脑室镜辅助下三脑室底造瘘术治疗儿童梗阻性脑积水的围手术期护理

目的 总结9例脑室镜辅助下三脑室底造瘘术治疗儿童梗阻性脑积水围手术期的护理经验.方法 重视患儿及家属的心理护理和健康教育,关注症状护理,术后强调并发症的观察和护理,做好出院指导.结果 9例患儿手术均成功,1例出院10d后出现手术切口裂开脑脊液漏,后再次入院行右侧脑室—腹腔分流术.8例病情稳定,恢复良好,随访效果满意...     

Ad-GFP修饰的间充质干细胞在肺气肿大鼠体内向肺部的定向迁移

背景:近些年来应用相关干细胞及生长因子促进肺再生修复肺气肿病变的研究逐渐成为热点,那么通过干细胞携带相关外源生长因子基因能否更好的修复肺气肿病变值得关注.目的:观察携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(adenovirus vecto rmediated green fluorescence protein,Ad-GFP)转染骨髓间充质干细胞的效率、对细胞增殖的影响,及携带目的基因的间充质于细胞尾静脉移植在肺气肿大鼠肺部的定居情况.方法:采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离、培养间充质干细胞,流式细胞仪鉴定;在不同感染复数时,激光共聚焦显微镜检测转染效果及转染效率,MTT法检测转染48 h的细胞活性:Wistar大鼠16只,随机分为模型组和对照组,每组8只,采用单纯被动烟熏法制备肺气肿大鼠模型.通过尾静脉移植Ad-GFP修饰的间充质干细胞,于24 h后取大鼠肺组织做快速冰冻切片,在荧光显微镜下观察间充质干细胞在肺部的分布情况.结果与结论:实验成功获得大鼠间充质干细胞,Ad-GFP成功转染间充质干细胞,且在MOI=200时,转染效率达到88.42%.在不同MOI下,Ad-GFP转染间充质干细胞对细胞增殖无影响(P＞0.05).移植24 h后,模型组大鼠及对照组大鼠肺部可见到发绿色荧光的间充质干细胞,且模型组荧光强度明显强于对照组(P＜0.05).提示导入目的基因可能不会影响骨髓间充质干细胞增殖和归巢特性.     

全骨髓贴壁改良法分离培养人骨髓间充质干细胞及标记鉴定

目的对比、探求分离培养人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells,hMSCs）的方法,探讨hMSCs鉴定和标记的方法,为进一步的实验研究打下基础。方法采集成人健康志愿者骨髓5mL,全骨髓贴壁法、全骨髓贴壁改良法、密度梯度离心法分离纯化、培养和扩增,获得hMSCs,对比三种方法。＂慢冻速融＂的原则进行细胞冻存、复苏。流式细胞术检测hMSCs的表面标志。hMSCs经5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）标记,免疫细胞化学法测定并评估。结果 hMSCs运用三种方法均可获得,比较全骨髓贴壁改良培养法最为方便高效分离获取hMSC、体外扩增迅速。流式细胞仪检测结果显示：CD44阳性及CD71弱阳性,表达率分别为95.05%,78.86%;CD34、CD45阴性,表达率分别为3.40%,2.88%。Brdu最佳标记浓度和时间分别为10μmol/L和72 h。结论 hMSCs采取全骨髓贴壁改良法进行较好的纯化和扩增,Brdu标记可用于hMSCs的生长和分化的动态示踪观察。有望建立hMSCs库,为组织工程、细胞移植研究打好基础。     

