调和肝脾法对肠易激综合征免疫学作用机制研究

目的：观察调和肝脾法对肠易激综合征患者免疫学指标的作用。方法：临床选择腹泻型肠易激综合征患者为研究对象,治疗前后分别检测患者血中IgG、IgA、IgM、C3、C4;血T淋巴细胞总数与亚群数目;IL-2水平,并设正常对照组。结果：腹泻型肠易激综合征患者治疗前血清IgM含量明显升高,外周血总T淋巴细胞、T8^＋细胞数目显著降低;淋巴细胞转化功能明显低下,IL-2低于正常组,经调和肝脾法治疗后过高的IgM含量显著下降（P〈0．01）,淋巴细胞转化功能增强,抑制性T淋巴细胞（T8^＋）恢复正常,IL-2也接近正常水平。结论：腹泻型肠易激综合征患者体液免疫亢进,细胞免疫功能低下,免疫调节机制紊乱,调和肝脾法中药能抑制某些亢进的体液免疫指标,增强细胞免疫功能,从而起到调节免疫功能的作用。     

冬凌草甲素对人肝癌MHCC-97H细胞系侵袭和迁移的作用

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用细胞培养技术培养人肝细胞癌MHCC-97H细胞,用不同浓度的冬凌草甲素处理肝癌细胞,采用划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验测定细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blot法检测LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白水平的改变。结果:冬凌草甲素可明显降低肝癌细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.05),且在一定浓度范围内具有明显的量效关系。冬凌草甲素干预处理细胞后,cofilin的蛋白水平无明显变化,LIMK-1和p-cofilin的蛋白水平明显下调。结论:冬凌草甲素体外具有抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与调控LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

自发2型糖尿病模型KKAy小鼠脑微血管病变的研究

目的 研究KKAy小鼠的脑微血管病变,明确糖尿病脑络病理变化的具体表现.方法 9～11周龄雄性KKAy小鼠和对照组的雄性C57BL/J小鼠,测量16、20、24、28周龄小鼠空腹血糖和体重.28周时处死动物,测定血清6-Keto-PGF1α和TXB2含量.光镜和电镜观察脑组织病理形态.结果 KKAy小鼠体重、血糖比同龄对照组C57BL/J小鼠高,血清TXB2含量增高,6-Keto-PGF1α降低.KKAy小鼠脑微血管内皮细胞核肿大,管腔狭小,腔内有红细胞、血小板淤滞.神经细胞胞核疏松肿胀,线粒体轻微肿胀,粗面内质网较瘦小,核糖小体减少.结论 在高血糖和异常6-Keto-PGF1α和TXB2含量的毒性作用下,KKAy小鼠脑组织微血管内皮细胞结构和功能均有损伤,最终导致神经细胞结构破坏.     

2 型糖尿病动物模型KKAy小鼠肝、肾的病变

目的 研究2型糖尿病动物模型KKAy小鼠的糖尿病肝、肾的病变过程,探索KKAy小鼠作为2型糖尿病并发多脏器病变模型的价值.方法 9～11周龄雄性KKAy小鼠(n=20)和对照组的雄性C57BL/J小鼠(n=25),测量14、16、20、24、28周龄小鼠空腹血糖和体重.两组动物分别于24、28周处死,测定血清肌酐、尿素;胆固醇、甘油三酯;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST).光镜观察两组小鼠肾脏、肝脏的病理改变.结果 ①KKAy小鼠体重、血糖比同龄对照组C57BL/J小鼠高(P<0.01).②24、28周龄KKAy小鼠血脂均较对照组高(P<0.05);24周龄KKAy小鼠肌酐,ALT比对照组高(P<0.05);28周龄KKAy小鼠的肌酐、ALT及AST比对照组高(P<0.05).③24、28周龄KKAy小鼠肾脏系膜基质增多,肾小管上皮细胞胞质出现明显空泡,肾问质有纤维化;肝脏结构紊乱,肝细胞胞质有明显空泡,肝细胞脂肪变.结论 KKAy小鼠14周龄以后可出现明显肥胖,高血糖,24周龄、28周龄出现高脂血症,有肝、肾形态和功能的损害,是较好的研究2型糖尿病病变过程及并发症的动物模型.     

