人体桡神经连续组织切片计算机辅助三维重建研究

目的:探索一种人体桡神经计算机三维重建的实用方法。方法:采用发丝作为定位材料,将桡神经进行连续组织切片后乙酰胆碱脂酶(acetylchohnesterase,AChE)组织化学染色,高分辨率扫描仪获取二维数码信息后进行三维重建。结果:真实地再现人体桡神经的三维立体结构及桡神经内各神经束的三维立体行径,重建结构均能单独或搭配显示,还能任意角度显示。结论:人体桡神经计算机辅助三维重建方法的图像显示效果较好,是一种较为实用的方法。     

血管内皮细胞联合同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损

目的:探讨血管内皮细胞(EC)联合去细胞同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:80只雌性Sprague-Dawley大鼠,20只取双侧1.5cm长坐骨神经,Hudson优化法制备去细胞同种异体神经(ANA);60只均于右侧建立1.5cm长坐骨神经缺损模型,随机分为反转吻合坐骨神经的自体神经(ANG)移植组、ANA移植组及ANA+EC移植组(n=20)。术后1、2、4、12周,每组各取5只进行测试,指标包括:坐骨神经功能指数(SFI)、电生理检查[动作电位潜伏延迟率(LDR)、神经传导速度恢复率(NCVRR)和复合肌动作电位恢复率(CMAPRR)]、最大强直收缩力恢复率(MTFRR)、腓肠肌湿重恢复率(MWRR)、微血管增生率(MVDPR),术后12周甲苯胺蓝染色下测量神经纤维数量、髓鞘厚度、G ratio,并行电镜观察。结果:术后早期,ANA+EC移植组大鼠SFI、MVDPR较ANA移植组改善明显(P0.05);术后晚期,ANA+EC移植组大鼠CMAPRR、MTFRR、MWRR较ANA移植组恢复更佳(P0.05);术后12周时,ANA+EC移植组再生神经数量和形态更接近ANG移植组。结论:对于长距离坐骨神经缺损的大鼠模型,使用载血管内皮细胞的去细胞同种异体神经进行神经移植修复,早期肌肉功能优于单独使用去细胞同种异体神经,晚期神经纤维的数量和质量更接近于自体神经移植。     

股骨头坏死保头手术治疗的研究进展

股骨头坏死是多因素导致的病理生理过程。未经有效治疗的股骨头坏死患者中约80%在发病4年内出现股骨头塌陷。股骨头坏死的治疗方案应根据患者的病因和病程制定,早中期患者多可通过保头手术预防或延缓病情进展。保头手术主要包括髓芯减压术、植骨术、多孔钽棒置入术、截骨术、细胞因子或干细胞移植术。本文就上述治疗方法的研究进展作一综述。     

Livin和PlGF在骨肉瘤中的表达及临床意义

背景与目的:骨肉瘤是临床常见的成骨性恶性肿瘤,预后差.Livin是近年来发现的人凋亡抑制蛋白家族的新成员,特异性高表达于某些实体肿瘤组织,能抑制细胞凋亡.胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)在肿瘤等病理性血管生成中发挥着极为重要的作用.本研究旨在探讨Livin及PlGF在骨肉瘤中的表达,分析两者在骨肉瘤的临床诊断及治疗中的意义.方法:应用免疫组化方法检测本院骨科于2003年-2008年间收治的57例骨肉瘤患者的肿瘤组织及10例正常骨组织标本中Livin及PlGF的表达,根据阳性细胞百分比和染色强弱判断两者的表达水平,分析两者表达的相关性及与骨肉瘤各项临床病理指标之间的关系.结果:Livin与PlGF在57例骨肉瘤患者的肿瘤组织中阳性表达率分别为52.6%和64.9%,而在10例正常骨组织中均不表达,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).Livin与PlGF阳性表达与骨肉瘤大小及Enneking分期相关,与患者年龄、性别、病理分型及肿瘤部位无关;Livin的阳性表达与PlGF的阳性表达之间无相关性(P=0.642).结论:Livin及PlGF均在骨肉瘤中高表达,并与骨肉瘤的肿瘤大小及Enneking分期呈正相关,可能与骨肉瘤的发生、发展相关.     

