活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜病变的影响研究

目的 观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中转化生长因子-β2（TGF-β2）、Smad2及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、Ⅳ型胶原表达的影响,从TGF-β/Smads信号转导通路调控基质代谢的角度探讨活血解毒方改善糖尿病大鼠视网膜病变的可能作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠12只,大鼠适应性喂养1周后,按照随机数字表法选取8只大鼠以65 mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）,诱导糖尿病模型。剩余4只作为正常组注射等量的柠檬酸钠溶液。1周后尾静脉采血检测血糖,以禁食12 h血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病模型造模成功。将8只糖尿病模型大鼠按照拉丁方设计,分为模型组和活血解毒方组,各4只。活血解毒方组给予活血解毒方7.70 g/kg,1次/d,正常组和模型组予以等体积纯净水,持续16周。采用Real-time PCR法检测大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA及Smad2 mRNA的表达|Western blotting检测MMP-9、MMP-2蛋白的表达|免疫组织化学法检测Ⅳ型胶原的表达。结果 3组大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达比较,差异均有统计学意义（F=6.232,P=0.034|F=9.518,P=0.014）,其中模型组和活血解毒方组视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达水平均高于正常组|活血解毒方组视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达水平均低于模型组（P＜0.05）。3组大鼠视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达比较,差异均有统计学意义（F=17.387,P=0.001|F=8.593,P=0.008）,其中模型组和活血解毒方组视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达均高于正常组（P＜0.05）;活血解毒方组视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达均低于模型组（P＜0.05）。正常组大鼠视网膜中Ⅳ型胶原表达低,呈淡棕色|模型组：视网膜Ⅳ型胶原表达升高,呈深棕褐色|活血解毒方组：视网膜Ⅳ型胶原表达呈淡褐色,较模型组表达降低。结论 活血解毒方可能通过下调TGF-β2 mRNA及Smad2 mRNA的表达,干预TGF-β/Smads信号转导通路调控基质代谢,使MMP-9、MMP-2、Ⅳ型胶原的表达下调,从而改善糖尿病视网膜病变。     

从高血压肝火亢盛证的应激变化探讨肝主疏泄的生物学基础

目的:通过比较分析应激状态下高血压肝火亢盛证大鼠的宏观表征及微观理化指标的变化,探讨肝主疏泄的生物学基础。方法:模拟现代社会的应激刺激,给予高血压肝火亢盛证大鼠和正常Wistar大鼠相同的应激刺激,动态监测其血压、易激惹程度、行为及血液中Ang-Ⅱ、NE含量变化,进行多个维度的差异性及关联性分析。结果:高血压肝火亢盛证大鼠应激组与无应激组相比,应激组高血压肝火亢盛证大鼠血压升高幅度更大(P0.05),易激惹程度评分更高(P0.05),血液中Ang-Ⅱ、NE含量升高(P0.05),且应激结束2周后各项指标仍然显著高于无应激组高血压肝火亢盛证大鼠(P0.05),而Wistar应激组与无应激组相比,虽然也各项指标均有升高(P0.05),但相较高血压肝火亢盛证大鼠较晚出现升高,且应激结束2周后与对照组无统计学意义(P0.05)。结论:在肝疏泄功能正常的状态下,受到外界应激时,一定程度上机体可作出适应性反应,而高血压肝火亢盛证属肝失疏泄状态,应激刺激下出现应激损伤表现,其机制可能与外周Ang-Ⅱ、NE含量升高有关。     

葛根芩连汤对 2 型糖尿病模型大鼠作用的研究

目的探索葛根芩连汤单药及联合西格列汀对2型糖尿病模型大鼠血糖值、胰岛素耐量、葡萄糖耐量的作用,从而初步揭示葛根芩连汤治疗2型糖尿病的生物学机制。方法采用高脂饲料喂养合并链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导建立2型糖尿病模型大鼠58只,予以无菌水（正常组和模型组）、葛根芩连汤（中药组）、西格列汀（西药组）、葛根芩连汤联合西格列汀（中加西组）给药6周的治疗方案,动态监测各组模型动物体重、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,以及给药前、给药后3周、给药后6周的胰岛素耐量试验和葡萄糖耐量试验。结果给药6周后,与模型组相比,中药组FBG降低（P〈0．05）,葡萄糖耐量改善（P〈0．05）;西药组体重降低改善（P〈0．05）,FBG降低（P〈0．05）,胰岛素耐量、葡萄糖耐量改善（P〈0．05）;中加西组体重降低改善（P〈0．05）,FBG降低明显（P〈0．01）,胰岛素耐量、葡萄糖耐量均改善明显（P〈0．01）。给药各组疗效顺序如下：中加西组〉西药组〉中药组。结论葛根芩连汤与西格列汀单独使用时,西药组疗效优于中药组,联合使用时其疗效明显优于两药单独使用,表明葛根芩连汤对西格列汀的疗效有一定的辅助作用。     

