叉头状转录因子O1基因过表达慢病毒载体构建及其大鼠系膜细胞株的建立

目的构建含组成性激活突变型Fox O(CA-Fox O1 1)基因的过表达慢病毒载体,并建立其过表达的大鼠肾小球系膜细胞株。方法通过四质粒合成法构建包含CA-Fox O1编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-Fox O1)。实验分为3组:空白对照组(NC组)、空慢病毒载体阴性对照组(LV-empty-Fox O1组)和过表达慢病毒载体组(LV-CA-Fox O1组)。培养系膜细胞(RMCs)72 h后,用流式细胞仪检测RMCs中绿色荧光蛋白(GFP)阳性率,并采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测Fox O1的m RNA及蛋白表达情况。结果成功构建LV-CA-Fox O1,其病毒滴度为1×108TU/ml。LV-empty-Fox O1组和LV-CA-Fox O1组GFP阳性率分别为84.5%和81.4%;与NC组相比,LV-CA-Fox O1组Fox O1的m RNA与蛋白表达量相当于NC组的27.92倍与5.41倍(均P<0.05);而NC组与LV-empty-Fox O1组Fox O1的m RNA及蛋白表达量差异均无统计学意义。结论成功构建了大鼠Fox O1基因的过表达慢病毒载体,并建立了稳定过表达Fox O1的大鼠肾小球系膜细胞株,为进一步研究Fox O1的功能和作用机制奠定了研究基础。     

原发性醛固酮增多症38例临床分析

原发性醛同酮增多症(原醛症)是继发性高血压的原因之一.临床上原醛症往往在患者的症状出现多年后方被确诊,提高早期诊断率成为目前迫切需要解决的问题.作者对本院2002年10月至2007年9月住院确诊为原醛症的38例患者的临床病例资料进行总结分析,为早期诊断提供线索.     

糖尿病患者血浆Visfatin水平变化及意义

目的 观察糖尿病患者血浆Visfatin水平变化并探讨其意义.方法 选取92例糖尿病患者,其中糖调节受损患者30例(IGR组),6.1 mmol/L≤空腹血糖(FPG)＜7.0 mmol/L和(或)7.8 mmol/L≤餐后2h血糖＜ 11.1 mmol/L;2型糖尿病患者62例(T2DM组),FPG≥7.0 mmol/L和(或)餐后2h血糖≥11.1 mmol/L.T2DM组根据体质量指数(BMI)分为2型糖尿病肥胖患者31例(F组,BMI≥25 kg/m2)和2型糖尿病非肥胖患者31例(NF组,BMI＜ 25 kg/m2).对照组为31例体检健康者.采用ELISA法测定血浆Visfatin水平,葡萄糖氧化酶法测定FPG,磁性分离酶联免疫法测定胰岛素(Fins),计算BMI,并计算胰岛素敏感指数(ISI=lnFPG/Fins).结果 与对照组和IGR组相比,T2DM组血浆Visfatin明显升高(P＜0.01);与对照组相比,IGR组血浆Visfatin明显升高(P＜0.01);与NF组相比,F组血浆Visfatin明显升高(P＜0.01).结论 2型糖尿病尤其肥胖者血浆Visfatin水平显著升高,Visfatin可能在2型糖尿病发病中扮演重要角色.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯和IL-18对大鼠肾小球系膜细胞分泌IV型胶原蛋白和TNF-αmRNA的影响