人体尺神经显微结构三维可视化研究

目的 将人体尺神经行连续冰冻组织切片,经染色、扫描后获取尺神经连续断面二维图像信息,通过3D Nerve三维可视化软件系统勾画出完整的尺神经干三维解剖图谱.方法 取自愿捐献死亡3 h内38岁男性左侧尺神经全长(自臂丛内侧束至腕横韧带)标本1例,长约50cm,经定位、包埋、连续冰冻组织切片、乙酰胆碱脂酶组织化学染色,获取尺神经连续二维图像信息,应用3D Nerve三维可视化软件系统对尺神经内部结构进行三维重建.结果 尺神经在不同断面神经束的数量、位置及内部神经纤维的性质均有变化.应用尺神经3D Nerve三维可视化软件系统可在任意断面、任意角度观察尺神经内部的显微结构,追踪各神经束的立体行径,动态地展示尺神经内部神经束的复杂结构.结论 尺神经的3D Nerve三维可视化软件系统可真实地再现尺神经干全长及其内部各神经束的三维立体行径,为医学教学与临床修复尺神经损伤提供精确的神经任意断面三维立体解剖图像,有助于提高神经修复的疗效.     

嗅球神经层胶质细胞、嗅黏膜胶质细胞、SC修复周围神经缺损能力比较

目的 比较嗅黏膜胶质细胞、嗅球神经层(olfactory globular nerve layer,OGNL)胶质细胞及SC修复周围神经缺损的能力,并优选出最适宜移植治疗周围神经缺损的胶质细胞.方法 取20只2～3月龄雌性Wistar大鼠,体外培养嗅黏膜胶质细胞、OGNL胶质细胞及SC,调整浓度为1×106个/mL纯化浓缩备用.另将80只成年雌性Wistar鼠,切除坐骨神经25 mm轴突,保留神经外膜吻合于近端,制备神经缺损模型.将动物随机分成A、B、C、D 4组,每组20只,于神经外膜腔内分别植入10μL DMEM/F12培养液、SC、OGNL胶质细胞以及嗅黏膜胶质细胞.术后3个月,采用踝关节功能评分评估神经缺损的修复效果;行大体、光镜、透射电镜观察神经再生情况;荧光显微镜下观察逆行标记荧光红的运输距离,免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及神经生长因子(nerve growth factor,NGF)浓度;ELISA法检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)及神经丝蛋白(neurofilament,NF)浓度.结果 踝关节功能评分:A、B、C、D组分别为(3.325±0.963)、(4.200±1.005)、(5.143±0.635)和(5.950±0.154)分,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).大体、光镜及透射电镜观察示,D组神经缺损再生最完全,C组次之,B组较差,A组最差.荧光红在神经中运行距离,D组最长,C组次之,B组较短,A组最短;NGF及GFAP浓度,D组最高,C组次之,B组较差,A组最低.A、B、C、D组MBP浓度分别为(9.817±3.267)、(12.347±3.091)、(14.937±2.075)和(22.757±0.871)ng/mL,A、B组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);NF浓度分别为(13.869±5.677)、(18.498±3.889)、(23.443±2.260)、(27.610±1.125)ng/mL,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 嗅黏膜胶质细胞、OGNL胶质细胞、SC均能促进坐骨神经缺损再生,嗅觉系统胶质细胞促进神经再生效果优于SC,而嗅黏膜胶质细胞促进神经再生能力优于OGNL胶质细胞.     

同种异体移植嗅黏膜胶质细胞修复鼠神经缺损

)浓度及神经丝蛋白(NF)浓度评估神经缺损的修复效果.结果 B组神经缺损完全再生,而A组较差;荧光红在神经中运行距离,B组长于A组(P<0.01);NGF及GFAP浓度,B组浓于A组;MBP浓度及NF浓度,B组高于A组(P<0.01);伤肢功能评分,B组高于A组(P<0.01).有髓神经纤维数和神经纤维总数,B组高于A组(P<0.01).结论 嗅黏膜胶质细胞移植能促进Wistar鼠坐骨神经长段缺损再生.     

