高强度聚焦超声不完全消融对体外培养肝癌细胞的影响探析

目的探析高强度聚焦超声不完全消融对体外培养肝癌细胞的影响。方法超声的声功率设置在5万以下,设置温度和时间以此获取肝癌细胞。在一定的温度下,高强度聚焦超声可以筛选出不完全消融的肝癌细胞,并能够继续培养稳定的子代,观察细胞的增殖、热耐受性以及内皮细胞官腔变化。结果实验表明,超声照射时间、温度与细胞死亡率呈正比的关系,高强度聚焦超声的照射时间越长,温度升高,则会增加肝癌细胞的死亡率。当温度超过48℃时,肝癌细胞几乎全被消灭。当温度达到47℃时,患者体内的细胞增殖、热耐受性增强,细胞的运动、侵袭能力并无太大变化,高强度聚焦超声有效的促进了内皮细胞管腔的形成。结论高强度聚焦超声有效的杀灭的肝癌细胞,并且能够促进内皮细胞管腔的形成,在临床检测上值得适应和推广。     

羟考酮对 HepG2 和 SMMC-7721 人肝癌细胞生长影响的 体外研究

目的 探讨羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖抑制的可能机制。方法 体外培养 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞,用 CCK–8 法检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖的影响 并计算药物 IC50。细胞划痕实验检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞迁移的影响。Transwell 实验检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞侵袭的影响。结果 CCK–8 实验提示羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖有抑制作用,其中羟考酮抑制 HepG2 人肝癌细胞的 IC50 为 1.236mg/ml, 抑制 SMMC–7721 人肝癌细胞的 IC50 为 1.461mg/ml,对两种肝癌细胞系的增殖抑制随着剂量增大而增强。细胞 划痕实验和 Transwell 实验显示随着浓度的升高,羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞的迁移和侵袭有显 著抑制作用,形态观察和细胞计数显示羟考酮可减少肝癌细胞的密度和数量,显著抑制肝癌细胞的集落形成并促 进肝癌细胞凋亡。结论 羟考酮具有抑制 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。     

基因捕获技术在肝癌侵袭和迁移相关基因筛选中的应用

目的：用基因捕获技术在肝癌细胞SMMC7721细胞中寻找与肝癌侵袭和迁移相关的基因。方法：首先,将pU21质粒转染到肝癌细胞SMMC7721细胞,用G418筛选出单克隆稳定细胞系;其次,采用Transwell小室实验和划痕实验,检测这些单克隆细胞侵袭和迁移能力的变化;最后,用5’-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测这些细胞系中被pU21质粒捕获的基因。结果：成功获得了约300株稳定转染pU21质粒的单克隆细胞系,得到了约30株侵袭和迁移能力增强的细胞株和约40株侵袭和迁移能力减弱的细胞株。通过5’-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测,证明了在A554细胞系中,被pU21质粒捕获的基因是long inter-genic non-protein coding RNA 52（LINC00052）。结论：应用基因捕获技术筛选肝癌侵袭和迁移相关基因是可行的。     

过表达NNMT对SMMC7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨尼克酰胺N甲基化酶(NNMT)对人肝癌细胞株SMMC7721恶性生物学行为影响.方法 分别对转染NNMT基因SMMC7721/NNMT组(简称S/NNMT)、对照组SMMC7721细胞组(简称S)及转染pcDNA3.1空质粒SMMC7721/pcDNA3.1(简称S/P)组细胞进行MTT增殖实验、克隆形成实验、黏附实验、侵袭实验等,以研究过表达NNMT对细胞生物学行为的影响.结果 MTT法检测结果显示S/NNMT组细胞增殖速度、克隆形成率与S组、S/P组比较差异无统计学意义(P＞0.05),S/NNMT组细胞异质黏附能力明显高于S组、S/P组细胞(P＜0.001);Transwell侵袭力实验结果显示S/NNMT组细胞OD值明显高于其余两组(P＜0.001).结论 NNMT可以使肝癌细胞的恶性表形发生变化,使其侵袭转移能力增强.     

