HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定

目的研究HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌（DH5α/pcDNA3.1-pp65）的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析（依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析）对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础。     

四针状氧化锌复合抗菌材料滤片抑菌和毒性作用的实验研究

笔者所在教研室参与研发的抗菌材料——四针状氧化锌复合抗菌材料前期样品为直径18mm的易吸水多孔圆状滤片，经常规抑菌试验测试，发现具有较强的抑菌作用。现将结果报告如下。     

一种短期保存肺炎双球菌的简单方法

目的寻求一种简单易行的保存肺炎双球菌的方法. 方法在-20℃和-80℃条件下,用体积分数为10%的甘油新鲜兔脱纤维血(新鲜兔血)、体积分数为10%的甘油陈旧兔脱纤维血(陈旧兔血)和脱脂鲜奶作为保存剂,观察保存一定时间后肺炎双球菌存活百分率和其生物学性状的变化. 结果在-80℃保存18个月其存活率均达100%,且生物学性状保存前后无明显变化;在-20℃该菌株保藏12个月以上时,用新鲜兔血、陈旧兔血和脱脂鲜奶保存剂保存该菌,其存活率分别为70%、30%和55%,差异有显著性(P<0.01);而用新鲜兔血方法保存的菌株,其菌形、胆汁溶解和荚膜试验与保存前菌株相似,生化反应与保存前菌株相比稍有改变,而其它生物学性状无变化. 结论在-80℃保存该菌,上述3种保存剂均可使用;在-20℃保存该菌,应使用新鲜兔血作为保存剂.     

232例淋球菌感染的实验室诊断

淋球菌是我国目前性病中最常见的一种病原菌。病人泌尿生殖道分泌物涂片,革兰氏染色镜检的方法在男性急性病人的诊断中较有意义,而女性病人则由于阴道杂菌多,常有形态相似的细菌寄生,而且临床     

HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备

目的 采用原核表达系统获得HCMV pp65目的 蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清.方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清.采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性.结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清.结论 在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清.为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础.     

关于加强高等医学院校青年教师队伍建设的实施与思考

教师队伍建设是高校发展的永恒主题，随着我国高校招生规模的不断扩大，大批青年教师充实到了医学高等院校教学和科研工作的第一线，如何加强青年教师队伍建设成为目前提高教学质量的重要环节，笔者从多角度展示本教研室就加强青年教师队伍思想道德建设和制度建设的实施经验和体会，以供借鉴。     

分离病鸡3株大肠埃希菌的鉴定及毒力和细胞毒测定

目的分离病鸡中3株大肠埃希菌和鉴定其对小鼠的致病力及对Vero细胞毒性作用.方法将按常规细菌的分离并鉴定的3株大肠埃希菌,接种至昆明系小鼠体内做毒力试验,计算死亡率和LD50(50%致死量).采用微量单层细胞培养法测定细菌上清液的细胞毒性作用.结果分离的3株细菌生物学性状均符合大肠埃希菌.分离的3株细菌对小鼠致病率为100%;菌量达6×1011CFU/L时死亡率为100%;LD50为1.5×1010 CFU/L.分离的3株细菌对2株细胞均无细胞毒性作用.结论分离的3株致病性大肠埃希菌与O157∶H7 株对小鼠致病力相似,可能是潜在的人类的传染源.