兔脂肪干细胞(ADSCs)与聚羟基乙酸/壳聚糖(PLGA/CS)支架材料生物相容性研究

 目的  探讨兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞复合新型聚羟基乙酸(polylactic-co-glycolic acid,PLGA)/壳聚糖(chitosan,CS)支架材料的生物相容性,为进一步构建组织工程化脂肪组织提供实验依据。方法  取雄性新西兰大白兔腹股沟脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化分离出ADSCs进行培养,贴壁细胞至3~5代,评价其多向分化能力。将干细胞收集重悬后,以l×107/mL的密度接种于多孔PLGA/CS支架,形成细胞 支架材料复合物。培养7天后,扫描电子显微镜观察细胞在支架材料上的黏附生长和基质分泌情况,评价细胞与支架材料的生物相容性;Dil荧光标记检测细胞在支架材料上的分布;Hochest 33258检测细胞在支架上的生长情况。接种1和7天后,分别对细胞 材料复合物行Annexin V/PI双染色法检测材料对细胞的毒性作用。用成脂诱导条件培养基诱导分化ADSCs及ADSCs支架材料复合物,7天后,尼罗红荧光染色液检测ADSCs在不同环境下的成脂分化能力。结果  原代培养的ADSCs呈成纤维细胞样外观,在相应诱导条件下能够分化为脂肪细胞和骨细胞。细胞接种于PLGA/CS支架材料上第8天分裂增殖达到高峰,扫描电子显微镜下提示ADSCs在支架表面贴附生长良好,并向孔隙内壁充分延伸,细胞周围形成丰富的基质成分。活死双染结合共聚焦显微镜显示材料对细胞活性无影响,尼罗红染色可见成脂诱导后的ADSCs细胞质内有红色脂滴颗粒形成。结论  多孔PLGA/CS支架与兔ADSCs具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程脂肪组织的支架材料。     

显微拉曼光谱技术联合Karnovsky-Roots染色法快速鉴别周围神经纤维的功能性质

 目的 研究周围神经内部运动神经纤维和感觉神经纤维经Karnovsky Roots染色后的显微拉曼光谱特征及该法对两种不同功能性质的神经纤维进行快速识别。方法 取新西兰大白兔20只,分别取其双侧骶1脊神经前根和后根各20例标本作30 μm冰冻切片,切片在Karnovsky-Roots染色30 min前后分别在显微拉曼光谱仪下用波长633 nm的激光束聚焦于神经纤维断面进行拉曼光谱采集。取其中各1例脊神经前根和后根标本染色8 h后作同样处理。对2 100 cm^-1和1 440 cm^-1拉曼强度的比值进行统计分析,获得可以区分运动神经纤维和感觉神经纤维的分类算法;将其余各20例脊神经前根和后根标本经染色30 min后的拉曼光谱与解剖学“金标准”比较,行诊断性试验。结果 (1)染色30 min后,运动神经纤维的拉曼光谱在2 100~2 160 cm^-1出现明显的拉曼强度,在感觉神经纤维的拉曼光谱中则没有;(2)染色30 min后运动神经纤维I2100/I1440比值与感觉神经纤维相比差异具有统计学意义;I2100/I1440>0.2的神经纤维可以认为是染色结果阳性,即为运动神经纤维。结论 经纤维经Karnovsky-Roots染色30 min后,运动神经纤维与感觉神的拉曼光谱可根据I2100/I1440比值加以区分。显微拉曼光谱可以显著加快Karnovsky-Roots染色鉴别运动神经纤维和感觉神经纤维功能性质的速度。     

正中神经显微结构三维可视化研究

目的 将正中神经干全长作连续冰冻组织切片,采集系列切片的神经二维信息,开发3D Nerve可视化系统,实现正中神经内部显微结构的三维可视化.方法 取新鲜成人尸体正中神经标本,作好定位并标记、OCT包埋、采用连续冰冻组织切片、染色、用扫描仪获取切片染色前后的连续的正中神经断面二维信息数据库,开发并应用3D Nerve可视化系统.结果 通过3D Nerve可视化系统观察发现,在不同断面正中神经神经束的数量、位置以及神经束内神经纤维的性质变化较大.在该系统中可在任意断面放大的视野下观察正中神经的显微结构,追踪各神经束在正中神经内的立体行径;重建的正中神经能在空间位置上绕任意轴作任意角度旋转,便于从不同的角度对各神经束的形态、空间位置及相互毗邻关系进行观察,从而动态地展示正中神经内部的复杂结构.结论 正中神经3D Nerve可视化系统真实地再现正中神经干全长及其内部各神经束和束组的三维立体结构,可为临床修复正中神经损伤提供精确的断层解剖图像.