CREPT在肾癌组织中的表达及其与预后的关系

目的 探讨肾癌组织中肿瘤细胞周期相关蛋白（cell-cycle-related and expression-elevated protein in tumor,CREPT）的表达与临床病理特征和生存率的关系。方法 纳入90例于2014至2016年间在北京大学人民医院接受了根治性肾切除术并经组织学证实的肾癌患者,运用免疫组织化学方法检测这些患者的癌组织和癌旁组织中CREPT的表达,并结合临床病理资料分析CREPT表达水平与患者TNM分期和Fuhrman分级的关系。通过Kaplan-Meier生存分析及多因素COX回归分析CREPT表达与预后的关系。结果 46.7%（42/90）的患者癌组织中CREPT表达为高水平,而在癌旁组织中所有患者CREPT表达均为低水平,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。CREPT的表达水平与TNM分期（P=0.001）和Fuhrman分级（P<0.001）有关联,但与性别（P=0.149）、年龄（P=0.605）、肿瘤大小（P=0.673）和组织学类型（P=0.756）无关。截至2018年12月,有85例患者完成随访。Kaplan-Meier分析显示,CREPT高表达患者总生存时间和无瘤生存时间均低于CREPT低表达患者,差异有统计学意义（P<0.05）。多因素COX回归分析显示,患者总生存时间及无瘤生存时间与CREPT的表达水平有关（P<0.05）。结论 CREPT在肾癌组织中呈高表达,表达水平与临床分期、分级以及患者预后密切相关。     

p15INK4b相关基因CCRG的克隆及其在肾癌中的表达

目的和方法:为研究肾癌发生中参与的因子, 用已知受p15调控的基因AK001518作为诱饵筛选GenBank, 然后用RT-PCR和Northern印迹实验方法, 揭示p15与搜索出来的功能未知基因CCRG的关系, 并探讨与肾癌发生的关系。结果:得到1个在氨基酸水平上与已知基因有67％同源性的基因CCRG(GenBank登录号为XM_-012930);p15过量表达降低CCRG的表达;CCRG在肾癌组织和细胞中表达量明显高于正常肾组织和细胞。结论:p15相关新基因CCRG在肾癌中高表达, 可能是参与肾癌发生发展病理过程的重要基因。     

激活转录因子5在肾癌细胞系中的表达及意义

目的　探讨新基因激活转录因子 5 (ATF5 )在不同肾癌细胞系中的表达及意义。　方法　采用RT PCR及Northernblot方法检测ATF5基因在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系2 93及正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达 ,计算机辅助图像分析结果。　结果　RT PCR检测ATF5在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系 2 93中呈强表达 ,其灰度面积吸光度A值分别为35 195 .2± 2 8.2、35 70 9.3± 18.3、370 38.5± 2 4.2、33 318.8± 34.2 ,而在正常肾小管上皮细胞系HK 2中表达较弱 ,灰度面积吸光度A值为 2 42 3.6± 3 .3,肾颗粒细胞癌细胞系GRC I中的表达是HK 2的 15倍 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。Northernblot检测ATF5在不同肾癌细胞系的表达结果与RT PCR方法检测结果一致。　结论　ATF5在肾癌发生和发展中具有一定作用 ,其致病机理可能与协同Wnt信号通路相关。     

The construction of siRNA plasmid targeting mouse HIF-1α and in vitro study of its inhibition effect

Objective

To construct effective RNA-interference plasmids targeting mouse HIF-1α gene and testify their effects and specificities in interfering HIF-1α expression.

Methods

Three RNA-interference plasmids targeting mouse HIF-1α gene, pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III, were constructed and identified using double digestion method in the present study. RT-PCR, immunostaining and western blotting were employed to detect the expression alterations of HIF-1α in 293T cells following transfections of the three plasmids, respectively. The interference effect of pBS/U6/HIF1αi-II in SH-SY5Y cell line was further investigated.

Results

All the three RNA-interference plasmids, especially pBS/U6/HIF1αi-II, showed significant inhibition in HIF-1α expression in 293T cell line. pBS/U6/HIF1αi-II could also inhibit HIF-1α expression in SH-SY5Y cell line, in a dose-dependent way.

Conclusion

Plasmid pBS/U6/HIF1αi-II constructed in our study can effectively and specifically inhibit HIF-1α expression, and its role in neural tube development and dysfunction will be further investigated. Construct of pBS/U6/HIF1αi-II plasmid will provide a useful tool to study the role of HIF-1 pathway in embryogenesis, oncogenesis and ischemia development.     

STAT3在小鼠胚胎神经系统发育中的表达

目的观察STAT3在小鼠胚胎神经管发生和神经上皮分化迁移阶段的时空表达规律,为探讨STAT3在胚胎神经系统发生和发育过程的作用及可能机制提供形态依据.方法采用全胚胎原位杂交技术和免疫组织化学技术,观察STAT3在神经胚形成和神经上皮分化迁移阶段的表达.结果①E8.75d整个鼠胚几乎没有观察到STAT3 mRNA的表达,在E9.5d,STAT3 mRNA在前脑泡急剧增多,到E10.5d,阳性信号出现在中脑泡,E11.5d时在后脑泡的一狭窄区域有STAT3mRNA的表达;②E13.5d,在侧脑室周围即未来大脑新皮层区域、间脑、发育中的视网膜、第四脑室周围的脑组织(未来的脑桥)、脊髓、三叉神经节和背根神经节C1均可观察到较强的STAT3蛋白阳性信号,E14.5d和E15.5d时,大脑皮层、间脑、视网膜、第四脑室周围以及发育中的脑桥和脊髓等部位观察到中等强度的STAT3蛋白表达.结论STAT3可能参与了神经管的关闭和神经上皮的分化和迁移.     