目的:研究吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)和白细胞介素-18(IL-18)对肾小球系膜细胞(MC)分泌Ⅳ型胶原蛋白和表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用.方法:将MC随机分为6组:A组为正常对照组.B组为加入25μg/L IL-18组,C组为加入50μg/L IL-18组,D、E、F组分别在A、B、C组基础上加入PDTC(100 μmoL/L),均在高糖环境下培养48 h.采用ELISA检测Ⅳ型胶原蛋白(CO-IV)和层粘连蛋白(LN),RT-PCR检测MC TNF-a mRNA的表达.结果:高糖环境下,25μg/L、50μg/L的IL-18均能促进MC分泌CO-Ⅳ和LN,表达TNF-amRNA(P<0.05),随IL-18浓度增加,MC分泌CO-Ⅳ的量及表达TNF-αmRNA有升高趋势(P<0.05).PDTC能抑制MC分泌CO-IV和LN及表达TNF-α mRNA.结论:IL-18可能通过NF-κB激活途径影响MC分泌C0-Ⅳ、LN和TNF-a mRNA的表达而参与糖尿病肾病的发生、发展.     

糖尿病大鼠肾小球IL-18、ICAM-1和TNF-α表达的实验研究

目的探讨炎症细胞因子与糖尿病肾病（DN）发生、发展的关系。方法雄性SD大鼠32只分为糖尿病（DM）组20只和正常对照（NC）组12只。4、8周末检测血糖（BG）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24小时尿蛋白（UPro/24h）。处死动物后计算肾重指数（KI）；镜下观察肾脏病理改变；检测肾小球白细胞介素18（IL-18）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达。结果4、8周DM组分别与同期NC组相比：BG、KI、UPro/24h、SCr显著增高；肾小球体积增大、系膜细胞增生、毛细血管基底膜增厚、足突融合；IL-18、ICAM-1、TNF-α表达显著增高。8周DM组与4周DM组相比：KI、BUN、SCr、UPro/24h增高，肾脏病理改变加重，IL-18、ICAM-1、TNF-α在肾小球的表达增高。IL-18、ICAM-1、TNF-α三者表达之间呈正相关，与BUN、SCr、UPro/24h亦呈正相关（P均〈0.05）。结论糖尿病大鼠肾小球IL-18、ICAM-1、TNF-α的表达与DN的发生、发展密切相关。     

老年2型糖尿病患者动态血糖监测分析

目的 探讨老年2型糖尿病患者的动态血糖波动特点.方法 对老年2型糖尿病患者(老年组)92例和中青年2型糖尿病患者(中青年组)58例进行动态血糖监测,对比分析两组患者血糖谱特征及老年不同糖化血红蛋白(HbA1c)水平糖尿病患者的血糖谱特征.结果 (1)老年组与中青年组比较,血糖波动系数(BGFC)增大[(2.68±1.00)mmol/L对(2.12±0.74) mmol/L,t=-3.691,P＜0.001];餐后血糖漂移幅度(PPGE)增大,早餐后分别为 ( 5.96±2.47) mmol/L对(5.11±2.44) mmol/L(t=-2.058,P＜0.05),晚餐后分别为(5.17±2.15) mmol/L对 (4.16±2.28) mmol/L(t=-2.730,P＜0.01);餐后血糖达峰时间延长,早餐后(112.5±29.7) min对(97.0±27.2) min(t=-3.225,P＜0.01),中餐后(140.0±39.7)min对 (118.1±42.6) min(t=-3.195,P＜0.01);低血糖发生频率增加(26.3%对5.5%,P＜0.05);最大血糖漂移幅度(LAGE)增大,分别为(9.66±2.48) mmol/L对(8.40±3.13) mmol/L(t=-2.720,P＜0.01);(2)老年组患者随HbA1c下降,低血糖发生率增加(P＜0.05);随 HbA1c升高,血糖波动幅度增大;(3)HbA1c与空腹血糖(FBG)、日平均血糖(MBG)、高血糖时间比(PT7.8、PT11.1)、最低血糖(LBG)、最高血糖(HBG)、BGFC、PPGE、LAGE均正相关(r=0.899～0.289,均P＜0.001);逐步回归分析显示,MBG、FBG、PT7.8与HbA1c独立相关(校正的R2=0.807,P＜0.05).结论 老年2型糖尿病患者血糖波动幅度大,易发生餐后高血糖和夜间低血糖,动态血糖监测能较详细地显示患者的血糖水平及波动特征.

