基于Ras/Raf-1/ERK信号转导通路调控VEGF的表达探讨活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的：观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管形态的影响并探讨其可能的作用机制。方法：一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模后随机分为模型组和活血解毒方组。另设正常对照组。药物干预12周后,应用视网膜消化铺片法观察视网膜血管形态;应用Western blot法检测视网膜VEGF蛋白的表达,应用Real-Time PCR法检测视网膜VEGF、Ras、Raf-1与ERK mRNA的表达。结果：模型组视网膜毛细血管面积密度及内皮细胞/周细胞比例与较正常组升高(P<0.001),VEGF蛋白及VEGF、Ras、ERKmRNA表达升高(P<0.05),Raf-1mRNA表达升高(P>0.05)。与模型组比较,活血解毒方组视网膜毛细血管面积密度和内皮细胞/周细胞比例降低(P<0.01和P<0.001),VEGF蛋白与VEGF、Ras、Raf-1、ERK mRNA表达下降(P<0.05)。结论：活血解毒方能明显抑制视网膜毛细血管和内皮细胞的增生,其机制可能是通过干预Ras/Raf-1/ERK信号转导通路,下调VEGF在视网膜中的表达,抑制血管新生,从而改善DR。     

自发性高血压大鼠中医证候及其理化指标相关性研究

目的：探寻自发性高血压大鼠（SHR）稳定的证候时间窗及与理化指标的相关性,为深入研究高血压证候生物学机制奠定基础。方法：动态采集SHR和Wistar大鼠宏观表征、血压及行为学试验,Elisa和免疫组化法测定血清NE、NO及脑内NE含量。基于临床证候诊断标准进行动物表征等效转化判别证候属性。结果：SHR14～18周龄表现为肝火亢盛证,与10～12周龄SHR及同周龄wistar大鼠相比,血清NE升高、NO减少和脑内NE升高（P〈0.01）。结论：SHR稳定的肝火亢盛证为14～18周龄,与血清NE、NO和脑内NE含量变化密切相关。     

活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜病变的影响研究

目的 观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中转化生长因子-β2（TGF-β2）、Smad2及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、Ⅳ型胶原表达的影响,从TGF-β/Smads信号转导通路调控基质代谢的角度探讨活血解毒方改善糖尿病大鼠视网膜病变的可能作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠12只,大鼠适应性喂养1周后,按照随机数字表法选取8只大鼠以65 mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）,诱导糖尿病模型。剩余4只作为正常组注射等量的柠檬酸钠溶液。1周后尾静脉采血检测血糖,以禁食12 h血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病模型造模成功。将8只糖尿病模型大鼠按照拉丁方设计,分为模型组和活血解毒方组,各4只。活血解毒方组给予活血解毒方7.70 g/kg,1次/d,正常组和模型组予以等体积纯净水,持续16周。采用Real-time PCR法检测大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA及Smad2 mRNA的表达|Western blotting检测MMP-9、MMP-2蛋白的表达|免疫组织化学法检测Ⅳ型胶原的表达。结果 3组大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达比较,差异均有统计学意义（F=6.232,P=0.034|F=9.518,P=0.014）,其中模型组和活血解毒方组视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达水平均高于正常组|活血解毒方组视网膜中TGF-β2 mRNA、Smad2 mRNA表达水平均低于模型组（P＜0.05）。3组大鼠视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达比较,差异均有统计学意义（F=17.387,P=0.001|F=8.593,P=0.008）,其中模型组和活血解毒方组视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达均高于正常组（P＜0.05）;活血解毒方组视网膜中MMP-9、MMP-2蛋白表达均低于模型组（P＜0.05）。正常组大鼠视网膜中Ⅳ型胶原表达低,呈淡棕色|模型组：视网膜Ⅳ型胶原表达升高,呈深棕褐色|活血解毒方组：视网膜Ⅳ型胶原表达呈淡褐色,较模型组表达降低。结论 活血解毒方可能通过下调TGF-β2 mRNA及Smad2 mRNA的表达,干预TGF-β/Smads信号转导通路调控基质代谢,使MMP-9、MMP-2、Ⅳ型胶原的表达下调,从而改善糖尿病视网膜病变。     

