多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法的建立及验证

目的 建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法并进行验证。方法 以不同新型冠状病毒变异株mRNA为靶基因,选取各自保守序列设计引物和探针,建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法,并进行了线性范围、重复性、准确度、中间精密度、耐用性和适用性等方法学验证。结果 mRNA浓度在1～150 pg·mL^-1内时线性良好;重复性变异系数(coefficient of variation,CV)<10%;准确度回收率84%～114%,CV<10%;中间精密度和耐用性CV均<5%;并且4种不同二价新型冠状病毒mRNA疫苗组份比例检测结果CV均≤5%。结论 建立的多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法灵敏度高,稳定性好,特异性强,适用于多价新型冠状病毒mRNA疫苗进行组分比例和含量检测。     

带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定

目的：构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎（简称乙脑）病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法：应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因（F-LUC）插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5''非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK21细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果：成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论：本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。     

轻型巨轴索神经病一例

巨轴索神经病(giant axonal neuropathy,GAN)是一种累及周围神经和中枢神经系统的遗传性中间丝蛋白病,该病于1972年首次报道.目前已明确其致病基因为gigaxonin[1].     

环氧化酶2基因多态性与急性冠状动脉综合征的关联研究

目的探讨环氧化酶2(COX-2)基因-1195G>A和-765G>C位点与中国汉族人群急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性。方法选择ACS患者250例(ACS组),同期选取健康体检者266例(对照组)。采用扩增阻碍突变系统结合TaqMan探针的实时荧光定量PCR方法对COX-2基因多态性位点(-1195G>A和-765G>C)进行基因分型。多因素logistic回归分析各多态性位点与ACS的相关性。结果在男性中,ACS组-1195G>A基因型及等位基因频率与对照组比较,差异有统计学意义(GG:23.4%vs 33.8%,GA:50.6%vs 49.4%,AA:25.5%vs 16.9%,P=0.049;G:48.7%vs 58.4%,A:51.3%vs 41.6%,P=0.014);与-1195G>A位点GG基因型比较,AA+GA基因型发生ACS的风险更高(P=0.042),行多因素分析校正相关危险因素后,差异有统计学意义(OR=1.971,95%CI:1.130³.438,P=0.017)。在女性中,ACS组-1195G>A位点基因型及等位基因频率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单体型分析提示,在男性中,ACS组A-1195-765-G频率显著高于对照组,差异有统计学意义(P=0.012),而在女性中,ACS组A-1195-765-G频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在中国汉族人群中,COX-2基因-1195G>A基因多态性以及单体型A-1195-765-G与男性ACS有关,与女性无关。     

中国26个常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病家系的临床和影像学特点及与其他国家患者的对比

目的 分析我国常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)患者的临床和影像学特点,并与其他国家的患者进行对比.方法 收集2003年1月至2009年10月在我院经Notch3基因和超微病理检查证实的26个CADASIL家系中102例患者的发病年龄、首发症状和临床表现特点,与德国、日本、沙特、法国患者的症状用x2检验进行比较;分析35例患者头颅MRI改变特点并与英国以及法国患者进行对比.结果 102例患者发病年龄在22～80岁,平均(43.9±11.0)岁,缺血性脑卒中或TIA出现率(79.41%)与其他国家患者差异无统计学意义;痴呆出现率(50.00%)高于沙特(21.05%,x2=5.513,P=0.020)和法国(31.11%,x2=4.517,P=0.034)患者;精神异常出现率(14.71%)较德国患者低(30.39%,x2=7.185,P=0.007);偏头痛出现率(13.73%)和法国患者类似,明显少于日本(40%,x2=12.658,P=0.000)、德国(38.24%,x2=15.932,P=0.000)和沙特患者(42.11%,x2=6.869,P=0.009).35例患者头MRI均存在异常改变,没有发现延髓损害,腔隙性梗死在基底节的发生率(82.86%)明显较法国患者(60%,x2=5.663,P=0.017)高;大脑白质疏松发生率与法国患者相似;颞极白质受累率(68.57%)明显少于英国患者(95%,x2=5.211,P=0.022).结论 不同国家CADASIL的临床表现和MRI改变存在差异.双颞极白质异常信号对国人CADASIL的诊断不是一个敏感指标.     

米索前列醇经直肠用药联合缩宫素对剖宫产术后出血患者的止血效果分析

目的 研究米索前列醇经直肠用药联合缩宫素对剖宫产术后出血患者的止血效果.方法 选取2013年1月至2016年1月于本院择期接受剖宫产手术的产妇84例作为研究对象,根据治疗方法的差异,将产妇分为观察组与对照组.观察组采用直肠内置入米索前列醇联合缩宫素进行治疗,对照组仅采用缩宫素进行治疗,观察两组止血效果.结果 观察组总有效率为95.2％,显著高于对照组的78.6％,差异有统计学意义(P＜ 0.05);两组手术时间差异无统计学意义(P＞0.05);对照组术中出血量[(958.2±125.6) ml]和产后2h出血量[(81.3±13.1) ml]均显著大于观察组[(558.7±86.5) ml和(42.6±10.8) ml],差异有统计学意义(均P＜ 0.05);观察组并发症总发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用缩宫素联合直肠米索前列腺醇对剖宫产患者具有十分显著的止血效果,且用药方法较为简单,值得推广应用.     

