雷公藤甲素对体外培养大鼠胰腺组织的损伤作用

目的通过体外实验研究雷公藤甲素对大鼠胰腺组织的损伤作用。方法以空白组为对照,不同浓度的雷公藤甲素作用于体外培养的胰腺组织,12 h后,MTT法检测其吸光度(A490值),计算胰腺组织存活率;碘-淀粉比色法测定胰腺组织分泌的淀粉酶含量。结果随着雷公藤甲素浓度的升高,胰腺组织的存活率逐渐降低,其IC50值为0.002 mg/ml,同时胰腺淀粉酶含量升高(与对照组比较,P0.05)。结论一定浓度的雷公藤甲素对胰腺组织有损伤作用。     

白苞裸蒴化学成分研究

目的研究白苞裸蒴Gymnotheca involucrata全草的化学成分。方法利用反相硅胶柱色谱和反相制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-、13C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果从白苞裸蒴95%乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为N-苯甲酰基-2-羟基-2-(4′-羟基苯基)-乙胺(1)、N-苯甲酰基-2-(3′,4′-二羟基苯基)-乙胺(2)、6,9-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(3)、对羟基苯乙腈(4)、腺苷(5)、5-hydroxy-3,4-dimethy-5-pentyl-2(5H)-furanone(6)curculonone A(7)、3α-hydroxy-5,6-epoxy-7-megastigmen-9-one(8)、gymnothelignan J(9)、gymnothelignan I(10)。结论所有化合物均为首次从白苞裸蒴中分离得到。     

TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用

目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.     

灵雷菌质对阿霉素诱导大鼠肾病模型的作用

目的 考察灵芝双向固体发酵雷公藤得到的灵雷菌质 (G30) 对阿霉素诱导的大鼠肾病模型的作用。方法 尾 iv 阿霉素 6.5 mg/kg 复制大鼠肾病模型,分别给予不同剂量的 G30、雷公藤生药、灭菌生药 (灭菌药) 及雷公藤多苷两周,检测大鼠体质量、24 h 尿蛋白量、血清总蛋白 (TP)、总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、丙氨酸转氨酶 (ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST)、血清尿素氮 (BUN)、血清肌酐 (SCr)、血清肌酸激酶 (CK)、肌酸激酶同工酶 (CK-MB) 等生化指标。结果 与模型组比较,G30 增加肾病大鼠体质量,降低 24 h 尿蛋白、血清 TG、TC 量,同时升高血清 TP 水平 (〖WTBX〗P ＜0.05);与生药组比较：G30降低肾病大鼠 24 h 尿蛋白、血清 BUN、SCr,同时使血清 CK、ALT 量保持正常水平,光镜下显示 G30 减轻了肾病大鼠的肾小球充血及空泡样变性等病理变化。结论 G30 对阿霉素诱导的肾病有一定的治疗作用,与雷公藤生药比较毒性低、效果好。     

半夏曲炮制中4种优势微生物的生理生化特性及黄色素含量测定

目的研究半夏曲中4种优势微生物的生理生化特性,测定炮制过程中不同时间点各样本的黄色素含量,为揭示半夏曲炮制机制奠定基础。方法以半夏曲中筛选出的4株优势菌枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、宛氏拟青霉Paecilomyces variotii、丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis、黑曲霉Aspergillus niger为研究对象,分别测定它们的最适宜生长温度、pH值,利用糖类的产酸能力以及产淀粉酶、蛋白酶、黄色素的能力,同时测定半夏曲炮制过程中5个不同时间点样本的黄色素含量。结果枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉生长的最适温度分别为35℃、29℃、29～31℃、39℃,最适pH值分别为7.0、7.0、7.5、7.0。4种菌均具有产淀粉酶和蛋白酶的能力,宛氏拟青霉、丝衣霉菌具有产黄色素能力。5个不同时间点样品的黄色素质量分数分别为69.875、69.875、71.750、119.500、137.875μg/g。结论 4种优势微生物在半夏曲炮制中可能起重要作用。     

灵雷菌质对大鼠类风湿性关节炎作用的实验研究

 目的 考察灵雷菌质对佐剂型类风湿性关节炎（adjuvant arthritis,AA）大鼠的治疗作用。方法 建立弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,CFA)诱导的大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA) 模型,将大鼠分为空白组、灵雷菌质高剂量给药组、灵雷菌质低剂量给药组、雷公藤多苷片给药组、模型组,连续灌胃给药2周后,检测各组大鼠的体重、关节肿胀度、关节炎指数、关节病理变化、血清肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β。结果 灵雷菌质能改善大鼠一般状况并提高AA大鼠体重,缓解AA大鼠关节红肿程度,降低其关节炎指数,改善RA大鼠的关节病理变化,显著抑制TNF-α和IL-1β的表达。结论 灵雷菌质对佐剂型关节炎有一定的治疗作用。     

