合肥市某小学急性呼吸道感染疫情的病原学分析

目的分析合肥市某小学一起急性呼吸道感染疫情病原学,为疫情发生的生物学病因提供依据。方法采用实时荧光PCR方法(Real-time PCR)对采集的10份患者咽拭子标本进行流感病毒和腺病毒核酸筛查,检出的腺病毒核酸阳性标本经普通PCR扩增腺病毒六邻体基因片段以进行序列测定,测序结果在Genbank上进行Blast比较并作系统进化树分析,以确定其病毒型别。结果 10份咽拭子标本流感病毒核酸检测结果均为阴性,7份标本检出腺病毒核酸,进一步通过基因测序、序列比对、基因进化树分析确定为腺病毒3型。结论依据实验室检测结果并结合流行病学调查和临床症状,确认该起急性呼吸道感染疫情的病原体为人腺病毒3型。     

合肥地区2011年健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌率调查与分析

目的了解2011年合肥地区健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌状况,为制定流脑的防控措施提供依据。方法按分层整群抽样方法,在全市范围于流脑流行前期采集6个年龄组健康人群咽拭子666份,现场接种于卵黄双抗琼脂培养基进行脑膜炎奈瑟氏菌分离培养,对可疑菌落进行生化和血清学鉴定。结果咽拭子脑膜炎奈瑟氏菌阳性检出31份,带菌率4.65%;菌株分别为A、B、C、D、X群,其中A群14株、B群12株,带菌率分别为45.16%、38.71%,C群3株,带菌率为9.68%,D、X群各1株。12～15岁儿童流脑带菌率最高,为10.00%,各年龄组带菌率差异有统计学意义(χ2=13.06,P<0.05)。男性带菌率5.49%、女性带菌率3.75%,城区人群带菌率4.98%、农村人群带菌率4.47%,差异均无统计学意义。结论合肥市健康人群流脑带菌率为4.65%,12～岁组人群流脑带菌率较高,警惕A群流脑菌群的流行。     

2011～2015年合肥市手足口病流行病学及病原学特征分析

目的 分析2011～2015年合肥市手足口病的流行病学和病原学特征,为手足口病的防控工作提供参考。方法 手足口病发病资料来自2011～2015年传染病监测报告信息管理系统,病原学检测数据来自监测点和现场调查采样,统计方法运用描述性分析和χ²检验,对粪便标本采用RT-PCR扩增基因序列测定,并利用生物学软件分析。结果 手足口病年平均发病率196.11/10万,发病高峰在4～6月,发病年龄以5岁以下儿童为主,占总发病人数的94.45%;肠道病毒71型（EV71）为优势株,感染机体引起重症手足口病风险较大。进化树分析表明合肥市EV71属于C4a亚型。幼儿园健康儿童病毒携带率6.80%,均为其它肠道病毒。结论 合肥市手足口病发病率较高,EV71是优势株,为C4a亚型,与中国大陆优势毒株流行趋势一致。在做好全面防控的同时,应重点做好5岁以下儿童的防控工作。     

乙肝免疫球蛋白在乙肝感染孕妇产前阻断中的作用

目的 对合肥市乙肝感染孕妇母婴阻断结果进行分析,评价现行的产前阻断方式的有效性,为阻断乙肝病毒垂直传播提供依据。方法 利用已经建立的合肥市乙肝感染孕妇监测系统,按照乙肝感染孕妇乙型肝炎病毒-DNA（hepatitis B virus-DNA,HBV-DNA）滴度的风险区和产前是否注射乙肝免疫球蛋白分组,在婴儿一周岁时检测乙肝五项,乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen, HBsAg）阳性者为阻断失败。同时对注射乙肝免疫球蛋白（hepatitis B immune globulin,HBIg）的乙肝感染孕妇进行注射前和注射后HBV-DNA病毒滴度监测,以研究产前注射乙肝免疫球蛋白对乙肝病毒垂直传播的影响。结果 2009-2013年全市共监测乙肝感染孕妇395例,对照组的阳性率为2.74%,阻断组的阳性率为3.88%。χ2检验显示两组间阳性率差异无统计学意义。注射HBIg的乙肝感染孕妇注射前和注射后HBV-DNA病毒滴度变化差异无统计学意义。结论 乙肝感染孕妇产前注射乙肝免疫球蛋白的效果有待进一步研究。     

HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定

目的研究HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌（DH5α/pcDNA3.1-pp65）的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析（依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析）对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础。     

一起食用苦瓠子引起幼儿食物中毒调查

2012年5月,合肥市某幼儿园发生一起幼儿群体性食物中毒事件.经流行病学调查,并根据临床表现及实验室检测,证实是因食用苦瓠子引起的食物中毒. 1事件概况 该幼儿园位于市区某大型小区内,为某高校子弟幼儿园联营分园.该园设有食堂,向幼儿提供早、中、晚餐,外加下午水果、饼干等食物.在校幼儿共9个班级327人,教师45人,教师与幼儿分开就餐,菜谱不同,但主食米饭相同.5月24日11:00,该园共307名幼儿在园内就餐,主要食物为瓠子烧肉、菠菜鸡蛋汤、白米饭.就餐20 min后,部分幼儿相继出现恶心、呕吐、头晕、腹痛等症状,均口述中餐食用的瓠子很苦.截至24日20:00,该园共累计报告食物中毒47名患儿,罹患率为15.3％(47/307).患儿被送往医院救治,均为门诊病例,无重症和死亡病例.截至24日23:30,患儿均好转离院,预后良好.     

肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测

目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRED、Sosui、SOPMA、Phyre、Bepipred等生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质和潜在的B细胞表位。结果 EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白没有信号肽,无跨膜区,是一个亲水性蛋白;VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;VP1的三级结构中4～121氨基酸部分在蛋白表面形成一环状结构(VPl GH loop);EV71 VP1潜在的B细胞表位共有6个可能的抗原表位。其中,预测分值最高的线性表位区域位于157～177位氨基酸残基。结论成功预测了EV71六安地区分离株VP1二级结构、三级结构和B细胞表位,为制备EV71基因工程疫苗和诊断抗原的开发提供了理论基础。     

六安地区手足口病患儿肠道病毒分离鉴定与临床表现

目的 对六安地区手足口病流行区患儿标本进行病毒分离与鉴定,为进一步预防和控制该病流行奠定基础.方法 采集手足口病患者咽拭子和疱疹液标本,进行病毒分离、中和实验和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,同时对肠道病毒71型(EV71)抗原决定簇部位VP1区进行核苷酸序列测定与分析.结果 14份咽拭子和8份疱疹液标本中分离得到6株病毒,经中和实验、RTPCR及VP1片段检测与测序证实为EV71型,与BrCr-ts株、台湾分离株、深圳分离株一致性分别为98%、84%和83%.结论 该流行区2008年爆发的手足口病病原体为EV71型.     

一起急性胃肠炎暴发疫情的病原分子特征分析

目的 了解合肥市一起急性胃肠炎疫情的病原分子特征.方法 采用实时荧光PCR(Real-time PCR)对13份肛拭标本同时进行札如病毒、诺如病毒、星状病毒核酸检测,检出的札如病毒核酸阳性标本采用传统RT-PCR扩增VP1基因片段,并测定基因序列,构建系统进化树.结果 Real-time PCR检出8份札如病毒核酸PCR阳性标本,诺如病毒、星状病毒核酸结果均为阴性.1份RT-PCR扩增产物测序成功,基因序列比对和进化分析显示为札如病毒GⅡ.3基因亚型.结论 引起该起急性胃肠炎疫情的病原体为GⅡ.3型札如病毒.     

猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定

目的 构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的 蛋白,进行生物学活性检测.方法 提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果 重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的 片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论 成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.