Abstract：

Objective To investigate the characteristics of the blood glucose fluctuation in elderly patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Methods The 92 elderly patients with T2DM (the elderly group) and 58 young and middle-aged patients with T2DM (the non-elderly group) were monitored using the continuous glucose monitoring system(CGMS). The characteristics of glucose profiles of the two different age groups, and of the different glycosylated hemoglobin (HbA1c) level groups in the elderly were comparatively analyzed. Results (1)There was no significant difference in HbA1c level between the elderly group and the non-elderly group. Compared with the non-elderly group, the elderly group showed the increases in blood glucose fluctuant coefficient [BGFC, (2.68±1.00) mmol/L vs. (2.12±0.74) mmol/L, t=-3.691, P＜0.001], in postprandial glucose excursion (PPGE) of breakfast and supper [(5.96±2.47) mmol/L vs. (5.11±2.44) mmol/L, t=-2.058, P＜0.05; (5.17±2.15) mmol/L vs. (4.16±2.28) mmol/L, t=-2.730, P＜0.01], in the time to postprandial glucose peak of breakfast and lunch [(112.5±29.7) min vs. (97.0±27.2) min, t=-3.225, P＜0.01; (140.0±39.7) min vs. (118.1±42.6) min, t=-3.195, P＜0.01], in the frequency of hypoglycemia (26.3% vs. 5.5%, P＜0.05), and showed the largest amplitude of glycemic excursions [LAGE, (9.66±2.48) mmol/L vs.(8.40±3.13) mmol/L, t=-2.720, P＜0.01]. (2)In the elderly, along with decreased HbA1c, the incidence of hypoglycaemia increased (P＜0.05); And along with increased HbA1c, the amplitude of blood glucose fluctuation increased. There were significant differences in BGFC, PPGE of breakfast and lunch, and LAGE among different HbA1c level groups (P＜0.01, P＜0.05, P＜0.05, P＜0.001). (3)HbA1c was positively correlated with FBG, mean blood glucose (MBG), percentage of time at glycemia (PT7.8, PT11.1), the lowest blood glucose (LBG), the highest blood glucose (HBG), BGFC, PPGE and LAGE (r=0.899-0.289, all P＜0.001). Multiple stepwise regression analysis indicated that MBG, FBG and PT7.8 was the independent influential factor of HbA1c (adjusted R2=0.807, P＜0.05). Conclusions The elderly patients with T2DM are at a particularly high risk for postprandial hyperglycemia and nocturnal hypoglycemic episodes, CGMS could show glucose fluctuation characters of T2DM patients diurnally, and provide a clinical basis for reasonable therapy.     

老年2型糖尿病周围神经病变患者的血清铁蛋白、同型半胱氨酸和维生素B12水平

目的研究老年2型糖尿病周围神经病变患者血清铁蛋白、同型半胱氨酸(Hcy)、维生素B_(12)(VitB_(12))的水平。方法选取2019年3—9月郑州大学第一附属医院老年内分泌科收治的99例2型糖尿病(T2DM)患者。将51例单纯T2DM患者纳入DM组,将合并周围神经病变的48例T2DM患者纳入DPN组。选取同时期于郑州大学第一附属医院进行体检的健康者45例,纳入NC组。比较3组糖化血红蛋白(HbA1c)、血清铁蛋白、Hcy及VitB_(12)的水平。统计DM组和DPN组患者的糖尿病病程。分析血清铁蛋白、Hcy及VitB_(12)与其他指标的关系。结果 DM组和DPN组年龄、HbA1c、铁蛋白及Hcy水平均高于NC组,DM组和DPN组VitB_(12)水平低于NC组,差异有统计学意义(均P<0.05)。DPN组HbA1c、铁蛋白及Hcy水平高于DM组,VitB_(12)水平低于DM组,差异有统计学意义(均P<0.05)。铁蛋白与HbA1c、Hcy呈正相关(均P<0.05)。Hcy与年龄、HbA1c、铁蛋白呈正相关(均P<0.05),与VitB_(12)呈负相关(P<0.05)。VitB_(12)与年龄、HbA1c、Hcy呈负相关(均P<0.05)。铁蛋白、Hcy及VitB_(12)均与病程无关(均P>0.05)。结论老年T2DM并周围神经病变患者血清铁蛋白、Hcy呈现高水平状态,VitB_(12)呈低水平状态,且铁蛋白与Hcy呈正相关,Hcy与VitB_(12)呈负相关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯联合霉酚酸酯保护糖尿病大鼠肾脏机制的实验研究