葛根芩连汤对 2 型糖尿病模型大鼠作用的研究

目的探索葛根芩连汤单药及联合西格列汀对2型糖尿病模型大鼠血糖值、胰岛素耐量、葡萄糖耐量的作用,从而初步揭示葛根芩连汤治疗2型糖尿病的生物学机制。方法采用高脂饲料喂养合并链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导建立2型糖尿病模型大鼠58只,予以无菌水（正常组和模型组）、葛根芩连汤（中药组）、西格列汀（西药组）、葛根芩连汤联合西格列汀（中加西组）给药6周的治疗方案,动态监测各组模型动物体重、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,以及给药前、给药后3周、给药后6周的胰岛素耐量试验和葡萄糖耐量试验。结果给药6周后,与模型组相比,中药组FBG降低（P〈0．05）,葡萄糖耐量改善（P〈0．05）;西药组体重降低改善（P〈0．05）,FBG降低（P〈0．05）,胰岛素耐量、葡萄糖耐量改善（P〈0．05）;中加西组体重降低改善（P〈0．05）,FBG降低明显（P〈0．01）,胰岛素耐量、葡萄糖耐量均改善明显（P〈0．01）。给药各组疗效顺序如下：中加西组〉西药组〉中药组。结论葛根芩连汤与西格列汀单独使用时,西药组疗效优于中药组,联合使用时其疗效明显优于两药单独使用,表明葛根芩连汤对西格列汀的疗效有一定的辅助作用。     

葛根芩连汤对2型糖尿病大鼠表征的影响

目的:考察葛根芩连汤对2型糖尿病模型大鼠宏观表征、肛温、抓力及相关生化指标的影响,从而探索葛根芩连汤治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法:采用高脂饲料喂养合并链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病模型,予以葛根芩连汤9.1 g·kg-1组(GGQL1),18.2 g·kg-1组(GGQL2)不同剂量的治疗方案,采集大鼠宏观表征、肛温、抓力及相关生化指标。结果:给药后,GGQL1组与模型组相比,血糖降低(P<0.05),给药后1~3周饮食量降低(P<0.05);GGQL2组与模型组相比,血糖降低(P<0.05),给药1周后的饮食量减少,给药后5周抓力值升高(P<0.05),甘油三酯(TG)值降低(P<0.05);GGQL1,GGQL2组大鼠轻响抬头、活动减少、抓取反抗、眼睛黯淡无神、唇少光泽不润、舌少津液、鼻少光泽不润、毛干燥、爪干涩不润等表征均有不用程度改善。结论:葛根芩连汤可维持2型糖尿病大鼠体重,具有降低空腹血糖,减少进食量,增加抓力,降低TG作用,对于倦怠乏力、津液亏虚的症状具有一定改善作用。     

益心解毒方对气虚血瘀证心衰大鼠心肌组织中血小板——内皮细胞黏附分子和血管内皮生长因子表达的影响研究

目的从血管新生的角度,探讨益心解毒方对气虚血瘀证心衰大鼠心肌保护的作用机制。方法利用左冠状动脉结扎术制备大鼠心梗后心衰动物模型,通过宏观表征判定该疾病模型的证候属性,将成模后存活大鼠随机分为8组:假手术组,模型组,益心解毒方高、中、低剂量组,中西结合组,福辛普利组和芪苈强心组。治疗4周后取梗死边缘区组织进行Western Blot及RT-PCR法检测血小板—内皮细胞黏附分子(又称CD31)和血管内皮生长因子的表达。结果 Western Blot结果显示:模型组大鼠心肌组织中CD31蛋白表达量较假手术组显著下降(P=0.004),而高剂量组(P=0.042)、低剂量组(P=0.027)和芪苈强心组(P=0.015)与模型组相比均可提高心肌组织中CD31的表达。PCR结果显示:与假手术组相比,大鼠心肌组织的血管内皮生长因子表达在模型组(P=0.047),高剂量(P=0.023),中西结合组(P=0.008)均显著升高;而低剂量组大鼠心肌组织中血管内皮生长因子的表达显著低于模型组(P=0.004)和其它治疗组(P0.05)。结论益心解毒方对心梗所致气虚血瘀证心衰大鼠的心肌保护作用,可能是通过促进血管新生实现的,其机制可能与血管内皮生长因子有关,且具有剂量相关性。