高强度聚焦超声不完全消融对体外培养肝癌细胞的影响

目的通过高强度聚焦超声不完全消融筛选残留肝癌细胞,探讨其生物学行为改变及对血管形成的影响。方法在声功率5 W下,获得高强度聚焦超声辐照肝癌细胞的温度-时间关系,在某一温度下筛选出高强度聚焦超声不完全消融最佳肝癌细胞亚系并继续培养获得稳定子代。细胞活性实验检测细胞增殖率及热耐受性;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测迁移和侵袭能力;观察内皮细胞管腔形成的变化。结果随着高强度聚焦超声照射时间增加,温度增加,细胞死亡率增加,在48℃及以上温度肝癌SMMC7721细胞基本全部死亡,而47℃筛选出的SMMC7721肝癌细胞亚系增殖率、热耐受性较正常肝癌细胞增强(P<0.05),运动能力、侵袭能力无明显变化(P>0.05);并能促进内皮细胞增殖、迁移和管腔形成(P<0.05)。结论高强度聚焦超声能够杀灭肿瘤细胞,然而高强度聚焦超声不完全消融会促使肝癌细胞生物学行为转变并能促进血管形成。     

经脐单孔腹腔镜保胆取石术的应用体会(附8例报告)

目的:探讨经脐单孔腹腔镜保胆取石术治疗胆囊结石的可行性、手术方法及应用价值.方法:回顾分析为8例胆囊结石患者行经脐单孔腹腔镜保胆取石术的临床资料.结果:8例手术均顺利完成,患者均恢复良好,手术时间45～90 min,平均62 min;术中出血量10～20 ml,平均15 ml,术后住院2～3 d.术后均未使用止痛药,无...     

LCBDE术后一期缝合治疗肝硬化合并胆管结石的疗效及其影响因素

目的 探讨腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)术后一期缝合治疗肝硬化合并胆管结石的疗效及其影响因素。方法 回顾性分析2020年3月至2022年3月遂宁市中心医院肝胆外科收治并手术的肝硬化合并胆管结石的患者124例，按随机数字表法将所有患者分为对照组62例和研究组62例。两组均行LCBDE术，对照组术后进行T管引流，研究组术后一期缝合，观察两组患者围术期指标、术后并发症发生情况、术后24 h采用疼痛视觉模拟量表(VAS)评分，logistic回归分析术后效果不良的影响因素。结果 两组术中出血量比较差异无统计学意义(P>0.05),研究组引流时间为(4.95±0.22)d,长于对照组的(4.42±0.26)d(P<0.05),手术时间和住院时间为(90.16±8.12)min和(5.19±1.16)d,短于对照组的(99.22±9.14)min和(7.62±1.26)d(P<0.05)。研究组患者术后并发症发生率为11.29%(7/62),对照组患者术后并发症发生率为9.68%(6/62),差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术后VAS评分为(3.08±0.22)分...     