扶肾降浊合剂对系膜增生性肾炎大鼠肾组织细胞因子表达的影响

目的观察扶肾降浊方对大鼠系膜增生性肾炎的治疗作用,探讨扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠肾组织TGF-β1、CTGF及Ang-Ⅱ表达的影响。方法将正常Wister大鼠40只随机分为对照组、模型组、苯那普利组(西药组)、扶肾降浊方组(中药组)。模型组与药物干预组分别制备慢性系膜增生性肾炎模型,16周后留尿检测24h尿蛋白,取血测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);处死大鼠并留取肾组织,HE及Masson染色观察肾脏病理形态学改变,免疫荧光方法检测各组肾组织中TGF-β1、CTGF、Ang-Ⅱ的表达。结果与对照组大鼠相比,模型组24h尿蛋白定量、BUN、Scr明显升高,肾间质TGF-β1、CTGF、Ang-Ⅱ阳性表达明显(P0.05),并出现细胞浸润及纤维化、肾小管萎缩。两给药物组各指标均呈弱阳性表达。两给药组的表达量较模型组明显下降,免疫荧光指标比较P0.05。结论扶肾降浊方可抑制大鼠Ms PGN模型肾组织TGF-β1、CTGF、Ang-Ⅱ的表达,减弱肾间质细胞与基质的增生,延缓肾纤维化的进程。     

扶肾降浊方含药血清对肾小管间质损害大鼠成纤维细胞TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

 目的:探讨扶肾降浊方对系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）大鼠肾小管间质损害的疗效机制。方法:采用扶肾降浊方水溶液灌胃干预Wistar大鼠常规制备含药血清;在MsPGN动物模型基础上,延长造模时间至20周,使其自然发展为肾小管间质损害模型,体外培养12、16和20周模型大鼠间质成纤维细胞;采用real-time PCR和Western blotting法检测扶肾降浊方含药血清对病理状态间质成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3和Smad7 mRNA及蛋白表达的影响。结果:MsPGN大鼠间质成纤维细胞TGF-β1和Smad3 mRNA和蛋白表达上调,Smad7 mRNA和蛋白表达下调。扶肾降浊方含药血清随着给药周期的延长可部分逆转MsPGN间质损害造成的上述mRNA和蛋白表达异常。结论: 扶肾降浊方含药血清对MsPGN大鼠间质成纤维细胞保护作用可能与调节TGF-β1/Smads信号转导通路有关。     

扶肾降浊方对系膜增生性肾炎肾小管间质损害大鼠COLⅠ及COLⅢ蛋白和基因表达的影响

目的观察扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠肾小管间质细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原(COLⅠ及COLⅢ)蛋白和基因的调节作用。方法采用系膜增生性肾炎模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、扶肾降浊方中药组、贝那普利西药组。采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法分别检测实验12周、16周和20周末各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和基因的表达。结果 12周、16周和20周末的模型组肾脏COLⅠ及COLⅢ蛋白表达呈强阳性(P0.01),COLⅠ及COLⅢ基因表达上调(P0.01),扶肾降浊方中药组和贝那普利组大鼠肾脏COLⅠ及COLⅢ蛋白表达均较模型组降低(P0.01),COLⅠ及COLⅢ基因表达亦均较模型组下调(P0.05);随着造模时间的延长,模型组肾小管COLⅠ及COLⅢ蛋白和基因表达均呈升高趋势,治疗组仍作用明显(P0.05)。结论扶肾降浊方可通过基因和蛋白水平调节COLⅠ和COLⅢ在肾脏的表达,减少COLⅠ和COLⅢ在肾小管间质的积聚以减轻肾间质纤维化,从而对肾小管间质损害起到防治作用。     

