BMP4 通过诱导EMT 促进肝癌迁移侵袭*

目的:检测BMP 4 在肝癌中的表达并探讨BMP 4 在诱导肝癌EMT 中的作用,进而研究其对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测肝癌组织中BMP 4 的表达,分析其与肝癌临床病理资料之间的关系。将BMP 4 表达质粒转染至肝癌细胞系HepG2 中,诱导BMP 4 外源性过表达。观察BMP 4 转染前、后HepG2 的细胞形态学改变;Westernblot检测转染前、后HepG2 中BMP 4、EMT 相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕和侵袭实验检测BMP 4 对细胞迁移侵袭能力的影响。结果:BMP 4 与患者的年龄、病理分级、临床分期、不良预后密切相关。BMP 4 过表达后HepG2 呈现典型的EMT 形态学改变,E-cadherin 表达下调、Vimentin 表达上调、细胞的迁移侵袭能力显著增强。结论:BMP 4 与肝癌临床病理资料密切相关,并可能通过诱导EMT 促进肝癌细胞的迁移侵袭能力。      

胃癌不同组织学分型与微血管密度及相关因子的关系*

目的:探讨微血管密度（microvascular density,MVD）,基质金属蛋白酶- 2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、基质金属蛋白酶- 9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）、血管内皮生长因子受体1（vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1）、血管内皮生长因子受体2（vascularendothelialgrowthfactorreceptor 2,VEGFR2）、p53蛋白与胃癌Lauren 分型及WHO分型的关系。方法:收集89例胃癌患者的临床数据并将其按照Lauren 和WHO标准进行分型。应用单克隆抗体CD34/PAS 双重染色评价89例胃癌组织中的微血管密度,免疫组织化学法检测标本中MMP-2、MMP-9、VEGF、VEGFR1、VEGFR2 和p53蛋白的表达。结果:在胃癌中,MVD与Lauren 分型和WHO分型均无相关性（P > 0.05）。 Lauren 分型与MMP-9、VEGFR1 和p53有相关性（P < 0.05）,与MMP-2、VEGF和VEGFR2 无相关性（P > 0.05）。 WHO分型与各肿瘤相关因子均无相关性（P > 0.05）。 Lauren 分型和WHO分型是胃癌患者独立的预后因素（P < 0.05）。 结论:对肿瘤相关因子、血管生成与胃癌发生、发展过程的研究,可能为不同组织学分型的胃癌患者提供新的治疗方法。      

Caspase 8和9在肿瘤局部微环境形成早期与调控蛋白Twist1的关联性

目的:研究Caspase 8、9在肿瘤局部微环境早期线形程序性坏死(LPPCN)及血管生成拟态(VM)形成中对上皮-间充质转变(EMT)调控蛋白Twist1表达的影响。方法:将96只C57BL小鼠随机分为Caspase 8抑制剂组、Caspase 9抑制剂组、Caspase 8、9抑制剂联合用药组(联合组)和对照组,制备小鼠荷瘤模型。采用免疫组织化学法检测EMT调控蛋白Twist1在LPPCN和VM周围第1~4层肿瘤细胞的表达水平。结果:4组LPPCN周围第1~4层肿瘤细胞Twist1核阳性染色指数差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且呈递减趋势;对于同层肿瘤细胞,联合组和对照组的细胞核Twist1阳性染色指数比较差别有统计学意义(均P<0.01)。LPPCN、VM周围第1~4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞浆Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05);VM周围第1~4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞核Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:Caspase 8、9介导的凋亡机制启动与EMT发生存在关联性。     

肝癌血管生成拟态分子机制的研究

目的 探讨肝细胞肝癌(HCC)中血管生成拟态(VM)形成的分子机制.方法 收集临床资料和随访资料完整、手术切除并死于HCC的病例99例,对99例HCC进行VEGF、MMP-2、MMP-9免疫组织化学染色,采用Mattern积分法评价三者在99例HCC中的表达,通过比较VM组和无VM组HCC中三者表达水平的差异来研究VM形成的分子机制.结果 MMP-2与MMP-9主要以弥漫型或颗粒状在肝癌细胞胞浆内表达,在癌巢的周边伴有组织浸润的部位高表达;VM组比无VM组有更高的MMP-2(t=3.184,P=0.002)与MMP-9的表达(Z=2.659,P=0.009);VEGF阳性表达主要位于肝癌细胞胞浆内,毗邻坏死区域的肝癌细胞有较强表达,HCC中VM组与无VM组之间VEGF表达的差异不具有统计学意义(t=-1.387,P=0.169).结论 MMP-2、MMP-9在肝癌细胞中高表达,降解并重塑细胞外基质,可能参与VM的形成.     

