改良气管切开术在呼吸机辅助呼吸患者中的应用

目的 分析改良气管切开术在呼吸机辅助呼吸患者的应用价值.方法 对2009年5月～2010年12月期间,39例改良气管切开术的患者,观察其手术难度,手术时间,切口大小,出血量,术后并发症及切口愈合情况.结果 改良气管切开术,操作时间短,切口小,术中出血少,术后并发症少,切口愈合快,感染率低.结论 改良气管切开术是一种安全、简便、创伤小及并发症少的气管切开手术.     

生物合成与细胞凋亡在胶原-壳聚糖真皮支架修复创面中的作用和机制

目的 探讨胶原一壳聚糖真皮支架在修复全层皮肤缺损的生物合成和细胞凋亡机制,并明确支架植入修复创面与无支架植入的瘢痕修复创面的区别.方法 将胶原-壳聚糖,硅橡胶双层人工真皮支架移植于猪全层皮肤缺损创面,对植入后1、2、3周及植入支架2周加植表皮后2周的创面和修复情况进行观察.同时,通过免疫组织化学、末端脱氧核苷酸介导的生物素化的脱氧尿嘧啶DNA切口末端标记、天狼猩红染色方法,对不同时间的创面的TGF-β1.的表达、细胞凋亡发生情况以及支架自身胶原替代进行检测和观察.以不植入支架的创面为对照.结果 ①实验组创面与正常肉芽组织不同.②TGF-β1在实验组表达高峰在支架植入后1、2周,3-4周持续下降;在对照组中,1～3周的创面持续升高,4周下降.组问比较,1、2周实验组明显高于相应对照组,3、4周实验组明显低于相应对照组.③实验组植入支架后2-4周,细胞凋亡持续增多;对照组3-4周创面细胞凋亡持续增多.组间比较,l周两者差异无统计学意义,2-4周实验组显著高于相应对照组.④天狼猩红染色观察:实验组1周,自身胶原已开始合成,2-3周基本完成支架自身胶原替代.结论 胶原-壳聚糖真皮支架在伤口愈合中有明显作用,其修复创面的机制与自然的肉芽或瘢痕修复不同.     

兔延迟术后脂肪瓣内间充质干细胞增殖的实验研究

目的 探讨采用脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,促使脂肪来源的兔间充质干细胞(ASCs)增殖的可能性.方法 以兔为动物模型,在一侧腹股沟处形成脂肪瓣.21 d后取出瓣内脂肪组织及对侧正常脂肪组织,消化过筛离心,收集离心后沉淀物中的细胞,用流式细胞仪检测细胞的表面标记,计算细胞CD29、CD44、CD14和CD45的表达率并进行组间比较.结果 脂肪瓣延迟术后,瓣内细胞CD29和CD44的表达率增加,分别为74.06%和90.74%,未经处理的对侧脂肪组织分别为62.88%和77.54%,差异有统计学意义(P<0.05);瓣内细胞CD14和CD45的表达率减少,分别为57.66%和4.84%,未经处理的对侧脂肪组织分别为72.10%和75.82%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,可促进ASCs的增殖,是用瓣内组织移植后取得更好效果的机制之一;对脂肪组织先进行缺血预处理再移植,可能为一个临床脂肪移植的新方法.     