基于脑功能核磁的抑郁症肝郁脾虚证大鼠中枢分子生物学基础研究

目的:研究抑郁症肝郁脾虚证大鼠中枢分子生物学基础。方法:慢性不可预知温和应激方法对大鼠进行造模,磁共振功能成像技术扫描大鼠全脑信息,利用SPM8软件计算出抑郁症肝郁脾虚证大鼠与正常组比较在低频震荡(Amplitude of the Low-frequency Fluctuations,ALFF)和局部一致性(Regional Homogeneity,Re Ho)中存在异常的脑区;高效液相色谱法对所探索的密切相关脑区进行单胺类神经递质检测;四逆散方剂反证确定其中枢分子生物学基础。结果:模型大鼠下丘脑Reho与ALFF均减弱,下丘脑DA、5-HT、5-HIAA和NE含量明显降低,差异有统计学意义(P0.05),四逆散组较模型组比较下丘脑5-HT含量显著升高(P0.05),NE、DA、5-HIAA存在升高趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论:下丘脑5-HT、5-HIAA、NE、DA是肝郁脾虚型抑郁症的分子生物学基础之一。     

葛根芩连汤对2型糖尿病大鼠表征的影响

目的:考察葛根芩连汤对2型糖尿病模型大鼠宏观表征、肛温、抓力及相关生化指标的影响,从而探索葛根芩连汤治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法:采用高脂饲料喂养合并链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病模型,予以葛根芩连汤9.1 g·kg-1组(GGQL1),18.2 g·kg-1组(GGQL2)不同剂量的治疗方案,采集大鼠宏观表征、肛温、抓力及相关生化指标。结果:给药后,GGQL1组与模型组相比,血糖降低(P<0.05),给药后1~3周饮食量降低(P<0.05);GGQL2组与模型组相比,血糖降低(P<0.05),给药1周后的饮食量减少,给药后5周抓力值升高(P<0.05),甘油三酯(TG)值降低(P<0.05);GGQL1,GGQL2组大鼠轻响抬头、活动减少、抓取反抗、眼睛黯淡无神、唇少光泽不润、舌少津液、鼻少光泽不润、毛干燥、爪干涩不润等表征均有不用程度改善。结论:葛根芩连汤可维持2型糖尿病大鼠体重,具有降低空腹血糖,减少进食量,增加抓力,降低TG作用,对于倦怠乏力、津液亏虚的症状具有一定改善作用。     

高血压肝火亢盛证动物模型相关指标的研究

目的: 前期研究发现自发性高血压大鼠(SHR)14~18周龄表现为稳定肝火亢盛证,现从宏观表征及行为学,微观理化指标,方剂反证验证,初步研究高血压肝火亢盛证生物学机制。方法: 14周龄SHR 55只经证候属性判别,筛选出肝火亢盛证SHR,根据收缩压差异用拉丁方分组法将其分为:模型组、三草降压汤组、四逆散组和硝苯地平组,正常血压大鼠(WKY)为正常组。动态采集大鼠宏观表征、行为学指标和收缩压;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠给药4,6周时血清5-羟色胺(5-HT),血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ),去甲肾上腺素(NE)含量。结果: 与正常组相比模型组14~20周龄血压值和易激惹程度升高(P<0.05),旋转耐受时间减少,且血清5-HT,ANGⅡ,NE升高。与模型组相比三草降压汤组和硝苯地平组给药4,6周收缩压降低(P<0.05),四逆散组收缩压先升高后降低,不稳定;三草降压汤组14~18周龄肝火亢盛证症状包括旋转耐受时间,易激惹程度和宏观表征有较明显的改善,四逆散组改善不明显,三草降压汤组血清5-HT,ANGⅡ,NE降低。结论: 14~18周龄是SHR稳定的肝火亢盛证期,5-HT,ANGⅡ,NE升高可作为高血压肝火亢盛证客观指标。     

肝纤维化肝气郁结证大鼠模型研究与证候时间窗方剂验证

目的为进一步研究肝纤维化相关机制及中医证候,建立中西医病证结合的肝纤维化大鼠模型。方法采用四氯化碳皮下注射法建立的肝纤维化肝气郁结证大鼠模型为研究对象,通过体重、旷场行为学测定、抓力测试、宏观表征采集等方法进行大鼠证候判定,病理进行肝纤维化疾病判定,并使用柴胡疏肝散、逍遥散、四逆散等方剂对证治疗,秋水仙碱对病治疗。结果多数肝纤维化大鼠造模4周后出现肝气郁结证,并且持续至造模12周;病理变化为造模4周多为肝纤维化S2~S3期,造模8周多为S3期,造模12周多为S4期;方剂反证肝气郁结证症状及病理结果有不同程度改善。结论该造模方法建立的肝纤维化肝气郁结证证候时间窗约为4~10周,方剂反证有一定效果,该病证结合模型建立基本成功。