血浆HOXA7基因甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

  目的  检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）血浆中同源盒基因（homeobox, HOX）家族成员HOXA7基因启动子甲基化水平, 并评估HOXA7甲基化与肿瘤标志物血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）、糖类抗原（carbohydrate antigen 199, CA199）和细胞角蛋白19片段抗原21-1（cytokeratin 19 fragment antigen 21-1, Cyfra21-1）水平辅助诊断NSCLC的价值。  方法  选取河南省肿瘤医院2012年1月至2016年12月住院的经病理组织学确诊为NSCLC患者80例为试验组, 50例健康人为对照组。采用定量甲基化特异性PCR（quantitative methylation-specific PCR, qMSP）检测血浆HOXA7甲基化水平, 电化学发光检测血浆CEA、CA199和Cyfra21-1水平。构建受试者工作特征曲线（ROC）分析各指标鉴别NSCLC的临床价值, 并分析HOXA7甲基化与临床病例参数、肿瘤标志物之间的关系。  结果  与健康对照组相比, NSCLC患者血浆中HOXA7基因甲基化水平异常增高（χ2＝36.972, P < 0.0001）, HOXA7甲基化诊断NSCLC的敏感度为68.8%（55/80）, 特异度为86.0%（43/50）。血浆HOXA7甲基化与性别、年龄、有无吸烟史和病理类型无关（均P>0.05）, 但与TNM分期有关（P < 0.05）, 其中Ⅳ期患者血浆HOXA7甲基化水平最高。肿瘤标志物中Cyfra21-1诊断NSCLC的价值最高, 敏感度为70.00%, 特异度为90.00%。HOXA7甲基化联合三指标诊断NSCLC的效能最高（AUC=0.893, 敏感度73.75%, 特异度94%）。HOXA7甲基化与Cyfra21-1的相关系数最高（r=0.564, P < 0.05）。  结论  HOXA7基因甲基化水平对NSCLC的诊断有一定价值, 与NSCLC的恶性程度相关, 联合肿瘤标志物检测可以提高NSCLC的诊断效能。      

PSMD7基因在人食管鳞癌组织中的表达及影响癌细胞增殖、凋亡的机制研究

背景与目的：26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基7（26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 7,PSMD7）作为组成19S蛋白酶体盖子结构的核心成员是否参与肿瘤的发生、发展,以及具体的分子机制尚不清楚。本实验将研究PSMD7基因在人食管鳞癌组织中的表达,以及对癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测食管鳞癌及其癌旁正常组织标本中PSMD7的mRNA及蛋白表达情况。在人食管鳞癌细胞系TE-1中,用慢病毒介导的RNA干扰技术下调PSMD7的表达,观察细胞增殖及凋亡的变化,检测线粒体膜电位的变化、细胞质中Cyt C的表达以及凋亡相关因子的表达。结果：PSMD7基因的mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织（P<0.05）,PSMD7蛋白的高表达与淋巴结转移阳性呈正相关（P<0.05）。抑制PSMD7蛋白的表达可使细胞的增殖能力降低（P<0.05）,并促进细胞的凋亡（P<0.05）,同时线粒体膜电位降低,促进Cyt C释放进入细胞质,激活caspase级联反应,说明抑制PSMD7的表达诱导细胞凋亡是通过线粒体信号通路进行的。结论：PSMD7在食管鳞癌中呈高表达,并通过线粒体依赖的方式促进TE-1细胞凋亡。     

生存素及bcl-2基因表达在吲哚美辛抗胃癌细胞株 MGC803 增殖、诱导凋亡中的作用

目的:探讨吲哚美辛(IN)对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及可能的机制.方法:观察不同浓度IN(50,100,200μmoL稬-1)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因生存素、bcl-2 mRNA表达的影响,MTT法检测细胞生长抑制率;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期变化;RT-PCR检测生存索、bcl-2 mRNA的表达.结果:IN对MGC803细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,并具有浓度、时间依赖性;IN作用于细胞48 h后,细胞周期改变表现为G0/G1期比例增加,S期及G2/M期下降;细胞经200μmoL稬-1IN作用后,生存素mRNA表达逐渐减弱(P<0.05),bcl-2 mRNA表达无明显变化.结论:IN可抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,干扰细胞增殖周期,生存素mRNA表达下调可能是其作用机制之一.     

杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白88在鞭毛组装过程中的功能分析及其原核表达

目的:克隆杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白(IFT)88的cDNA全长并分析其部分功能。方法:根据盐藻转录组测序片段,分别设计其3’端内、外侧引物及5’端内、外侧引物,PCR扩增其全长。提取盐藻再生过程中不同时间段的总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR,检测IFT88 mRNA的表达情况。随后利用ORF finder预测并扩增其开放阅读框,连接到pET28a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在1mmol/LIPTG、37℃的条件下诱导4h,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测IFT88蛋白表达情况。结果:克隆拼接后共得到开放阅读框2400bp,编码799个氨基酸。BLAST显示该氨基酸序列与多个物种的IFT88有较高同源性。SDS-PAGE结果显示,与未诱导组相比,诱导组在90000左右有一条明显的条带。在鞭毛再生过程中,杜氏盐藻IFT88 mRNA的表达量在去鞭毛后30min左右时最高,随后快速下降。结论:扩增得到杜氏盐藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能参与盐藻鞭毛组装。     

杜氏盐藻FKBP cDNA的克隆及其在鞭毛解组装中的功能

目的:克隆杜氏盐藻FK506结合蛋白(FKBP)的cDNA片段并探讨其与鞭毛微管解组装的联系.方法:提取杜氏盐藻总RNA,根据已知盐藻FKBP cDNA 3'端序列,用5'RACE方法扩增该cDNA的5'端序列,拼接得到全长并对其序列进行分析.秋水仙碱处理对数生长期杜氏盐藻,处理0、20、40、60、80、100、12...     

杜氏盐藻FLA8基因全长的克隆及鉴定

目的:获得FLA8基因cDNA序列.方法:根据衣藻、小球藻等驱动蛋白-2亚基的氨基酸高度保守序列GYNGTIF、NEDPKDA设计一对简并引物,采用RT-PCR及3'RACE和5'RACE的方法扩增杜氏盐藻FLA8基因的全长.结果:克隆得到的杜氏盐藻FLA8基因cDNA全长序列为2 612 bp,序列分析显示其包括90...     

羟自由基调控血管平滑肌细胞蛋白变化的生物信息学研究

目的 通过对羟自由基(·OH)诱导血管平滑肌细胞差异表达蛋白的系统生物信息学分析，探讨·OH调控血管平滑肌细胞的相关分子机制。方法 对485个差异表达蛋白(337个上调和148个下调蛋白)进行功能和通路富集、亚细胞定位预测、蛋白-蛋白互作(PPI)和信号网络构建，以及基因-miRNA、转录因子-基因和蛋白-化学品互作分析。结果 ·OH诱导的血管平滑肌细胞差异表达蛋白显著富集在一系列细胞核和细胞质中及与蛋白质活动有关的通路上；在PPI网络中，连环蛋白β1、组蛋白脱乙酰酶1和部分核糖体、蛋白酶体蛋白可能是·OH调控的关键节点蛋白。此外，发掘出一批miRNA(例如mir-181a-5p)、转录因子(例如上游结合转录因子)和化学品(例如四氯二苯二氧芑),亦可能参与·OH对血管平滑肌细胞的调控。结论 预测·OH可调控多种分子，影响血管平滑肌细胞功能。     

不同引经药配伍大黄-丹参药对抗大鼠肝纤维化的比较

目的:观察不同引经药配伍大黄-丹参药对抗大鼠肝纤维化的效应差异,探讨引经药的增效作用。方法:健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常组,模型组,丹参-大黄药对组(5.0 g·kg~(-1)),药对加桔梗组(5.0 g·kg~(-1)+1.5 g·kg~(-1)),药对加柴胡组(5.0 g·kg~(-1)+1.5 g·kg~(-1))和药对加细辛组(5.0 g·kg~(-1)+0.3 g·kg~(-1)),除正常组外,其余各组均腹腔注射四氯化碳(CCl4)复制肝纤维化模型。从第3周开始,除注射造模外,各实验组分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组灌胃双蒸水,连续6周。末次给药后,取血和肝脏,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中层黏连蛋白(LN),透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;酸水解法检测肝匀浆中羟脯胺酸(HYP)的含量;观察肝脏的组织形态改变;免疫组化法检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:与模型组比较,各给药组大鼠血清中ALT,AST,ALP活性和LN,HA,PCⅢ的含量显著降低,肝匀浆中HYP含量降低,肝组织TGF-β1表达减少(P0.05,P0.01),肝组织结构明显改善;与药对组相比,药对加柴胡组大鼠ALT,AST,ALP活性和LN,HA,PCⅢ的含量降低,肝组织TGF-β1表达减少(P0.05,P0.01)。结论:大黄-丹参药对能有效减轻肝纤维化的程度,引经药柴胡可增强大黄-丹参药对的抗肝纤维化作用。