干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

siRNA干扰骨形态发生蛋白2对肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的抑制作用

目的 设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins,BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 设计并化学合成针对BMP-2的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化,体外侵袭实验榆测转染后细胞侵袭能力的变化.实验共分6组,①正常对照组;②空白对照组;③阴性对照组;④～⑥分别为BMP-2-siRNA-A、BMP-2-siRNA-B、BMP-2一siRNA-C转染组.结果 RT-PCR和Western blot显示3对特异性BMP-2-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后,其BMP-2的基凶和蛋白表达均受到抑制,以siRNA-B抑制效果最明显[(0.32±0.07)vs(0.92±0.14),(0.37±0.10)vs(0.89±0.17),P<0.01].体外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组[分别为(6.48±3.62)、(23.72±3.24)、(22.38 4-3.84),P<0.05].结论 BMP-2与肝癌的侵袭转移潜能相关,siRNA-BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP-2表达,从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力.     

利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

目的 探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法 利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果 ①HC90基因的转染能增加SMMC－7721肝癌细胞形成的集落数量;②注射转染了HC90基因的SMMC－7721细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC－7721细胞的自身对照组;③HC3898全长cDNA转染SMMC－7721细胞能显著抑制集落的形成;④注射转染HC3898基因的SMMC－7721细胞组平均瘤小于注射SMMC－7721细胞的自身对照组的瘤重,抑瘤率为50％;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体,瘤块的组织DNA经1．5％琼脂糖电泳分析,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论 HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因,转染SMMC－7721肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法,可为进一步研究提供线索。     

聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响

目的:研究聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响,初步探讨产生该影响的机制.方法:以剂量为0.8MHz20W 5s的聚焦超声(该剂量照射过的SMMC7721细胞可保持70%的存活率)照射处于对数生长期的SMMC7721细胞,用免疫组化法及原位杂交法观察SMMC7721生化及基因表达的变化.结果:聚焦超声抑制SMMC7721细胞VEGF和PCNA蛋白的表达(P＜0.05)以及VEGF和PCNA mRAN的表达(P＜0.05).结论:用聚焦超声照射后存活的SMMC7721细胞增殖能力减弱,其机制可能是通过抑制VEGF和PCNA mRNA的表达,使VEGF和PCNA蛋白表达减少来实现.     

南蛇藤提取物含药血清对人肝癌SMMC 7721细胞增殖、迁移和黏附作用的影响

目的?制备南蛇藤（Celastrus Orbiculatus）乙酸乙酯提取物兔含药血清,研究其对人肝癌SMMC 7721细胞株的增殖、迁移和黏附的影响。方法?取新西兰白兔,以20mg/kg·d南蛇藤提取物灌胃,按血清药理学方法制备含药血清。设低、中、高剂量组（分别含有10%,20%,30%的南蛇藤提取物含药血清）,作用人肝癌SMMC 7721细胞,同时设溶媒对照组及5氟尿嘧啶（5Fu）阳性对照组。MTT法检测含药血清对细胞增殖的影响,Borden小室体外迁移实验及细胞黏附实验分别检测含药血清对细胞迁移和黏附能力的影响。结果?MTT结果显示各剂量组含药血清均能抑制肝癌SMMC 7721细胞的增殖,且呈剂量依赖性。迁移实验结果表明,中、高剂量组含药血清能显著抑制细胞的迁移能力（P＜0.05）;黏附实验结果显示在作用1h和2h 时各剂量组均能显著促进细胞的同质黏附;在作用2h 时,中、高剂量组能抑制细胞与基底膜成分Matrigel 的黏附,低、中、高各剂量组均能抑制细胞与人脐静脉内皮细胞的异质黏附,与对照组相比差异显著（P＜0.05或P＜0.01）,并具一定的量效关系。结论?南蛇藤提取物含药血清能有效抑制人肝癌SMMC 7721细胞的增殖和迁移能力,并能促进细胞的同质黏附能力,抑制细胞与基底膜及与人脐静脉内皮细胞的异质黏附能力。      