重组腺病毒Ad-HGF对烟熏大鼠肺气肿肺组织细胞凋亡的抑制作用

目的通过构建大鼠肺气肿模型,观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad-HGF）对肺组织细胞凋亡的抑制作用。方法40只Wistar大鼠随机分为4组：正常对照组（A组）、肺气肿组（B组）、肺气肿＋Ad～HGF组（C组）和肺气肿＋Ad—GFP组（1）组）;采用烟熏法建立大鼠肺气肿模型。造模成功后,A组正常饲养,B组给予0．5ml生理盐水灌注治疗,C组给予1×10^9 pfu Ad-HGF,D组给予1×10^9 pfuAd-GFP：干预14天后处死各组动物,取D组大鼠部分肺组织作常规冰冻切片,荧光显微镜下观察目的基因的表达;取A、B、C5-组大鼠肺组织制作病理切片,观察并计算平均肺泡面积（MAA）、平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN）;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术对大鼠肺实质凋亡细胞的阳性细胞率（AI）进行检测。结果与A组相比,B组、C组大鼠的肺组织都存在不同程度的肺气肿病理改变;Ad—HGF治疗纽MAA和MLI均小于模型组、MAN大于模型组,差异有统计学意义（P〈O．05）;Ad—HGF治疗组肺组织细胞凋亡指数（AI）低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论重组腺病毒Ad—HGF对烟熏大鼠肺气肿肺组织细胞凋亡有抑制作用。     

Ad-GFP修饰的间充质干细胞在肺气肿大鼠体内向肺部的定向迁移★

背景：近些年来应用相关干细胞及生长因子促进肺再生修复肺气肿病变的研究逐渐成为热点，那么通过干细胞携带相关外源生长因子基因能否更好的修复肺气肿病变值得关注。 目的：观察携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(adenovirus vecto rmediated green fluorescence protein，Ad-GFP)转染骨髓间充质干细胞的效率、对细胞增殖的影响，及携带目的基因的间充质干细胞尾静脉移植在肺气肿大鼠肺部的定居情况。 方法：采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离、培养间充质干细胞，流式细胞仪鉴定；在不同感染复数时，激光共聚焦显微镜检测转染效果及转染效率，MTT法检测转染48 h的细胞活性；Wistar大鼠16只，随机分为模型组和对照组，每组8只，采用单纯被动烟熏法制备肺气肿大鼠模型。通过尾静脉移植Ad-GFP修饰的间充质干细胞，于24 h后取大鼠肺组织做快速冰冻切片，在荧光显微镜下观察间充质干细胞在肺部的分布情况。 结果与结论：实验成功获得大鼠间充质干细胞，Ad-GFP成功转染间充质干细胞，且在MOI=200时，转染效率达到88.42%。在不同MOI下，Ad-GFP转染间充质干细胞对细胞增殖无影响(P > 0.05)。移植24 h后，模型组大鼠及对照组大鼠肺部可见到发绿色荧光的间充质干细胞，且模型组荧光强度明显强于对照组(P < 0.05)。提示导入目的基因可能不会影响骨髓间充质干细胞增殖和归巢特性。     

携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒修复烟熏致大鼠肺气肿的作用

目的 通过构建大鼠肺气肿模型,观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad-HGF)对肺气肿病变的修复作用.方法 40只Wistar大鼠随机分为4组:肺气肿组(A组)、肺气肿+Ad-HGF 组(B组)、肺气肿+Ad-GFP组(c组)和正常对照组(D组);采用烟熏法建立大鼠肺气肿模型.A组给予0.5 ml生理盐水灌注治疗,B组给予1×10 9 pfu Ad-HGF,C组给予1×10 9 pfu Ad-GFP,D组正常饲养;干预后14 d取腹主动脉血,作动脉血气分析.取C组大鼠部分肺组织作常规冰冻切片,荧光显微镜下观察目的 基因的表达;取A,B,D组大鼠肺组织制作病理切片,观察并计算平均肺泡面积(MAA);采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术和增殖细胞核抗原免疫组织化学法对大鼠肺实质凋亡细胞、增殖细胞的阳性细胞率(AI、PI)进行检测.结果 与D组相比,A组、B组、C组大鼠的肺组织都存在不同程度的肺气肿病理改变,肺组织切片中Ad-HGF治疗组病理改变明显轻于模型组;各组大鼠动脉血气分析比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ad-HGF治疗组MAA[-(4 227.63±156.01),μm2] 显著小于模型组[(6 346.35±148.60)μm2,P＜0.05] ,Ad-HGF治疗组AI[(18.95±2.27)%] 显著低于模型组[(23.41±3.55)%,P＜0.05] ,以上两组AI均高于正常对照组[(5.40±1.22)%,P＜0.05] ;Ad-HGF治疗组PI[(17.51±1.89)%] 显著高于模型组[(15.51±2.75)%,P＜0.05] ,以上两组PI均高于正常对照组[(5.44±1.80)%,P＜0.05] .结论 Ad-HGF对烟熏大鼠肺气肿有修复作用.