医学院校生物技术专业遗传学教学改革初探

为探索适合医学院校生物技术专业遗传学课程教学新模式,在分析南京医科大学生物技术专业四届毕业生就业去向的基础上,对教学内容、方法和教学效果评价等方面进行了教学改革的探索和实践。     

鉴定定量PCR不同引物对的扩增效率

目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性。方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-TEasy载体中,构建TA3重组载体,再以TA3载体为模板,采用荧光定量PCR方法比较引物对之间扩增效率。结果:定量PCR结果显示引物对之间扩增效率无明显差异。结论:所检测的PCR引物对之间的扩增效率一致,可用于比较分析mbr /mbr-Nalm-6杂合子细胞系中两个等位基因表达活性。     

口腔鳞状细胞癌组织中差异微小RNA/mRNA表达谱的对接研究

目的 构建分析口腔鳞状细胞癌（OSCC）中差异表达的微小RNA（miRNA）和mRNA表达谱,初步预测与OSCC发生和发展相关的 miRNA和mRNA。方法 运用高通量深度测序技术构建 miRNA和mRNA表达谱,通过 Gene Ontology功能显著性富集分析预测与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的miRNA和mRNA。结果 共发现77个miRNA和1 298个mRNA显著性差异表达,富集分析显示与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的 miRNA共73个,且一个 miRNA可调控多个 mRNA。结论 OSCC中差异表达的 miRNA和mRNA对OSCC的发生和发展有潜在的作用。     

前列腺癌细胞外泌体抑制成骨细胞分化

目的：探讨前列腺癌细胞外泌体对成骨细胞分化的影响。方法：采用ExoQuick?TC试剂盒与超滤法结合分离纯化前列腺癌细胞系PC3的外泌体,通过电镜、外泌体蛋白标志物CD63进行鉴定。用纯化的前列腺癌细胞外泌体处理前成骨细胞,提取总RNA,采用荧光实时定量PCR检测早期成骨分化标志物Runx2、Osx和中期成骨分化标志物 Alp的表达情况。此外利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、茜素红染色方法检测成骨分化情况。结果：前列腺癌细胞外泌体可以进入到前成骨细胞中,并且外泌体处理前成骨细胞后,与对照组相比,Alp、Runx2与Osx的表达量显著降低（P < 0.05）,染色结果显示成骨分化受抑制。结论：在前列腺癌中,前列腺癌细胞会分泌出外泌体作用于前成骨细胞,并抑制成骨细胞的分化。     

冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖、周期及凋亡的影响.方法 以不同浓度的Ori处理MCF-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞周期和凋亡.结果 20～50μM的Ori可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P＜0.01),50 μM Ori作用24、36 h后细胞生长抑制率分别为67.37%和97.63%.50 μm Ori处理24 h后,MCF-7细胞的凋亡率为80.03%.结论 冬凌草甲素可显著抑制MCF-7细胞的生长,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡,是一种潜在的抗乳腺癌药物.     

Osterix通过上调LOX的表达促进人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨Osterix（Osx）对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法：采用荧光实时定量PCR（Real-time PCR）及Western blot技术检测Osx过表达及敲低稳转细胞（231-OE6、231-OEC、231-KD2、231-KDC）中赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase, LOX）的表达水平;转染LOX siRNA及其对照至Osx过表达稳转细胞（231-OE6）中,Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力;同时转染LOX过表达质粒及其对照至Osx敲低稳转细胞（231-KD2）中,Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力。结果：与各自对照相比,LOX在231-OE6中表达显著升高,在231-KD2中表达显著降低（P＜0.05）;降低LOX的表达能够显著削弱231-OE6细胞的迁移和侵袭能力,增加LOX的表达能够显著提高231-KD2细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：在乳腺癌细胞中Osx能够上调LOX的表达,且Osx通过上调LOX的表达而促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

将科研融入医学遗传学教学,提高教学效果

医学遗传学是医学教育中重要的基础课。以医学遗传学中的＂脆性X染色体综合征＂的教学为例,探讨了如何将教师的科研成果融入7年制学生的课堂教学,以激发学生的学习兴趣、提高学习积极性,并培养学生的科研素养及创新能力。     

IGFBP7促进人脐带间充质干细胞的软骨分化

目的：探究胰岛素样生长因子结合蛋白7（insulin?like growth factor?binding protein 7,IGFBP7）对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord?derived mesenchymal stem cells,hUC?MSCs）软骨分化的影响。方法：用软骨诱导培养基高密度成球培养hUC?MSCs,诱导成软骨分化,通过real?time PCR和Western blot检测软骨分化标志基因Sox9的表达,甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖的表达,以反映细胞外基质沉积情况;real?time PCR和Western blot检测IGFBP7在hUC?MSCs软骨分化过程中的表达情况;在hUC?MSCs中分别瞬时转染IGFBP7的表达质粒和siRNA以改变内源性IGFBP7表达水平,然后成软骨诱导,采用甲苯胺蓝染色,real?time PCR和Western blot检测IGFBP7表达变化对于hUC?MSCs成软骨分化的影响。结果：在hUC?MSCs成软骨分化过程中,IGFBP7 mRNA水平和蛋白水平表达均显著升高。与对照组相比,过表达IGFBP7的hUC?MSCs经成软骨诱导后,Sox9表达量显著升高,甲苯胺蓝染色更深,软骨分化能力更强。反之,敲低IGFBP7表达后,hUC?MSCs的软骨分化能力降低。结论：IGFBP7促进人脐带间充质干细胞成软骨分化。     

冬凌草甲素对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及机制

目的检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB231侵袭的影响并探讨其作用的分子机制。方法用Transwell实验检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB231侵袭的影响;明胶酶谱实验检测冬凌草甲素对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP．9）酶活性的影响;荧光素酶报告基因实验检测冬凌草甲素对MMP．2和MMP-9启动子活性的影响。结果冬凌草甲素明显抑制MDA-MB231细胞的侵袭,且明显下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性（P〈0．05或〈0．01）。结论冬凌草甲素能显著抑制乳腺癌细胞的侵袭,且这种抑制作用可能通过下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性而实现。