沉默CRAF基因表达对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的：探讨肝癌细胞中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（CRAF）高表达对肝细胞癌（HCC）侵袭和转移的影响,并阐明其机制。方法：以CRAF高表达的SMMC-7721细胞作为研究对象,采用shRNA技术下调CRAF表达。将SMMC7721细胞分为对照组和沉默组（shCRAF#1转染组和shCRAF#2转染组）。细胞划痕法观察各组SMMC7721细胞创口愈合指数,Transwell实验检测各组SMMC-7721细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组SMMC7721细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平。结果：细胞划痕实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的创口愈合指数明显降低（P<0.05）。Transwell实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的穿膜细胞数降低（P<0.05）。Western blotting法检测,沉默组细胞中MMP-2和MMP-9表达水平明显低于对照组（P<0.05）。结论：下调CRAF可以通过抑制MMP-2和MMP-9表达抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和迁移。     

74例青年肺癌的临床分析

本文通过对74例青年肺癌进行临床分析,并以185例老年肺癌作对照,显示青年肺癌中未分化癌明显高于老年组(P<0.01),且恶性度高,转移早,发展快,愈后差,应力争早期诊断.     

33例导管内癌组织形态观察及发病年龄分析

目的观察导管内癌(intraductal carcinoma)组织形态及发病年龄分析,探讨两者关系。方法收集33例确诊导管内癌标本,通过HE染色及免疫组化染色,观察不同形态导管内癌形态特征,并进行发病年龄统计。结果 33例导管内癌中,乳头型2例(6.1%),低乳头型4例(12.1%),筛状型4例(12.1%),粉刺型8例(24.2%),实性型15例(45.5%)。结论导管内癌可有不同的形态特征。SMA、P63联合应用,对观察导管内癌是否出现微浸润有重要意义。导管内癌在各年龄组中的发生率并无差异。     

一氧化氮合酶在常见消化道恶性肿瘤中的检测及意义

目的 :探讨一氧化氮合酶与常见消化道恶性肿瘤之间的关系。方法 :用分光光度法检测食管鳞癌、胃癌及结肠癌组织中一氧化氮合酶 (NOS)的含量。蛋白含量用酚试剂检测。结果 :食管鳞癌、胃癌及结肠癌组织中NOS含量显著高于相应的正常粘膜组织 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结肠癌组织中NOS含量显著高于食管鳞癌和胃癌组织 ,且差异有显著性 (P <0 .0 1)。食管鳞癌与胃癌组织中的NOS含量无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结肠癌的DukesD ,C期与DukesA ,B期之间NOS含量差异有显著性 (P <0 .0 5 )。DukesD与C及DukesA与B期之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :NOS的表达可能与食管鳞癌、胃癌及结肠癌的形成有关。在结肠癌组织中NOS含量明显增高 ,这可能与肠腔内细菌繁殖过程中产生的代谢产物诱导结肠癌组织中iNOS的表达有关。     

腹腔镜下盆腔淋巴切除术加广泛子宫切除术治疗子宫恶性肿瘤的可行性

目的 探讨腹腔镜下盆腔淋巴切除术加广泛子宫切除术治疗子宫恶性肿瘤的可行性及价值.方法 对11例子宫颈癌患者和3例子宫内膜癌患者进行腹腔镜下盆腔淋巴切除术加广泛子宫切除术,分析其手术时间、术中出血量、切除淋巴结数目、术后恢复情况及手术并发症.结果 14例患者均在腹腔镜下完成手术,手术时间(268.5±23.3]min,术中出血量(185.0±24.6)ml,淋巴结切除数目(27.5±4.6)个.术后尿潴留2例,输尿管阴道瘘1例.14例患者均在术后随访中,未发现复发.结论 腹腔镜下盆腔淋巴切除术加广泛子宫切除术治疗早期子宫恶性肿瘤安全、可行,有临床应用价值.     

