| HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备 |
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| 引用本文： | 王兴满,吴琼,汤仁树,甘霖,赵俊,王明丽.HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备[J].安徽医科大学学报,2010,45(6):737-739. |
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| 作者姓名： | 王兴满 吴琼 汤仁树 甘霖 赵俊 王明丽 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 安徽省自然科学基金重点项目，安徽省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的 采用原核表达系统获得HCMV pp65目的 蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清.方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清.采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性.结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清.结论 在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清.为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础.
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| 关 键 词： | HCMV pp65蛋白 E.coli BL21(DE3) 多克隆抗血清 |
HCMV pp65 in prokaryotic cells expression,purification and preparation of antiserum |
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| Wang Xingman,Wu Qiong,Tang Renshu,et al.HCMV pp65 in prokaryotic cells expression,purification and preparation of antiserum[J].Acta Universitis Medicinalis Anhui,2010,45(6):737-739. |
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| Authors: | Wang Xingman Wu Qiong Tang Renshu |
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| Institution: | Wang Xingman,Wu Qiong,Tang Renshu,et al ( Dept of Microbiology,Anhui Medical University,Hefei 230032) |
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| Abstract: | Objective Prokaryotic expression system to obtain the purpose of HCMV pp65 protein,preparation of the target protein-specific immune rabbit antiserum.Methods Construction of GST-HCMV pp65 expression plasmid of fusion protein in E.coli-induced expressed,GST affinity chromatography purified,then immuned rabbits with purified pp65 protein to obtain polyclonal rabbit antiserum and use affinity chromatography;we used ELISA,SDSPAGE electrophoresis,Western blot and immunofluorescence staining identified.Results Pr... |
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| Keywords: | E coli BL21(DE3) |
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