数字切片库结合网络在病理学实验教学中的应用

传统病理学实验教学依赖显微镜对病理学组织切片进行观察,这种教学模式所固有的缺点影响了教学效果和学生学习的主动性与创造性.病理学实验教学数字切片库结合网络教学的新型病理学实验教学模式打破了传统病理学组织切片教学所存在的时空限制,给传统病理学实验教学带来全新模式的变革,并对病理学实验考试产生了积极的影响,而且这种全新的教学模式对形成以学生为学习主体、开展自主性学习和创造性学习具有重要作用,对培养医学生的创新能力具有重要意义.     

利用染色质免疫共沉淀测序研究Twist1结合的靶DNA序列

目的:利用染色质免疫共沉淀测序研究Twist1结合的靶DNA序列,比较过表达Bcl-2和正常状态下Twist1结合靶DNA序列的变化。方法:筛选常态表达Twist1的肝癌细胞系,分别转染Bcl-2表达质粒和对照空载体,收集转染后细胞以甲醛交联DNA,收集样品进行染色质免疫共沉淀,获得与Twist1蛋白结合的DNA片段进行测序分析。结果:通过对5种肝癌细胞系进行筛选,观察到HepG2可表达Twist1,其与DNA结合序列在空载体对照组和Bcl-2过表达组具有很大的差别,结合DNA数量分别为68条和212条,其中共享序列154条。结论:Twist1在不同环境下与DNA结合位点多达212个,涉及粘附分子、细胞骨架、信号转导、代谢和转录调节等多种生物学功能。     

应用小干扰RNA下调CXCR4抑制乳腺癌增殖及迁移

目的:验证CXCR4对乳腺癌细胞增殖及迁移功能的影响.方法:以Western-blot筛选出高表达CXCR4的乳腺癌细胞系MDA-MB-231作为研究对象,将合成的CXCR4-siRNA序列转染至细胞内,下调CXCR4表达,通过Western-blot验证干扰效果,利用细胞增殖实验和划痕实验检测下调组与阴性对照组细胞的增殖及迁移功能.结果:MDA-MB-231细胞表达CXCR4水平较高,小干扰RNA下调CXCR4基因表达效果好,同时下调的CXCR4基因表达的细胞增殖能力低于阴性对照组(P＜0.01),且迁移能力有所下降.结论:下调CXCR4对乳腺癌转移及增殖有一定程度的抑制作用.     

Twist1与Bcl-2协同促进肝癌细胞EMT过程中的miRNA表达谱变化

目的:为研究Twist1和Bcl-2协同诱导上皮间充质转变(EMT)发生直接相关的microRNA(miRNA)提供线索。方法:构建Twist1和Bcl-2表达质粒,单独转染或共转染获得过表达Bcl-2、过表达Twist1和共同过表达Twist1/Bcl-2肝癌细胞模型,在此基础上结合miRNA芯片分析单独过表达或共过表达Twist1/Bcl-2可引发的miRNA表达谱变化。结果:共过表达Twistl/Bcl-2可引起肝癌细胞多个miRNA发生明显表达变化,数据结果差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:Bcl-2与Twist1协同作用可引起广泛的miRNA发生明显的表达变化进而调控多个下游靶基因活性,从而改变肿瘤的多种生物学行为。     

常规组织制片技术在病理学实验教学中的应用

通过把常规组织制片和HE染色技术的内容拓展到本科病理实验课中,使学生不仅掌握了该技术方法的理论知识及自行判断切片的优劣标准,并且亲自动手参与该技术的操作过程.一方面提高了学生学习病理学的积极性,推动病理学实验教学的发展,另一方面培养学生动手能力及思维分析能力,为将来进一步深造奠定基础.该技术的应用得到了广大学生的欢迎.     

免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用

组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本，并按次序排列在一个新的石蜡块上，制作成HE切片，然后按研究的需要进行免疫组化及原位杂交等研究。组织芯片技术最重要的特点是：一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破坏很小。此外，利用组织芯片仪还可以进行组织切片的精确定位和多种类型的分子生物学分析。