孤立性细支气管肺泡癌12例临床分析

我们对手术治疗的12例孤立性细支气管肺泡癌进行临床分析。在诊断方面,X线检查无明显特征性,CT检查可了解纵隔淋巴结转移的情况,经皮肺穿可提高本病的诊断率。病理分型,分泌型1例;非分泌型9例;低分化型2例;经随访,后者预后欠佳。治疗上均应手术切除,对于低分化型细支气管肺泡癌则应最大限度地保留功能肺组织。     

高龄食管癌贲门癌围手术期治疗

目的 探讨70岁以上高龄食管癌、贲门癌的术前、术后治疗。方法 回顾分析2000年3月2003年5月收治的30例70岁以上食管癌、贲门癌患者的手术前准备及术后治疗情况。结果 全组手术后共发生并发症8例，并发症发生率26．7％，死亡1例，死亡率3．3％。结论 高龄食管癌、贲门癌患者多合并其他脏器疾病，术前针对性的处理，术中、术后密切监护、及时治疗，对减少术后并发症，提高手术成功率至关重要。     

CO_2激光治疗口腔颌面部早期恶性肿瘤14例远期效果分析

1977～1986年,应用国产CO_2 激光手术器治疗口腔颌面部早期恶性肿瘤14例。其中,男8 例,女6 例。唇癌6 例,面颊鼻部基底细胞癌3例,腭圆柱 2例,颊癌、舌癌及面颊部皮肤类癌各1 例。经15年(1992年)的随访观察,生存5年以上者12例,生存率为85.7％。且皮肤癌肿切除后不整形转移皮瓣亦不缝合者6 例,疤痕却愈合表浅,不显。转移皮瓣缝合者疤痕比手术刀治疗略粗。均未遗留面部畸形与功能障碍。     

130例消化系统疾病患者超声内镜检查分析

运用超声内镜（ＥＵＳ）对１３０例消化系统疾病患者进行检查，对其中４４例手术探查及病理所见进行比较：癌肿浸润粘膜层或粘膜下层（Ｔ１）２例，手术切除、病理检查结果与ＥＵＳ诊断相符；浸润固有肌层（Ｔ２）７例，４例与手术病理结果相符，３例ＥＵＳ判断过浅；浸润浆膜层或浆膜外（Ｔ３～Ｔ４）２７例，二者均相符，但１０例手术可切除，１７例无法切除；总符合率９２％，手术切除率５３％。ＥＵＳ对评价病变侵犯深度、范围及预测手术切除可能性较准确。     

胃粘液细胞癌的临床病理

报告7.674例胃镜病理活检中发现的40例粘液细胞癌。本组胃癌占同期胃镜检出胃癌(285例)的14%,女性多于男性(21:19),平均年龄46.3岁,较同期其它类型胃癌年轻10岁之多。内窥镜下常表现为糜烂和溃疡,诊断正确率为62.5%。病理组织学见不同病例或同一病例的粘液细胞癌形态不完全一致,粘液组织化学研究表明其粘液性质的异质性,11例呈酸性粘液,6例中性粘液,23例混合性粘液。对粘液细胞癌的组织发生、病理学鉴别诊断及其癌前病变进行了讨论。     

泌尿系统肿瘤组织中核干细胞因子mRNA的表达

目的:探讨泌尿系统肿瘤组织中核干细胞因子(NS)mRNA的表达情况.方法:采用RT-PCR方法,检测43例肾细胞癌、36例膀胱移行细胞癌、36例前列腺癌组织以及其中24例患者相应的癌旁正常组织中NS mRNA的表达情况.结果:55.8%(24/43)的肾细胞癌组织、69.4%(25/36)的膀胱移行细胞癌组织和66.7%(24/36)的前列腺癌组织中NS mRNA表达阳性,癌旁正常组织均未见阳性表达.不同分级、分期肿瘤组织之间NS mRNA的表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:NS基因有可能作为一种新的肿瘤标志物用于泌尿系统肿瘤的诊断和恶性程度的判断.