多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法的建立及验证

目的 建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法并进行验证。方法 以不同新型冠状病毒变异株mRNA为靶基因,选取各自保守序列设计引物和探针,建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法,并进行了线性范围、重复性、准确度、中间精密度、耐用性和适用性等方法学验证。结果 mRNA浓度在1～150 pg·mL^-1内时线性良好;重复性变异系数(coefficient of variation,CV)<10%;准确度回收率84%～114%,CV<10%;中间精密度和耐用性CV均<5%;并且4种不同二价新型冠状病毒mRNA疫苗组份比例检测结果CV均≤5%。结论 建立的多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法灵敏度高,稳定性好,特异性强,适用于多价新型冠状病毒mRNA疫苗进行组分比例和含量检测。     

儿科肿瘤与病毒感染关系研究

生物学和分子生物学研究证实许多动物和禽类中存在肿瘤病毒基因,癌基因的发现更加促进病毒与肿瘤关系的研究。目前已确证15％癌症归于病毒感染,研究比较活跃的病毒主要有EBV、HBV、HPV、HIV、HHV及HTLV-1等。儿科群体为弱势群体,如有营养缺乏,在早期更容易暴露于病毒感染中。本文就儿科肿瘤与病毒感染间关系的研究进展进行了综述。     

药品检测机构仪器设备计量分类管理模式的建立及应用

目的初步建立药品检测机构仪器设备计量分类管理模式。方法根据国内外法律法规对设备计量的要求,结合药品检测机构仪器设备的特点,首次提出将药品检测机构仪器设备分为必须计量、选择性计量和不需要计量3种类别,针对不同类别设备提出具体的计量管理方法。结果与结论初步建立药品检测机构仪器设备计量管理模式并应用于实践,为药品检测机构仪器设备计量规范化管理提供依据。     

狂犬病预防控制技术指南(2016版)

为指导基层狂犬病预防控制工作,尤其是暴露后的预防处置及降低死亡,中国CDC组织专家,参考WHO和美国CDC相关技术指南,以及国内外最新研究进展,制定了《狂犬病预防控制技术指南(2016版)》(指南)。指南系统回顾了狂犬病的病原学及实验室诊断、临床学、流行病学、疫苗和被动免疫制剂的种类、机制、效果、安全性和不良反应监测与处置,以及暴露预防处置方法等内容的科学证据,在此基础上对狂犬病暴露前和暴露后预防的伤口处置、疫苗接种和被动免疫制剂使用等技术给出推荐建议。指南适用于从事狂犬病防控工作的各级各类疾病预防控制机构、狂犬病暴露预防处置门诊、医疗机构感染科和急诊科等专业人员。本指南也将根据国内外狂犬病研究进展不断更新和完善。     

粘膜疫苗在病毒性传染病中应用的研究进展

人体的粘膜分布十分广泛,许多病原体,尤其是病毒可通过粘膜进入人体.粘膜是人体先天性免疫系统中防止病原微生物入侵的重要生理屏障,除了粘膜本身所形成的物理屏障外,粘膜的免疫系统发挥了极重要作用[1].粘膜免疫的研究始于20世纪初,1963 年 Chodirker 和 Tomas 关于人体粘膜粘液中免疫球蛋白类型的研究是粘膜免疫研究的一大进展[2].此后生化、遗传、细胞及分子生物学领域不断取得进步,极大地丰富了粘膜免疫的研究.目前粘膜免疫用疫苗的研究日益引起人们的重视,粘膜疫苗逐步成为疫苗行业的研究热点.本文就粘膜免疫机理及粘膜疫苗在病毒性传染病中研究进展进行综述.     

化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。     

狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白在杆状病毒表达系统中的共表达及鉴定

目的 利用杆状病毒表达系统共表达狂犬病病毒CTN-1V株核蛋白(nucleoprotein,NP)及糖蛋白(glycoprotein,GP).方法 RT-PCR分别扩增CTN-1V株病毒GP、NP编码区基因,分别依次克隆入转移质粒pFastBacDual的PP10区及PPH区构建杆状病毒重组转移质粒P-NG,转化DH10Bac E.coli感受态细胞获得重组穿梭质粒A-NG,转染Sf9细胞获得重组杆状病毒Bac-NG,高效表达目的蛋白NP、GP,进行Western blot分析.结果 重组杆状病毒穿梭质粒A-NG经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒NP、GP在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中获得正确表达,表达的重组蛋白NP、GP相对分子质量(Mr)约为51×103、59×103;表达的重组蛋白NP、GP均可与抗RV小鼠血清特异性结合.结论 成功共表达狂犬病病毒CTN-1V株NP、GP,表达产物具有良好的抗原性,为狂犬病病毒基因工程疫苗及诊断试剂的研究奠定了基础.     

降落聚合酶链反应技术在低密度脂蛋白受体基因点突变研究中的应用

目的 建立降落(TOUCHDOWN)聚合酶链反应(PCR)方法，快速检测家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因点突变。方法 设计LDL-R基因2l对引物，根据TOUCHDOWN原理设计包括启动子和18个外显子特异性片段在内的PCR程序，通过试验选择PCR最佳反应条件，在同一程序中分别对21个片段进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，纯化后DNA产物测序分析该方法的特异性。结果 编设退火温度范围从68℃降至54℃的PCR程序，优化PCR扩增条件，电泳检测采用同一程序同时分别扩增的LDL-R基因21个片段条带清晰，测序证实了此组片段的特异性。结论 成功建立降落PCR方法，提示此法为LDL-R基因突变筛查提供了快速可靠的手段。     

叙利亚地鼠作为狂犬病暴露后免疫动物模型的研究

目的  对叙利亚地鼠（地鼠）作为狂犬病暴露后疫苗免疫效果动物模型的可行性进行研究。方法 将狂犬病病毒CVS株和CTN-1V株分别肌内感染不同周龄的地鼠和小鼠,观察动物对不同毒株的敏感性。用直接免疫荧光法检测CVS株进入地鼠脑组织的情况;用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体。以不同病毒量CVS株感染8周龄雌性地鼠,确定暴露时病毒的最佳感染剂量。对暴露后地鼠用疫苗进行免疫,观察疫苗的保护效果。结果  地鼠感染后7 d左右出现狂犬病临床症状,同一病毒株对地鼠的致病力比小鼠强〔6.4～8.0 lg半数致死量（LD₅₀）/ml对3.4~6.5 lgLD₅₀/ml〕;3周龄和8周龄地鼠对病毒的敏感性无差异。感染后5~6 d病毒进入地鼠脑组织。以3.8～4.0 lg小鼠脑内半数致死量（MICLD₅₀）/ml的CVS株感染后6～7 d,地鼠血清中检出中和抗体。暴露后疫苗免疫结果显示,不同疫苗具有不同程度的保护效果。结论  地鼠对狂犬病病毒神经外途径感染敏感,临床症状典型,潜伏期恒定,感染后免疫血清抗体应答出现早,具备作为暴露后疫苗免疫动物模型的条件。