超过缝线位置,分支密集并互相吻合形成袢状血管;21 d角膜新生血管变细.免疫组化及RT-PCR显示环氧化酶2和基质金属蛋白酶2于缝线后表达逐渐增加,7 d达高峰,以后随炎症细胞的减少而减弱,主要分布于炎症细胞胞质及新生血管内皮细胞,两种因子的表达在角膜新生血管中具有正相关性(r=0.981,P<0.05).证实炎症相关的角膜新生血管中环氧化酶2和基质金属蛋白酶2的表达增加,并且与新生血管的发生、发展密切相关.     

准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎的临床分析及治疗

目的:观察准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎的发病情况,总结采用唯地息凝胶治疗的效果,探讨其发病相关因素及防治方法。方法:所有患者2139眼,按术前有无角膜接触镜配戴史分为Ia组493眼(有角膜接触镜配戴史)与Ib组1646眼(无角膜接触镜配戴史),按术式分为IIa组1916眼(LASIK术后)与IIb组223眼(LASEK术后),比较其发病率,观察准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎的发生情况,发病者迅速、足量使用唯地息凝胶治疗,观察其疗效,分析该病变的临床特征,相关发病因素及防治措施。结果:Ia组与Ib组术后丝状角膜炎发病率分别为3.45%和1.76%,两者有显著差异(P<0.05);IIa组与IIb组术后丝状角膜炎发病率分别为1.93%和4.04%,两者有显著差异(P<0.05)。唯地息凝胶治疗准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎的平均疗程1.22±0.63d,随访6mo未见复发。结论:与准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎发生的相关因素包括:术前配戴角膜接触镜继发干眼及眼表炎症、术中角膜损伤、术后角膜上皮愈合及术后用药等。唯地息凝胶治疗准分子激光角膜屈光手术后丝状角膜炎,疗程短、效果显著。     

姜黄素对兔角膜新生血管模型中多形核白细胞计数和VEGF表达的影响

目的研究姜黄素对兔角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)模型中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)计数的影响。方法40只健康新西兰大白兔,其中5只不做任何处理作为正常对照组(A组);其余35只建立碱烧伤角膜新生血管模型,右眼不应用姜黄素滴眼液为实验对照组(B组),左眼应用姜黄素滴眼液作为实验干预组(C组)。裂隙灯观察角膜新生血管生长情况,免疫组织化学方法检测应用姜黄素后不同时间点VEGF在兔CNV中的表达,显微镜下PMN计数,并作统计分析。结果A组未见PMN,而VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达。B组PMN增多和VEGF表达明显增强,其表达部位主要分布在新生血管形成区域和上皮全层。与B组相比,C组角膜新生血管密度明显减低,PMN明显减少,VEGF在相应角膜基质层新生血管形成区域表达减少。结论姜黄素可以有效地抑制兔角膜碱烧伤诱发的CNV生长,可能是通过显著降低角膜新生血管PMN增生和VEGF的表达来实现的。     

TLR2在大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用

目的 通过采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)动态检测大鼠角膜组织TLR2 mRNA的表达,研究TLR2在穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用.方法 实验分四组:正常对照组(N)、同种同体角膜移植组(A)、同种异体角膜移植组03)和同种异体角膜移植激素抗排斥组(C),A、B、C三组大鼠给予穿透性角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评分;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和荧光实时定量PCR检测,动态观察角膜组织TLR2 mRNA的表达.结果 术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长.B组大鼠角膜排斥反应指数平均在术后第7天符合排斥反应的诊断并获病理学支持:A组和C组大鼠角膜的排斥反应指数计分未达到诊断标准.正常的角膜组织可见TLR2 mRNA表达;三个手术干预组TLR2 mRNA表达差异倍数均明显高于正常对照组,同种异体角膜移植组角膜TLR2 mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2 mRNA表达较同种异体角膜移植组显著降低(P<0.05).结论 TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后免疫排斥反应.

