人禽流感病毒H5N1多价重组痘苗病毒(天坛株)疫苗在小鼠中的免疫原性研究

Objective To develop an effective and broad immune protective H5N1 vaccine.Methods We first developed two recombinant vaccinia ( Tiantan strain) virus ( rTTV ) based H5N1 vaccines, which consisted of bicistron expressing the hemagglutinin(HA) and matrix protein 2(M2), or bicistron expressing the neuraminidase(NA) and matrix protein 1 (M1). The expression of H5N1 protein in rTTVs was confirmed. We immunized the BALB/c mice twice with two kind of dose ( 104 PFU, 107 PFU)using different combination. Subsequently, we assessed the humoral and cellular immune response in vaccinated mice. Results Our data showed that rTTV-based H5N1 vaccine induced rapidly robust HA- and NAspecific antibody level and IFN-γ secreting form cell(SFC) with either single dose of 107 PFU or twice dose of 104 PFU or 107 PFU. We also detected significant neutralizing antibody and matrix-specific immune response. In addition, we found that immunization with two kind of rTTV-based H5N1 vaccines induced much high level of M2-specific antibody than that with single of rTTV-based H5N1 vaccine. Conclusion rTTVbased H5N1 vaccines in this study elicited board array of immunity and our study offers a promising alternative H5N1 vaccine candidates with favorable potential to prevent various H5N1 pandemic.     

抗HIV-1活性化合物作用靶点的快速判断方法

目前,艾滋病的防治工作主要依靠抗HIV-1药物,临床使用的抗HIV药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）,如Zidovudine（AZT）、Lamivudine（3TC）、Emtricitabine（FrC）等,非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）,如Efavirenz（EFV）、Nevirapine（NVP）、Delavirdine（DLV）等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir（RTV）、Saquinavir（SQV）、Indinavir（IDV）等。     

增强丙型肝炎病毒DNA疫苗免疫原性的策略

当前全世界有超过1.7亿慢性丙型肝炎（CHC）感染者,目前尚无有效的疫苗。最近丙型肝炎病毒（HCV）实验性疫苗的研制有不少进展。本文综述了增强HCV DNA疫苗免疫原性的策略及相关进展。     

HCVE2-gAD融合DNA疫苗的构建及其细胞免疫效果评价

目的 将丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）包膜糖蛋白E_2与脂联素球部结构域（gAD）进行基因融合后构建DNA疫苗,并通过免疫小鼠评价其所诱发的HCV E_2特异性细胞免疫应答.方法 根据E_2与gAD的基因序列设计引物,分别扩增出不含跨膜区的E_2基因和添加连接肽的gAD基因,再利用重叠PCR将二者融合,以pVRC为载体构建DNA疫苗质粒,经体外转染293T细胞并用Western Blot证实其表达后,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式于0、3、6周免疫BALB/c小鼠,取脾细胞进行ELISPOT检测分析其所诱发的E_2特异性T细胞免疫应答水平.结果 成功构建了能有效表达E_2-gAD融合蛋白的新型DNA疫苗,经皮内电转方式免疫小鼠后可获得比单独E_2疫苗更强的HCV特异性T细胞免疫应答.结论 gAD基因的融入可在一定程度上增强疫苗的免疫原性,为新型HCV DNA疫苗的进一步发展和优化莫定基础.     

广东省职业健康监管执法存在问题及对策建议

我国职业健康监管职能在卫生、劳动以及安全生产监管部门之间历经多次调整,监管体制呈现从集中统一到多头负责,再到集中统一的历史轨迹[1-3].近年来,全国人大常委会先后4次(2011、2016、2017和2018年)修改《职业病防治法》,对涉及部门监管职责、行政审批制度改革、用人单位责任和劳动者切身利益等重大事项作出调整.     