阻断Kupffer细胞TIM-4诱导iTreg细胞的产生影响小鼠肝移植免疫耐受

目的 探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)T细胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)诱导小鼠原位肝移植术后iTreg细胞的产生及其相关机制.方法 建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,分为sham组、control mAb组、TIM-4 mAb组.流式细胞仪检测KCs活化,Western blot检测肝脏TIM-4表达,TUNEL检测肝细胞凋亡指数(apoptotic index,AI).提取KCs,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,将KCs和提取的初始CD4+T细胞进行共培养,激光共聚焦检测Kupffer细胞TIM-4表达,分为control组、control mAb组以及TIM-4 mAb组;CFSE检测CD4+T细胞增殖,流式细胞仪检测CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞,ELISA检测IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot检测STAT6表达.建立小鼠移植模型,分为3组:iTreg组移植模型注入iTreg细胞(预先用TIM-4 mAb处理的TIM-4+ KCs与初始CD4+T细胞共培养所诱导),sham组和单纯肝移植组(LT)注入相应的PBS作为对照,检测各组AST、ALT、TBIL水平,HE染色评价肝组织排斥活动指数(rejective activity index,RAI),观察小鼠生存率.结果 肝移植术后24、48、72 h KCs的活化分别为15.9％、21.6％、28.3％,术后1、3、7 dTIM-4蛋白表达水平明显高于sham组(P＜0.05);control mAb组AI值(29.23 ±2.56)明显高于sham组和TIM-4 mAb组[(0.40±0.49),(11.04 ±2.28),P＜0.05].KCs与CD4+T细胞共培养后,control、control mAb以及TIM-4 mAb组CD4+T细胞的增殖率分另别为32.5％、31.6％、17.2％,CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞分化分别为12.4％、13.9％、28.1％,共培养上清液TIM-4 mAb组IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明显低于control mAb (P＜0.05),且加入TIM-4 mAb明显降低了与TIM-4+ KCs共培养的CD4+T细胞p-STAT6蛋白表达(P＜0.05),外源性加入IL-4可明显增高CD4+T细胞p-STAT6蛋白的表达(P＜0.05).移植模型注入iTreg细胞,iTregz组肝功指标明显好转,与LT组比较差异有统计学意义(P＜0.05).肝组织病理学检查,iTreg组RAI平均得分为(3.97±0.67),明显低于LT组[(8.47±0.90),P＜0.05],且iTreg组小鼠平均存活时间延长.结论 阻断KCs TIM-4能够抑制初始CD4+T细胞IL-4/STAT6信号通路的激活,从而诱导更多iTreg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受.     

经脐单孔腹腔镜保胆取石初步分析

目的探讨经脐单孔腹腔镜保胆取石术（TU-LSGS）的安全性和可行性。方法2010年11月至2011年2月对18例胆囊结石患者施行TU-LSGS，沿脐上缘弧形切开皮肤2．0～2．5cm，于切口左、右两侧共置入3个Trocar，呈三角形排列。游离胆囊颈，电切切开胆囊底部，纤维胆道镜取石，将结石装入取物袋，可吸收缝线间断全层缝合或连续扣锁缝合胆囊壁，退出器械同时将取物袋经脐取出。结果18例手术均获成功。术后无出血、胆漏等并发症发生，手术时间45～92min，平均（63．5±18．5）min。术后均未使用止痛药物，平均住院4d。术后1个月随访胆囊功能正常，脐部无明显手术瘢痕。结论TU-LSGS具有保留胆囊功能、术后患者疼痛轻、无明显手术瘢痕等优点，是安全可行的。     

腹腔镜联合术中胆道镜治疗胆囊结石合并肝外胆管结石患者疗效研究

目的 探讨采用腹腔镜联合术中胆道镜治疗胆囊结石合并肝外胆管结石患者的疗效及血清血管紧张素I(AngI)、AngⅡ和Ang1-7水平的变化。方法 在105例胆囊结石合并肝外胆管结石患者中,53例接受腹腔镜联合术中胆道镜手术治疗,52例(对照组)接受开腹手术治疗。使用流式细胞仪检测全血CD4⁺和CD8⁺细胞百分比,采用免疫比浊法检测血清免疫球蛋白E(IgE)、IgG和IgA水平,采用ELISA法检测血清AngI、AngⅡ和Ang1-7水平。结果 观察组手术时间为(98.7±2.8)min,显著短于对照组【(123.6±5.3)min,P<0.05】,切口长度为(3.0±1.0)cm,显著短于对照组【(9.1±1.6)cm,P<0.05】,术中出血量为(21.8±2.5)mL,显著少于对照组【(43.7±2.9)mL,P<0.05】,术后排气时间为(25.1±2.1)h,显著短于对照组【(47.3±3.3)h,P<0.05】;术后3 d,观察组血清AngI水平为(10.3±1.8)ng/mL,显著低于对照组【(14.9±1.9)ng/mL,P<0.05】,血清AngⅡ水平为(51.4±5.0)ng/L,显著低于对照组【(66.2±7.2)ng/L,P<0.05】,血清Ang1-7水平为(413.5±43.7)ng/L,显著低于对照组【(522.7±63.4)ng/L,P<0.05】;全血CD4⁺细胞百分比为(32.4±1.1)%,显著高于对照组【(28.5±1.2)%,P<0.05】,而CD8⁺细胞百分比为(22.0±1.2)%,显著低于对照组【(25.9±1.0)%,P<0.05】,CD4⁺/CD8⁺细胞比值为(1.4±0.1),显著高于对照组【(1.1±0.1),P<0.05】;血清IgE水平为(11.4±0.5)g/L,显著高于对照组【(9.2±0.4)g/L,P<0.05】,血清IgG水平为(2.5±0.3)g/L,显著高于对照组【(2.2±0.2)g/L,P<0.05】,血清IgA水平为(1.6±0.2)g/L,显著高于对照组【(1.4±0.1)g/L,P<0.05】;观察组术后并发症发生率为5.7%,显著低于对照组(21.2%,P<0.05)。结论 采用腹腔镜联合术中胆道镜治疗胆囊结石合并肝外胆管结石患者可改善手术相关指标,抑制血管紧张素的分泌,降低机体应激反应,减少术后并发症的发生。     