密蒙花方对链脲佐菌素性糖尿病大鼠视网膜病理形态的影响

目的探讨密蒙花方对链脲佐菌素性糖尿病大鼠视网膜病理形态的影响。方法选用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠作为动物模型,以羟苯磺酸钙胶囊(昊畅)作为阳性对照药。密蒙花方煎剂分为低、中、高3种不同浓度。糖尿病大鼠成模后分别以前述不同药物灌胃4个月。进行以下几方面的研究:①STZ性DM大鼠一般状况观察:饮食、尿量、体质量变化等。②HE染色观察STZ性DM大鼠视网膜病理形态学变化。③免疫组织化学法检测STZ性DM大鼠视网膜ICAM-1、E-selectin蛋白表达情况。结果①一般状况:STZ诱导的DM大鼠高血糖状态持久稳定,表现为明显的"三多一少"典型症状。密蒙花方中剂量组体质量高于DM模型组,具有统计学意义(P<0.05)。②DM模型组视网膜各层出现典型的病理学改变,密蒙花方中剂量组视网膜病理学改变较DM模型组减轻。③DM模型组大鼠视网膜ICAM-1、E-selectin表达较正常组明显增多(P<0.01);昊畅组及各密蒙花方组ICAM-1、E-selectin表达均较模型组有不同程度的减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。与昊畅组比较,密蒙花方中剂量组ICAM-1、E-selectin表达降低,差异具有统计学意义。结论 STZ诱导的DM大鼠是一种相对简单易行、可靠的模型制备方法。密蒙花方中剂量能在一定程度上减轻STZ性DM大鼠视网膜及视网膜毛细血管的病理改变。密蒙花方改善大鼠视网膜及视网膜毛细血管病理改变的作用与减少视网膜ICAM-1、E-selectin表达有关。     

扶肾降浊方对肾小管间质损害大鼠TGF-β 1/Smads/ILK信号转导通路的影响

目的研究扶肾降浊方对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾小管间质损害的疗效机制。方法在MsPGN动物模型基础上,延长建模时间至20周,使其自然发展为肾小管间质损害模型。实验设中药组、西药组、模型组及空白组。中药组给予扶肾降浊方17.01g·kg-1灌服,西药组以贝那普利1.8mg·kg-1灌服,模型组和空白组给予等量生理盐水,连续20周,分别于实验第12,16和20周末剖取大鼠肾组织,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及整合素连接激酶(ILK) mRNA表达水平。结果模型大鼠肾组织TGF-β1/Smads/ILK信号转导通路发生改变,其中TGF-β1、Smad3、ILK mRNA表达上调,Smad7 mRNA表达下调。扶肾降浊方随着给药周期的延长能部分逆转肾小管损害造成的上述mRNA表达异常。结论扶肾降浊方对MsPGN大鼠肾小管间质损害保护作用机制可能与调节TGF-β1/Smads/ILK信号转导通路有关。     

葛根素对KKAy小鼠肝脏损害的保护作用

目的观察2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肝脏的病理变化及葛根素对其肝脏损害的保护作用,探寻糖尿病治疗新思路——保护肝脏的结构和功能。方法9～11周龄雄性KKAy小鼠随机分为模型组和葛根素组,对照组9～11周龄雄性C57BL/J小鼠,每组20只,测量16、20、24、28周龄小鼠体重,24、28周龄空腹血糖。3组动物分别于24、28周处死,测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TCHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)数值。光镜观察3组小鼠肝脏的病理改变。结果24周龄前,葛根素可以有效控制小鼠体重的增加(P<0.05);28周龄葛根素组小鼠的TCHO、血清ALT和AST比同龄模型组有所降低(P<0.05);普通光镜观察,发现28周龄模型组小鼠肝脏结构紊乱,肝细胞胞浆有明显空泡,肝细胞脂肪变。结论早期应用葛根素,可以改善糖尿病小鼠肝脏结构及功能,对糖尿病造成的肝脏损害具有较好的保护作用。