雌激素受体诱导乳腺癌细胞辐射抗性的机制研究

目的 探讨雌激素受体(ESR1)对乳腺癌细胞辐射抗性的影响及分子机制。方法 在雌激素受体阴性乳腺癌细胞中转染ESR1过表达质粒(过表达对照vector组、过表达ESR1 OE组),在雌激素受体阳性乳腺癌细胞中通过慢病毒转染方法构建稳定敲低ESR1(敲低对照shNC组、敲低shESR1组)的细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和免疫印迹方法检测自噬相关基因mRNA(ATG5)和蛋白表达水平(LC3B-I、LC3B-II、P62、FIP200、ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、ULK1);在8 Gy X射线的电离辐射处理下,免疫印迹法检测自噬通量;采用流式细胞术检测细胞死亡;采用集落形成实验检测乳腺癌细胞辐射敏感性(未照射sham组、照射IR组、电离辐射联合铁死亡抑制剂处理Fer-1+IR组、电离辐射联合凋亡抑制剂处理Z-VAD+IR组、电离辐射联合自噬抑制剂处理CQ+IR组);用台盼蓝染色检测自噬基因敲低和过表达细胞模型以及雌激素受体抑制剂他莫昔芬(TAM)与电离辐射联合治疗下乳腺癌细胞的死亡率(他莫昔芬未处理TAM-组、他莫昔芬处理TAM+组)。结果 在8 Gy X射线照射后24 h处理条件下,雌激素受体阳性乳腺癌ZR75细胞ESR1的敲低促进细胞死亡(t=3.49、3.13, P < 0.05),而雌激素受体阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞ESR1的过表达抑制细胞死亡(t=4.16、7.48, P < 0.05);与单纯照射相比,自噬抑制剂氯喹的处理后增加了敲低ESR1的ZR75细胞集落形成数量(t=8.49, P < 0.05), 抑制自噬可以减少沉默ESR1所致的ZR75细胞死亡。在电离辐射处理下,MDA-MB-231细胞过表达ESR1促进了细胞保护性自噬;ZR75细胞敲低ESR1后细胞保护性自噬降低。在ZR75细胞中敲低ATG5发现自噬降低,细胞死亡增加(t=4.19、6.39, P < 0.05),而在ZR75中过表达ATG5可以逆转因敲低ESR1导致的细胞死亡增加(t=1.70、4.65, P < 0.05)。化疗药物他莫昔芬处理雌激素受体阳性乳腺癌细胞ZR75后发现自噬基因ATG5、ATG12的表达下降,自噬抑制,细胞死亡增加(t=18.70, P < 0.05),电离辐射处理促进了这一进程(t=16.82, P < 0.05)。结论 雌激素受体ESR1通过增加ATG5自噬相关蛋白,促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞的保护性自噬,从而导致雌激素受体阳性乳腺癌细胞的辐射抵抗,化疗药物他莫昔芬联合电离辐射治疗增加了雌激素受体阳性乳腺癌细胞的辐射敏感性。     

兔延迟术后脂肪瓣内间充质干细胞增殖的实验研究

目的 探讨采用脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,促使脂肪来源的兔间充质干细胞(ASCs)增殖的可能性.方法 以兔为动物模型,在一侧腹股沟处形成脂肪瓣.21 d后取出瓣内脂肪组织及对侧正常脂肪组织,消化过筛离心,收集离心后沉淀物中的细胞,用流式细胞仪检测细胞的表面标记,计算细胞CD29、CD44、CD14和CD45的表达率并进行组间比较.结果 脂肪瓣延迟术后,瓣内细胞CD29和CD44的表达率增加,分别为74.06%和90.74%,未经处理的对侧脂肪组织分别为62.88%和77.54%,差异有统计学意义(P<0.05);瓣内细胞CD14和CD45的表达率减少,分别为57.66%和4.84%,未经处理的对侧脂肪组织分别为72.10%和75.82%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,可促进ASCs的增殖,是用瓣内组织移植后取得更好效果的机制之一;对脂肪组织先进行缺血预处理再移植,可能为一个临床脂肪移植的新方法.     

兔延迟术后脂肪瓣内间充质干细胞增殖的实验研究

目的 探讨采用脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,促使脂肪来源的兔间充质干细胞(ASCs)增殖的可能性.方法 以兔为动物模型,在一侧腹股沟处形成脂肪瓣.21 d后取出瓣内脂肪组织及对侧正常脂肪组织,消化过筛离心,收集离心后沉淀物中的细胞,用流式细胞仪检测细胞的表面标记,计算细胞CD29、CD44、CD14和CD45的表达率并进行组间比较.结果 脂肪瓣延迟术后,瓣内细胞CD29和CD44的表达率增加,分别为74.06%和90.74%,未经处理的对侧脂肪组织分别为62.88%和77.54%,差异有统计学意义(P<0.05);瓣内细胞CD14和CD45的表达率减少,分别为57.66%和4.84%,未经处理的对侧脂肪组织分别为72.10%和75.82%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,可促进ASCs的增殖,是用瓣内组织移植后取得更好效果的机制之一;对脂肪组织先进行缺血预处理再移植,可能为一个临床脂肪移植的新方法.     