外源性联合应用EPCs和SDF-1α对大鼠肝移植缺血再灌注的保护作用

目的：探讨外源性注射骨髓来源的血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）或基质细胞源性因子-1α（stro－mal derived factor-1 alpha,SDF-1α）或两者联合,比较性评估3种方法对大鼠肝移植术后缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）的影响。方法：LEWIS大鼠骨髓EPCs提取培养,流式表型鉴定,激光共聚焦功能鉴定;建立大鼠原位肝移植模型,随机分为5组：A组（假手术组）,B组（手术组）,C组（SDF-1α组）,D组（EPCs组）,E组（SDF-1α+EPCs组）;再灌注12 h后处死各组大鼠,免疫组化检测肝组织再生以及肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）的表达情况;WB检测肝组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、HGF、转化生长因子-β（transforming growth factor-beta,TGF-β）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）蛋白表达;ELISA检测VEGF、HGF、TGF-β表达。结果：LEWIS大鼠骨髓提取的EPCs CD34、CD133的阳性比例分别为78.32%、70.76%,同时具有结合ac-LDL和UEA-1功能的EPCs,阳性率达80%以上;SDF-1α诱导EPCs穿过的细胞数[（79.6±6.3）个]明显高于对照组[（36.2±2.9）个]（P=0.000）;各组大鼠肝组织中,C、D组肝组织HGF分泌和再生情况免疫评分明显高于A、B组（P=0.000）,E组免疫评分明显高于C、D组（P=0.000）;各组VEGF、HGF、TGF-β、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达结果,C、D组VEGF、HGF、TGF-β、Bcl-2蛋白表达明显高于A、B组（P=0.000）,E组VEGF、HGF、TGF-β蛋白表达明显高于C、D组（P=0.000）,而C、D、E组Bcl-2蛋白表达比较差异无统计学意义。B、C、D组Caspase-3蛋白表达明显高于A组（P=0.000）,而E组Caspase-3蛋白明显低于C、D组（P=0.000）;ELISA结果与Western blot结果一致。结论：外源性联合应用EPCs和SDF-1α能有效保护肝移植缺血再灌注的损伤,诱导肝细胞再生,减少肝细胞凋亡。     

CTLA4Ig与IDO基因共转染对大鼠肝移植后免疫耐受的影响

目的 研究经门静脉CTLA4Ig、IDO基因共转染对大鼠肝移植后免疫耐受的影响.方法 建立大鼠肝移植模型,将40只大鼠分为4组:CTLA4Ig-IDO组、CTLA4Ig组、IDO组、对照组.术后14 d处死5只大鼠并收集标本检测各组白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红集(TBIL)水平及T细胞凋亡的程度.结果 术后14 d,CLTA4Ig-IDO组血清中的AST、ALT、TBLI水平明显低于其余3组(P＜0.05).CTLA4Ig组、IDO组血清中的AST、ALT及TBLI水平均与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).对照组中IL-2、IFN-γ的mRNA及蛋白表达均高于CTLA4Ig-IDO组(P＜0.05),IL-4、IL-10、TGF-β的mRNA及蛋白表达均低于CT-LA4Ig-IDO组(P＜0.05).结论 CTLA4Ig-IDO基因共转染能够更加显著地改善肝移植后存活率及肝功能,并且能够通过诱导T细胞凋亡缓解急性排斥反应,形成肝移植免疫耐受.