CKIp15INK4B相关新基因p15rs对HeLa细胞增殖影响的初探

目的　探讨新克隆的CKIp15 INK4B 相关基因p15rs对细胞增殖的作用。　方法　克隆p15rs编码区cDNA ,通过基因转染技术将其导入HeLa细胞 ,检测细胞的生长曲线 ,细胞周期和集落形成能力。　结果　构建了p15rs高表达的细胞模型HPS2 1,发现p15rs高表达可使HeLa细胞增殖被显著抑制 ,细胞生长速率下降 ,倍增时间延长 ,G1 期细胞增加 ,S期细胞减少 ,集落形成能力下降。　结论　新基因p15rs具有抑制癌细胞增殖和对细胞周期进程进行负调节的作用。     

伴侣相互作用蛋白在不同修复组织中的表达特征及其与创面愈合结局关系的研究

目的研究伴侣相互作用蛋白(chaperone interacting protein，CHIP)在不同愈合组织中的表达规律，以及这种规律与创面修复结局的关系。方法20块组织标本取自于增生性瘢痕(n=8)、溃疡组织(n=4)以及正常皮肤n=8)。经常规包埋切片后，采用免疫组织化学二步法研究CHIP在以上组织的分布特征与表达量。结果在正常、瘢痕以及溃疡组织，CHIP表达主要见于真皮成纤维细胞、血管内皮细胞以及表皮细胞胞浆与胞核，未见于炎性细胞。表达量以增生性瘢痕组织最多(89％)，溃疡组织次之(83％)，正常组织最少(17％)。结论尽管CHIP的确切生物学功能尚未完全阐明，它表达于增生活跃的组织修复细胞表明它可能作为一种伴侣分子在修复细胞增殖调控中起一定作用。     

激活转录因子5的克隆及其在真核细胞中的表达定位

目的克隆激活转录因子(ATF)5,构建其真核表达载体,观察其在细胞中的表达定位。方法根据人ATF5的cDNA序列设计引物,通过巢式PCR扩增ATF5全长及其N端(ATF5/N)和C端(ATF5/C),构建重组表达质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C及融合绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-ATF5。将表达质粒转染293T和Cos7细胞,Westernblot检测其表达情况,荧光显微镜观察ATF5在293T和Hela细胞的定位。结果巢式PCR产物与预期大小一致,重组质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C能表达携带Myc标签的蛋白Myc-ATF5、Myc-ATF5/N和Myc-ATF5/C,分子量分别为52、35和43×103。荧光显微镜观察发现融合了GFP的ATF5蛋白定位在细胞核。结论成功的克隆和表达ATF5基因为进一步研究其在肾肿瘤发生、发展过程中的作用奠定了基础。     

利用原位杂交技术研究SIPAR在小鼠不同发育阶段的表达

目的检测对STAT3信号通路有调节作用的新基因SIPAR（STAT3 interacting protein as a represor）在小鼠胚胎发育过程中不同阶段的表达.方法采用地高辛标记探针的整体胚胎原位杂交方法.结果 SIPAR在dpc9.5的小鼠胚胎眼泡和听泡中有明显的表达,在dpc9.5～12.5的小鼠胚胎脊柱神经和脑部中枢神经都有表达,在dpc12.5小鼠胚胎脑、眼泡和脊柱中表达增强.结论 SIPAR主要集中表达在小鼠胚胎的神经系统,SIPAR可能与神经系统发育相关.     

T细胞因子4显性负调节基因ΔNTCF4对肾癌细胞GRC-Ⅰ生物学性状的影响

目的观察T细胞因子4(TCF4)显性负调节基因ΔNTCF4对肾癌细胞GRC-1生长、增殖等生物学行为的影响。方法将缺失N末端的TCF4显性负调节基因真核表达质粒pCDNA3-ΔNTCF4和pCDNA3空载体分别转染肾癌细胞GRC-Ⅰ,建立稳定表达ΔNTCF4基因的肾癌细胞系GRC-Ⅰ/ΔNTCF4和空载体细胞系GRC-Ⅰ/Mock,光镜下观察细胞生长状态,绘制生长曲线,MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学和Western blot检测Wnt信号通路下游靶基因C-Myc、Cox-2蛋白表达水平。结果稳定表达ΔNTCF4基因的GRC-Ⅰ/ΔNTCF4细胞形态由圆形变为长条状,细胞生长速度变慢,核分裂相减少,出现向正常肾小管细胞逆转的趋势；GRC-Ⅰ/ΔNTCF4细胞增殖活性受到明显抑制,与GRC-Ⅰ对照细胞相比抑制率达11．2%～35．5%(P＜0．05),而GRC-Ⅰ/Mock与对照细胞相比差异无统计学意义；表达显性负调节基因的肾癌细胞系GRC-Ⅰ/ΔNTCF4中Cox-2蛋白表达水平显著降低。结论转染T细胞因子4显性负调节基因ΔNTCF4能部分抑制肾癌细胞GRC-Ⅰ生长,降低Wnt通路靶基因C-Myc、Cox-2表达,为通过阻断Wnt信号通路对肾癌进行细胞信号治疗提供了实验依据。