抗EV713C蛋白酶活性中草药单体的虚拟筛选

目的通过虚拟筛选寻找抑制肠道病毒71型(EV71)3C蛋白酶活性的中药单体化合物。方法从TCM Database@Taiwan数据库下载抗病毒中药的1998个化合物作为筛选对象,以EV71 3C蛋白酶为药物靶点,利用Auto Dock Vina进行分子对接,模拟中草药单体与EV71 3C蛋白酶的结合,根据结合自由能大小对中药单体进行排序;使用Discovery Studio2018 Visualizer对得分≤-37.673 kJ/mol的中草药单体与EV71 3C蛋白酶进行相互作用分析,观察其结合模式。结果虚拟筛选得到2个与EV71 3C蛋白酶结合较好的中药单体,分别是原花青素B5(procyanidin B5)和1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(1,2,3,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose)。结论从传统中药中筛选出抗EV71 3C蛋白酶的候选中药单体,为体外抗EV71实验研究提供参考。     

福菜乳杆菌重庆亚种与福菜乳杆菌福菜亚种的基因组比较分析

目的 研究福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(简称CQ16Z1)与福菜乳杆菌福菜亚种YM0097(简称Y97)的基因组差异.方法 采用二、三代测序技术对CQ16Z1菌株进行全基因组测序,计算CQ16Z1与Y97菌株的核苷酸一致性和数字DNA-DNA杂交同源性,通过比较基因组学对两株菌的基因组差异进行比较分析.结果 CQ16...     

长链非编码RNA EVADR促进人结直肠癌细胞系增殖及迁移

目的探讨lncRNA EVADR对人结直肠癌HCT116和LOVO细胞系的增殖和迁移的影响以及其作用机制。方法利用慢病毒感染方式分别构建稳定过表达lncRNA EVADR的HCT116和LOVO细胞系;用CCK-8检测细胞的增殖;Transwell小室法检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin的表达,实时荧光定量PCR检测Snail、Slug、ZEB1和ZEB2 mRNA的表达。结果成功构建了稳定过表达lncRNA EVADR的结直肠癌HCT116和LOVO细胞系。与HCT116-NC和LOVO-NC细胞组对比,HCT116-EVADR与LOVO-EVADR细胞组的增殖和迁移能力明显提高(P<0.05)。同时,上皮标志物E-cadherin表达明显降低,而Snail、Slug、ZEB1和ZEB2间质化标志物的表达升高。结论过表达lncRNA EVADR具有促进结直肠癌HCT116和LOVO细胞的增殖与迁移能力,可能通过调节结直肠癌细胞上皮间质转化(EMT)发挥作用。     

嗜酸乳杆菌3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化

目的 分离纯化嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)ATCC 4356的3-磷酸甘油醛脱氢酶.方法 利用硫酸铵分级沉淀法、亲和层析、阴离子交换和分子筛层析对嗜酸乳杆菌GAPDH进行了分离纯化.通过N端测序鉴定了纯化产物;并用分子筛测定了嗜酸乳杆菌GAPDH的相对分子质量(Mr).结果 纯化产物在SDS-PAGE胶上呈现肘,为3.7×t04的单一条带,产量为0.9 ms/L(嗜酸乳杆菌培养物).N端测序结果证明纯化产物为嗜酸乳杆菌GAPDH.分子筛测定的GAPDH的肘,为7.08×104,表明嗜酸乳杆菌GAPDH是二聚体.结论 通过该纯化方案,可大量获得电泳纯的嗜酸乳杆菌GAPDH,为进一步研究其免疫功能以及开发为免疫促进剂打下了基础.     

嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达

目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜酸乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特性做准备。方法从嗜酸乳杆菌ATCC4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b—lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在大肠杆菌中诱导表达,并测定表达产物的β-半乳糖苷酶活性。结果无标签的重组嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶LacZ获得了功能性表达,表达量可达2．28kU／L．而融合His-Tag的重组嗜酸乳杆菌LacZ却失去了β-半乳糖苷酶活性,即使复性也不能恢复。结论克隆表达的成功为该酶的酶学性质研究和可能的应用打下了基础。     

医学微生物学实验教学改革探讨

分析了目前高等院校医学微生物学实验教学中存在的一些问题,提出了改进方案.通过增加跨学科的综合性实验、开设现代的微生物学实验、实验的开设与社会需要挂钩,培养学生的实践能力和创新能力,全面提高学生的综合素质,使学生能够适应社会发展的需要.     

猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

目的 克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础.方法 用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的 基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly.重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(E.coli Rosetta).IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的 蛋白的免疫学活性以及溶血活性.结果　PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框.经IPTG诱导的目的 蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上.Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合.溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256.结论 成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性.     

黑米花青素在大鼠视网膜光化学损伤中的抗氧化作用研究

目的探讨黑米花青素(anthocyanins-rich extract from black rice,BRACs)防护视网膜光化学损伤(retinal photochemical damage,RPD)的机制。方法 60只Sprague-Dawley大鼠饲以AIN-93基础饲料1w后,随机分为对照组(饲以基础饲料,n=10),光照组(饲以基础饲料,同时3 000±200 lux强度的白色荧光持续光照24h,n=25)和BRACs组(饲以基础饲料的同时,灌胃给予100mg BRACs/kg bw 15d,光照24h,n=25)。然后测定光照0,3,6,12,24h视网膜组织中脂质过氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和抗氧化酶系超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)的活性。结果各组大鼠进食量和体重无显著统计学差异(P0.05),光照后大鼠视网膜内MDA含量随光照时间逐渐增加,BRACs干预能降低光照大鼠MDA含量(P0.05);同时光照降低了SOD、GSH-Px、GST活性,BRACs能升高光照大鼠视网膜抗氧化酶SOD和GSH-Px活性(P0.05)。结论 BRACs防护视网膜光化学损伤与其较强的抗氧化特性有关。     

一个植物乳杆菌隐蔽质粒的测序和注释

在植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum CICC 6002）中发现了1个隐蔽质粒（pLP2111）,并将其克隆到pUC18质粒上进行测序。序列分析表明pLP2111大小为2111bp;仅有1个ORF,编码1个37．0kDa的复制蛋白;有1个17bp的重复序列重复了13次。BLAST结果显示pLp2111和植物乳杆菌CCM1904菌株的pLP1质粒相似性最高,为99％,pLP2111比pLP1大18bp．pLP2111可能构建为良好的乳杆菌或乳球菌异源蛋白表达载体。