鲍氏针层孔菌原生质体融合育种的研究

目的：鲍氏针层孔菌优良菌株的选育。方法：通过5.8SrDNA-ITS序列,生长速度、液体发酵生产菌丝体和胞外多糖产量等方面,对不同来源的菌株进行分析比较,筛选出优良的亲本菌株。在此基础上,采用双灭活标记,原生质体PEG诱导融合的方法。结果：筛选出亲本菌株SA02和SA04,以及编号为R002、R003、R005等三个融合菌株与两亲本菌株都具有拮抗反应,且菌落性状表现出不同于亲本的性状。结论：R002、R003和R005初步确定为双亲株的融合子。     

雷公藤提取物重复剂量给药对大鼠胰腺组织的病理损伤北大核心CSCD

目的观察雷公藤对大鼠胰腺组织的病理损伤。方法参照长期毒性实验方法,将清洁级SD大鼠随机分成4组,即空白对照组、0.04 g/kg组、0.16 g/kg组和0.64 g/kg组。连续灌胃(ig)不同剂量雷公藤95%乙醇提取物3个月,取胰腺;0.64 g/kg组分别于用药30和90 d后及停药30 d后取胰腺组织,采用光学显微镜及透射电镜技术动态观察胰腺组织的病理结构变化,采用连续检测法测定各时间点血清淀粉酶含量。结果 0.04 g/kg组用药90 d后大鼠胰腺散在淋巴细胞增多,个别细胞胞浆空亮;0.16 g/kg组用药90 d后胰岛体积大,纤维增生;0.64 g/kg组用药90 d后,细胞胞浆空亮,间质纤维增生;0.64 g/kg组用药30 d后细胞水肿,小灶炎细胞浸润,线粒体肿胀;0.64 g/kg组停药30 d后胰腺内有红色分泌物潴留,纤维组织增生,伴淋巴细胞浸润,细胞线粒体肿胀、空泡化。0.64 g/kg组给药30和90 d和停药30 d后的血液淀粉酶水平无显著的上升或下降。结论雷公藤可引起大鼠胰腺组织的病理损伤,并随给药剂量加大和时间延长损伤加重且呈不可逆性。     

淡豆豉炮制过程中产纤溶酶微生物的筛选和鉴定

目的 筛选和鉴定淡豆豉炮制过程中产纤溶酶的优势菌株。方法 按《中国药典》2020年版制备淡豆豉；采用酪蛋白平板法和纤维蛋白平板法分别对淡豆豉炮制不同时间点样本中产纤溶酶的微生物进行初筛和复筛；将产纤溶酶微生物分别接种在特定的液体培养基中培养，获得纯种发酵液，用纤维蛋白平板法测定发酵液的纤溶酶活力；应用16S rDNA和18S rDNA通用引物分别对产纤溶酶细菌和真菌进行PCR扩增、对扩增产物进行测序，测序结果通过NCBI同源性比对、MEGA 4.1软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定。结果 筛选获得3种产纤溶酶细菌，分别为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia、微球菌Micrococcus。纤维蛋白平板法测定纯种发酵液纤溶酶活力的结果显示，嗜麦芽窄食单胞菌所产纤溶酶活力最高，达527.49 IU/mL。结论 淡豆豉炮制过程中存在高产纤溶酶的优势菌株，淡豆豉的溶栓作用值得进一步研究。为揭示淡豆豉炮制中纤溶酶形成机制奠定基础。     

PCR-DGGE技术研究淡豆豉炮制过程中微生物菌群的动态变化

目的采用PCR-变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术研究淡豆豉Sojae Semen Praeparatum炮制过程中微生物菌群的动态变化,为揭示其炮制机制奠定基础。方法运用PCR-DGGE技术研究淡豆豉炮制不同时间的样本中细菌、真菌菌群种类和数量的动态变化,通过非加权组平均法(unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)聚类分析各炮制时间点的菌系差异。结果发酵至"黄衣上遍"过程中细菌种类丰富,真菌以曲霉菌为主;再闷过程中细菌以乳杆菌为主,真菌以隐球菌为主。发酵第1天恶臭假单胞菌、枯草芽孢杆菌占优势;发酵第3天嗜麦芽寡养单胞菌、鞘氨醇杆菌属和米曲霉为优势菌种;发酵第6天解淀粉芽孢杆菌、曲霉菌和丝孢酵母为优势菌种;再闷第3天以枯草芽孢杆菌、丝孢酵母和黑曲霉占优势;再闷第9天以枯草芽孢杆菌、那须乳杆菌、弧形乳杆菌和隐球菌为优势菌株;再闷第15天以枯草芽孢杆菌、弧形乳杆菌、隐球菌、丝孢酵母属和2株不可培养真菌为优势菌。整个炮制过程中,产酸克雷伯氏菌、枯草芽孢杆菌、弧形乳杆菌作为优势菌种始终参与。"黄衣上遍"阶段与再闷阶段的微生物群落结构差异大。发酵第3天与第6天的细菌、真菌群落结构相似度最高,分别达76.4%和66.1%;而发酵第3、6天与再闷第9天的细菌群落结构相似度均最低,仅为24.5%,发酵第3天与再闷第15天真菌群落结构相似度最低,仅11.2%。结论炮制过程中微生物群落结构的动态变化和独特的微生物种类可能决定了淡豆豉特有的性味、功能,同时也从微生物学角度印证了再闷的重要性。