HtrA丝氨酸肽酶1基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病一例

目的 总结1例HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病(CARASIL)患者临床特点.方法 患者为34岁女性,下肢肌肉痉挛疼痛16年,腰痛、头痛、脱发5年,右侧轻偏瘫5个月,尿、便潴留1个月.脊椎MRI示颈椎和腰椎退行性变和椎间盘突出.头 MRI示广泛脑白质损害、多发腔隙性梗死灶.患者进行腓肠神经和皮肤活体组织检查.患者及其父母和2个弟弟均进行了HTRA1基因的直接测序,患者进行Notch3基因直接测序,以100名健康者作为对照.结果 光镜下可见小动脉内弹力板不连续和内膜增厚,毛细血管基底膜增厚,电镜下呈现细颗粒样改变.患者HTRA1基因第2号外显子存在c.524T＞A纯合突变,其父母及2个弟弟存在c.524T＞A杂合突变.未发现Notch3基因突变.100名健康对照无此突变.结论 HTRA1基因c.524T＞A新突变导致的CARASIL可以伴随偏头痛和尿、便潴留.     

核黄素反应性脂质沉积性肌病伴感觉共济失调性神经病3例报告

目的研究核黄素反应性脂质沉积性肌病伴感觉共济失调性神经病的临床、电生理、病理和基因改变特点。方法 3例男性患者来自2个家系,其中2例为兄弟,发病年龄41～43岁,主要症状是四肢肌无力,伴随双足麻木和行走不稳。查体发现四肢近端肌力下降、末梢性感觉丧失和Romberg征阳性。3例患者的血尿代谢筛查均提示存在血多种脂酰肉碱水平升高和尿戊二酸水平增高。3例患者均进行了神经电生理、肌肉活检以及电子转移黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)基因检查,2例进行腓肠神经活检。结果 3例患者的肌电图分别出现肌源性损害、可疑神经源性损害和无异常。3例患者的四肢感觉神经传导速度显著减慢或不能引出,运动神经传导速度仅在1例出现轻度减慢。3例患者的骨骼肌均可见肌纤维内脂肪滴显著增多,2例有个别破碎红纤维,2例出现小角状肌纤维。2例患者的腓肠神经均可见有髓神经纤维中-重度减少,伴随有髓神经纤维轴索变性和再生。3例患者均携带ETFDH基因的复合杂合突变,其中2兄弟为c.65A>G和c.242T>C,另1例为c.770A>G和c.1450 T>C。结论 ETFDH基因突变导致的核黄素反应性脂质沉积性肌病可以伴随感觉共济失调性神经病。     

假病毒中和试验对狂犬病毒中和抗体效价的检测效能分析

目的：组织不同的实验室分析假病毒中和法（Pseudo Virus-based Neutralization Assay,PBNA）对不同样品的狂犬病病毒中和抗体水平的检测能力,并比较其与经典的快速免疫荧光灶抑制试验（Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT）以及小鼠中和试验法（Mouse Neutralization Test,MNT）的相关性。方法：共9家实验室,分别采用PBNA、RFFIT以及MNT法对6份样品进行狂犬病病毒中和抗体检测,每个实验室进行3～5次重复实验。采用配对t检验及Pearson相关系数对3种检测方法的结果进行统计学分析。结果：PBNA与RFFIT、PBNA与MNT、RFFIT与MNT Pearson相关系数分别为0.985、0.988和0.974,抗体几何平均滴度进行t检验,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：3种方法重复检测6份样品的定量结果具有高度的相关性,PBNA法可作为《中华人民共和国药典》方法RFFIT、MNT的一种替代或补充方法,用于人用狂犬病疫苗临床血清、狂犬病人免疫球蛋白及抗狂犬病血...     

长春西汀联合胞二磷胆碱联合应用于脑梗塞的疗效及预后分析

目的：分析长春西汀联合胞二磷胆碱联合应用于脑梗塞的疗效及预后。方法：将2014年3月~2015年10月我院90例脑梗塞患者作为研究对象，随机分为观察组和对照组，各45例。对照组给予常规胞二磷胆碱治疗，观察组给予长春西汀联合胞二磷胆碱治疗，比较两组患者的临床疗效及预后情况。结果：观察组患者经治疗后的总有效率（97.78%）远高于对照组（62.22%）。治疗后，两组患者神经功能缺损评分均有提高，观察组患者上升幅度（49.22±7.57）大于对照组（38.14±10.29）；从神经功能评定等级来看，观察组患者的基本治愈、显著进步、进步比率（35.56%、48.89%、13.33%）均高于对照组（13.33%、15.56%、33.33%），无变化比率（2.22%）明显低于对照组（37.78%）。两组患者的不良反应率均为2.22%（1/45），比较差异无统计学意义。结论：长春西汀联合胞二磷胆碱联合应用于脑梗塞疗效显著，且安全性较高，值得临床上推广应用。