Abstract：

Objective To gain insight into the role of Toll-like receptor 2 (TLR2) in graft rejection following penetrating keratoplasty, and investigate the expression of TLR2 mRNA in the corneal graft. Methods Penetrating keratoplasty was performed in 3 groups of rats for orthotopic autologous corneal transplantation (group A), allograft corneal transplantation (group B), or allograft corneal transplantation with hormone treatment (C). The transparency and neovascularization of the cornea were observed using a slit-lamp microscope and scored according to the rejection index, with normal cornea serving as the control. The corneal tissues were sampled at 5, 7, and 9 days after the transplantation for histopathological examination and detection of TLR2 mRNA expression using RT-PCR. Results With the passage of time, edema, opacities and neovascularization of the comeal graft occurred after the operation in all the groups. Seven days after the operation, the rejection index of group B, but not that of groups A and C, met the diagnostic criteria for graft rejection with also support by histopathological evidence. The expression of TLR2 mRNA was detected in normal corneas and augmented in the corneal grafts in the 3 transplantation groups. TLR2 mRNA expression in group B was significantly higher than that of group A, and the expression in group C decreased significantly in comparison with that in group B (P<0.05). Conclusion As the recognition receptors of native immune system, TLR2 in the rejected corneal grafts may recognize the allograft antigen and play a role in acute graft rejection after penetrating keratoplasty.     

糖皮质激素对角膜移植术后大鼠角膜TLR2表达的影响

目的检测大鼠角膜组织TLR2mRNA的表达,研究糖皮质激素对穿透角膜移植术后角膜TLR2表达的影响及对术后排斥反应的作用。方法实验动物分正常对照组（N）、同种同体角膜移植组（A）、同种异体角膜移植组（B）和同种异体角膜移植激素（典必殊滴眼液点术眼,每日2次）抗排斥组（C）,A、B、C3组大鼠给予穿透角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评价;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和实时荧光定量PCR检测,动态观察角膜组织中TLR2mRNA的表达。结果术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长。B组大鼠平均在穿透角膜移植术后7d发生排斥反应并获病理学支持;A组和C组大鼠术后排斥反应指数计分未达到诊断标准。术后3组手术干预组角膜TLR2mRNA的表达均增加,同种异体角膜移植组角膜TLR2mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论糖皮质激素可能通过抑制角膜TLR2的表达及其介导的信号转导,抑制排斥反应,对移植物起保护作用。     

TLRs在大鼠穿透角膜移植术后排斥反应中的作用

目的动态检测大鼠角膜组织TLR2、TLR3、TLR4mRNA的表达,研究TLR2、TLR3、TLR4在穿透角膜移植术后免疫排斥反应中的作用。方法采用SPF级雌性SD大鼠108只为受体,SPF级Wistar大鼠36只为供体,另取SPF级雌性SD大鼠6只12只眼为正常对照组。受体大鼠分为3组：自体角膜移植组（A）、同种异体角膜移植组（B）和同种异体角膜移植后糖皮质激素应用组（C）,A、B、C组各36只大鼠接受穿透角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管情况并采用排斥反应指数（RI）进行评分。分别于术后第5、7、9天获取角膜标本行组织病理学检查和荧光实时定量PCR（real-timePCR）检测,动态观察角膜组织中TLR2、TLR3、TLR4mRNA的表达。结果术后随时间变化,A、B、C组大鼠角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长。B组大鼠角膜RI平均在术后7d符合排斥反应的诊断标准并经病理学检查证实。A组和C组大鼠角膜的RI计分未达到排斥反应诊断标准。正常大鼠角膜可见TLR2、TLR3、TLR4mRNA表达;术后9dB组大鼠角膜TLR2mRNA的表达较A组显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;TLR3mRNA和TLR4mRNA在B组各时间点间表达的差异倍数比较均无统计学意义（P=0.30;P=0.32）,但组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后的免疫排斥反应。     

1型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染人脐静脉内皮细胞的体外研究

目的 评价1型重组腺相关病毒(rAAV1)作为新生血管性角膜病变基因治疗载体的可行性.方法 rAAV1-EGFP按转染倍数(MOI)5×103,5×104,5×105转染ECV304细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察ECV304细胞中GFP阳性表达情况和细胞生长形态特点等,流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对EVE304细胞的转染效率.MTT法检测rAAV1-EGFP对EVC304细胞增殖的影响.结果 转染后2 d,MOI=5×105组细胞中的GFP开始表达;表达强度随MOI值的增高而增强,同时GFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强,转染后第7天达到高峰,此时流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对ECV304细胞的转染率分别为45.90％(MOI=5×103),58.56％(MOI=5×104),68.31％(MOI=5×105).AAV1-EGFP转染ECV304细胞后.细胞生长及形态正常.MTT法显示转染后72、96 h各转染组与未转染组之间A值无显著性差异.结论 rAAV1-EGFP对ECV304细胞转染稳定、有效,重组腺相关病毒对细胞增殖无明显抑制,重组腺相关病毒可作为基因治疗角膜新生血管性病变的载体.