过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的：探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶（inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B）对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法：将携带INPP4B的重组质粒载体pEAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系（Flag-INPP4B组）,同时设立未处理组为对照（Mock组）。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2（Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2）以及磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinase,PI3K）下游信号分子蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/AKT）和血清糖皮质激素调节激酶-3（serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3）蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞内PI（3,4）P2和PI（3）P的水平。结果：INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升（mRNA：t=9.724,P=0.000;蛋白：t=19.520,P=0.000）,提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强（F=31.870,P=0.000）。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率（t=6.999,P=0.002）;使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降（t=24.710,P=0.000）、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加（t=6.398,P=0.003）。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平（t=10.470,P=0.000）,而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响（t=0.285,P=0.790）。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI（3,4）P2的水平（t=4.515,P=0.011）,同时明显升高PI（3）P的水平（t=5.681,P=0.005）。结论：本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。     

IGFBP7促进人脐带间充质干细胞的软骨分化

目的：探究胰岛素样生长因子结合蛋白7（insulin?like growth factor?binding protein 7,IGFBP7）对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord?derived mesenchymal stem cells,hUC?MSCs）软骨分化的影响。方法：用软骨诱导培养基高密度成球培养hUC?MSCs,诱导成软骨分化,通过real?time PCR和Western blot检测软骨分化标志基因Sox9的表达,甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖的表达,以反映细胞外基质沉积情况;real?time PCR和Western blot检测IGFBP7在hUC?MSCs软骨分化过程中的表达情况;在hUC?MSCs中分别瞬时转染IGFBP7的表达质粒和siRNA以改变内源性IGFBP7表达水平,然后成软骨诱导,采用甲苯胺蓝染色,real?time PCR和Western blot检测IGFBP7表达变化对于hUC?MSCs成软骨分化的影响。结果：在hUC?MSCs成软骨分化过程中,IGFBP7 mRNA水平和蛋白水平表达均显著升高。与对照组相比,过表达IGFBP7的hUC?MSCs经成软骨诱导后,Sox9表达量显著升高,甲苯胺蓝染色更深,软骨分化能力更强。反之,敲低IGFBP7表达后,hUC?MSCs的软骨分化能力降低。结论：IGFBP7促进人脐带间充质干细胞成软骨分化。     

外泌体在糖尿病及其并发症中的作用研究进展

外泌体作为细胞间信息交流的重要载体，其相关研究一直是近年来的热点。由于来自特定细胞类型的外泌体中含有多种特异性的蛋白质和核酸等生物活性分子，使其具备了成为疾病诊断及预后判断的新型生物标志物的潜力。此外，某些细胞类型，特别是干细胞来源的外泌体，更开启了“非细胞治疗”的新模式。糖尿病是临床常见代谢性疾病，研究发现在其发生进展过程中，机体内外泌体含量或内容物会发生异常改变，本篇综述重点介绍外泌体在糖尿病及其并发症中的作用研究进展。