目的 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)联合霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾脏协同保护作用及机制.方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠34只,并随机分为糖尿病未治疗组(D组),PDTC治疗组(P组), MMF治疗组(M组)和PDTC联合MMF治疗组(P+M组),以正常同龄大鼠作为对照组(C组).8周后测定血糖、血尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白.处死动物后,称肾重并计算肾重指数(KI);光镜、电镜观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾小球白细胞介素18(IL-18)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子的表达.结果 D组及各治疗组血糖、血尿素氮、肌酐、24 h尿蛋白、KI均高于C组(P＜0.05);各治疗组与D组相比,除血糖外,上述各指标均有明显改善(P＜0.05);P+M组24 h尿蛋白低于P和M组(P＜0.05).D组大鼠肾小球体积增大、系膜细胞增生、毛细血管基底膜增厚、足突融合, 各治疗组上述病理改变有不同程度减轻.D组IL-18、 ICAM-1、 TNF-α在肾小球的表达较C组增高(P＜0.05),各治疗组较D组表达下降(P＜0.05),其中P+M组IL-18、ICAM-1、TNF-α表达较M组下降显著(P＜0.05),IL-18、TNF-岜泶锝螹组下降(P＜0.05).结论 PDTC和MMF对糖尿病大鼠肾脏均有保护作用,二者联用较单药效果更好,其机制可能与抑制肾内炎性细胞因子表达有关.     

H型高血压与老年糖尿病性脑梗死的关系研究

目的 探讨H型高血压与老年糖尿病性脑梗死的关系及意义.方法 选取老年患者282例,比较T2DM组、糖尿病性脑梗死(DCI)组、单纯脑梗死(CI)组与NC组血清同型半胱氨酸(Hcy)及H型高血压发生率的差异.结果 血清Hcy在DCI组高于CI组、T2DM组及NC组(P＜0.05).DCI组H型高血压发生率高于CI组及T2DM组(78.43％ vs 68.97％ vs 42.83％),比较差异有统计学意义(x2=9.73、13.94,P＜0.01).Logistic回归分析显示,H型高血压可能为DCI的危险因素(OR=3.86,P＜0.05).结论 H型高血压在DCI的发生发展中起重要作用.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对白介素18诱导肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对白介素18（IL-18）诱导肾小球系膜细胞（MC）增殖及细胞外基质（ECM）分泌的影响及机制。方法MTT法检测MC的增殖情况,ELISA检测Ⅳ型胶原蛋白（CO-Ⅳ）和层黏连蛋白（LN）,免疫细胞化学检测核转录因子-κB（NF-κB）P65的核易位。结果高糖环境下,25μg／L、50μg／L的IL-18作用48h能明显促进MC增殖、CO-Ⅳ和LN的分泌（P〈0．01）,使NF-κBP65激活,50κg／L组更为显著（P〈0．01）。100κmol／L的PDTC能显著抑制IL-18诱导MC增殖作用（P〈0．01）,CO-Ⅳ和LN的分泌以及P65核易位。结论PDTC可能通过NF-κBP65途径抑制IL-18诱导的MC增殖和细胞外基质分泌。