以流感病毒RNA聚合酶为靶点的抗病毒药物筛选和药效学评价方法的建立

流感病毒RNA聚合酶对流感病毒基因组的复制和表达至关重要。编码聚合酶各亚基的基因序列高度保守的特点使其成为极具发展潜力的抗流感药物靶标。本研究通过构建流感病毒RNA聚合酶活性依赖的荧光素酶报告系统,在细胞水平上建立了以流感病毒RNA聚合酶为靶点的抗流感药物筛选模型。特异性评价和统计学分析表明,该筛选方法灵敏可靠、重复性好,可以用于针对流感病毒RNA聚合酶的抗流感药物筛选。     

乙型肝炎病毒DNA疫苗电转加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果的研究

目的探索新型有效的HBV治疗性疫苗研制的策略。方法构建含S与PreS1融合基因的HBVDNA疫苗,采用两次蛋白疫苗（含不同佐剂）肌内注射初免,一次DNA疫苗皮内电转免疫加强的联合免疫方式,在小鼠中分析比较了各疫苗所引起的体液与细胞免疫应答。结果HBVDNA疫苗皮内注射加电转可明显增强表面抗原（s）特异的细胞免疫应答（IFN-γ ELISpot分析）及PreS1特异性抗体水平,并以蛋白疫苗加铝佐剂初免组细胞免疫增强效果最明显。结论HBSS1 DNA疫苗结合皮内注射＋电转方式可明显加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果,明显高于蛋白疫苗单独应用。这些研究结果为新型HBV治疗性疫苗的研制与应用提供了依据。     

稳定同位素镉-112对大鼠子代发育的影响

目的 探讨雌性SD大鼠给予低浓度富集稳定同位素镉-112(112Cd)后对子代生长发育的影响.方法 40只健康雌性SD大鼠按体重随机分为对照组和染镉组,每组20只.分别皮下注射去离子水(对照组)以及112Cd40μg/(kg·d)(染镉组),每天1次.第24天上午采集血、尿标本,采用原子吸收光谱法检测镉水平.当天下午与健康雄性SD大鼠同笼交配,交配期及孕期雌鼠继续染毒.妊娠第20天再次采集血、尿标本后剖杀雌鼠.取脐血检测血镉水平;取子宫及胎鼠检测母鼠生殖力及胎鼠生长发育指标;取母鼠及胎鼠部分脏器和胎盘采用电感耦合等离子体质谱法检测脏器镉水平;剩余部分脏器和胎盘包埋固定后观察病理学改变;去除内脏的胎鼠经固定染色后检测骨骼改变.结果 染镉组第24天和孕第20天雌鼠血镉含量明显升高,分别为(64.51±17.07)和(80.65±9.72) μg/L,与对照组[(0.94±0.71)和(0.86±0.64) μg/L]较,差异均有统计学意义(P＜0.01).孕第20天雌鼠尿镉[(2.72±2.50) μg/g Cr]明显升高,与对照组[(1.09±0.74)μg/gCr]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).染镉组脐血镉[(1.45±1.08) μg/L]明显高于对照组[(0.12±0.08) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.01).染镉组雌鼠及胎鼠的脑、心脏、肝脏、肾脏等脏器和胎盘镉水平分别为(63.19±63.92)、(1.51±1.82)、(124.84±74.76)、(87.24±17.91)、(0.023±0.012)、(0.037±0.019)、(0.065±0.020)、(0.036±0.019)和(5.072±1.127) μg/g,明显高于对照组[(0.02±0.01)、(0.01±0.01)、(0.02±0.01)、(0.07±0.02)、(0.007±0.006)、(0.014±0.016)、(0.005±0.003)、(0.020±0.013)和(0.001±0.001) μg/g],差异均有统计学意义(P＜0.01).染镉组第24天和孕第20天雌鼠尿视黄醇结合蛋白含量分别为(13.70±8.13)和(15.04±9.58)g/mol Cr,与对照组[(7.29±6.18)和(6.71±4.53)g/molCr]相比明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).染镉组孕第20天雌鼠子宫连胎重量[(59.73±11.87) g]、胎鼠重量[(3.66±0.70)g]以及胎盘重量[(0.51±0.08)g]均降低,活胎率下降,吸收胎率升高,与对照组[(84.27±22.99)、(4.02±0.71)和(0.54±0.09)g]比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).染镉组雌鼠肝脏、肾脏的病理改变率明显高于对照组(P＜0.01).染镉组胎鼠较对照组骨骼发育迟缓,主要表现为胸骨骨化不全、胸骨及掌骨的未骨化等(P＜0.01)..结论 低浓度持续镉暴露可以通过胎盘屏障影响胎鼠生长发育.