化学改性壳聚糖膜预防不同类型腹膜粘连的实验研究

目的对比研究化学改性壳聚糖膜对四种不同原因所致的大鼠腹膜粘连的预防作用。方法将壳聚糖行化学改性，制成厚60μm的膜消毒后备用。SD大鼠200只，随机分成假手术对照组（A组）、创伤致粘连组（B组）、滑石粉致粘连组（C组）、结扎血管致粘连组（D组）及感染致粘连组（E组）。各组分别用相应的方法来处理大鼠蚓突盲端．再将每组大鼠分成对照组和实验组．对照组大鼠直接关腹，实验组用凝胶化改性壳聚糖膜覆盖蚓突盲端浆膜面．然后关腹。处理后2周和4周后打开腹腔，以Bhatia分级法评定蚓突盲端的粘连程度，并对盲端组织行羟脯胺酸（hydroxyproline，OHP）、组织型纤溶酶原激活剂tissue—type plasminogen activatior，t—PA）和纤溶酶原激活物抑制因子（plasminogen activator inhibitor，PAI）水平测定，对腹腔液行t—PA、PAI测定。结果①粘连程度和OHP水平：术后2周和4周，B、D、E组中实验组的粘连程度、OHP水平均分别显著低于对照组（P〈0．05），而A、C组中的实验组和对照组间差异均无统计学意义（P〉0．05）；②t-PA、PAI水平：术后2周和4周，A组、C组和D组的蚓突组织和腹腔液t—PA、PAI水平．实验组和对照组间差异均无统计学意义（P〉0．05）；B组、E组中实验组t—PA水平均显著高于对照组（P〈0．05），而PAI水平则显著低于对照组（P〈0．05）。结论化学改性壳聚糖膜时创伤、缺血及感染所致的腹膜粘连有明显的预防作用，而对滑石粉所致的腹膜粘连则作用不明显；对不同原因所致的腹膜粘连．可以用来准确衡量组织粘连程度的指标也不尽相同。     

聚丙烯酰胺水凝胶注入兔体的免疫效应研究

目的　观察注射性聚丙烯酰胺水凝胶 (PAMHG)注入实验兔体的免疫效应。方法　采用间接免疫荧光法或双抗体夹心ELISA法 ,监测PAMHG注入兔体前后T淋巴细胞亚群、NK细胞活性、IL 2和sIL 2R表达水平。结果　PAMHG注入兔体前 ,CD3+ 和CD4 + T淋巴细胞表达水平分别为(17.8± 5 .9) %和 (9.6± 3.5 ) % ;PAMHG注入兔体后 3个月 ,表达水平分别为 (2 4 .3± 5 .6 ) %和 (15 .8± 4 .7) %。注入前后比较有显著差异 (P <0 .0 1)。 3个月后表达水平逐渐下降 ,与术前比较差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。PAMHG注入兔体前 ,CD8+ T淋巴细胞表达水平为 (6 .2± 2 .4 ) % ,与注入后 3个月为 (8.5± 4 .2 ) %比较仅略有上升 ,两者比较P >0 .0 5。注入兔体前、后CD4 + CD8+ 比值均在正常范围(1～ 2 )。NK细胞活性仅于注入兔体 1个月为 (2 5 .3± 6 .8) % ,较注入前 (18.0± 9.7) %升高 (P <0 .0 5 ) ,俟后NK细胞活性逐渐下降 ,与注入前比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。IL 2和sIL R表达水平于注入兔体前后差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　PAMHG用作软组织填充剂 ,仅在机体内引起短时异物排斥 ,可渐与组织相容 ,不会引起严重免疫功能失调     

介绍一种细菌芽孢微波染色法

目的　探讨一种细菌芽孢微波染色方法。方法　取破伤风芽孢杆菌作试菌 ,用石炭酸复红初染 ,孔雀绿复染 ,初染时用微波辐射进行加热。结果　破伤风芽胞杆菌的芽孢染成红色 ,菌体染成绿色 ,色泽鲜明 ,清晰可辨。结论　本方法能使芽孢较好着色 ,并能缩短染色时间 ,提高染色效果     

兔延迟术后脂肪瓣内间充质干细胞增殖的实验研究

目的 探讨采用脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,促使脂肪来源的兔间充质干细胞(ASCs)增殖的可能性.方法 以兔为动物模型,在一侧腹股沟处形成脂肪瓣.21 d后取出瓣内脂肪组织及对侧正常脂肪组织,消化过筛离心,收集离心后沉淀物中的细胞,用流式细胞仪检测细胞的表面标记,计算细胞CD29、CD44、CD14和CD45的表达率并进行组间比较.结果 脂肪瓣延迟术后,瓣内细胞CD29和CD44的表达率增加,分别为74.06%和90.74%,未经处理的对侧脂肪组织分别为62.88%和77.54%,差异有统计学意义(P<0.05);瓣内细胞CD14和CD45的表达率减少,分别为57.66%和4.84%,未经处理的对侧脂肪组织分别为72.10%和75.82%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 脂肪瓣延迟术等缺血缺氧的方法,可促进ASCs的增殖,是用瓣内组织移植后取得更好效果的机制之一;对脂肪组织先进行缺血预处理再移植,可能为一个临床脂肪移植的新方法.