实时荧光定量PCR检测宫颈癌患者HPV病毒负载量的研究

目的:检测单一感染人乳头瘤病毒 (Human papillomavirus,HPV) 16,HPV18,HPV58患者的病毒负载量,为进一步研究高危型HPV的致病机制提供依据.方法:应用实时荧光定量PCR对单一感染HPV16,HPV18,HPV58的样本各50,48,41例的病毒负载量进行定量检测.结果:检测样本中HPV16,HPV18,HPV58的病毒负载量均值分别为(7.89±3.76)×109,(9.55±1.32)×103,(2.38±1.65)×10.HPV16分别与HPV18和HPV58的病毒负载量比较,差异有统计学意义(P<0.05);HPV18与HPV58的病毒负载量比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:HPV16的病毒负载量远高于HPV18和HPV58,提示HPV16的高病毒负载量与其高感染率可能存在一定关系.     

佐剂诱导关节炎大鼠模型的建立及成纤维样滑膜细胞的分离

目的建立类风湿性关节炎(RA)动物模型；从炎性关节滑膜中分离成纤维样滑膜细胞(FLS)。方法应用热灭活结核杆菌H37Ra菌株与矿物油混合制备改良的佐剂,尾根部皮内注射Lewis大鼠诱导关节炎；剪取成功诱导关节炎大鼠的病变踝关节,从中剥离滑膜组织,充分剪碎后采用胶原酶消化法分离成纤维样滑膜细胞。结果成功诱导了大鼠关节炎,发病率为100%,发病时间有规律,组织学表现与RA相似；成功在体外培养了FLS并对其进行了鉴定,掌握了其生长形态和特征。结论成功制备RA动物模型并获得FLS,为今后RA发病机制探索和药物评价提供了良好的体内动物模型和体外细胞模型。     

PICC置管术引起静脉血栓的诊断及处理

目的 分析肿瘤患者中心静脉（PICC）置管致血栓的原因，总结有效的预防处理措施。方法 患者于化疗当日行PICC置管，并给予观察处理。结果 158例患者中6例发生静脉血栓，发生率3．8％；经溶栓和抗凝治疗2—10d后，症状逐渐缓解，无1例发生栓子脱落引起重要器官栓塞。结论 肿瘤患者PICC致静脉血栓是比较严重的并发症，给予有效的预防处理措施后，可降低静脉血栓的发生；在抗凝和溶栓过程中应密切观察出血倾向及栓子有无脱落导致其他部位栓塞的征象。     

稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立

目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系。方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,构建重组真核表达质粒pIRES-neo-HPV58E6E7。利用阳离子脂质体介导法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出稳定转染的阳性克隆。利用Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证HPV58E6E7融合基因在稳定转染的B16细胞株中的表达。结果:经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析,pIRES-neo-HPV58E6E7重组质粒构建正确,转染B16细胞株后,经过Western blot、流式细胞术和免疫荧光等检测显示B16细胞株能够稳定、高效表达HPV58E6E7融合基因,表明B16-HPV58E6E7稳定转染细胞系构建成功。结论:成功构建了pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,建立了可以高效、稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16细胞系。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究HPV58治疗性基因疫苗的功能提供了良好的靶细胞,为其在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。     

高效液相色谱-示差折光法测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量

目的 建立测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量的高效液相色谱-示差折光法。方法 检测器为示差折光检测器,色谱柱为SUGAR SC1011阳离子钙型交换柱(300 mm×8 mm,6μm),流动相为纯化水,流速为1.0 mL/min,柱温为80℃,检测池温度为37℃,进样量为10μL。结果 甘露醇的质量浓度在0.02～5.00 mg/mL(R²=1.000 0,n=6)范围内与峰面积线性关系良好;定量限为13.37μg/mL;精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于2.0%;加样回收率为97.76%,RSD为0.97%(n=9)。3批小试样品和中试样品中甘露醇的含量分别为20.02,19.95 mg/mL。结论 该方法操作简便、重复性好、结果准确,可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇的含量测定。     

稳定表达hTERT/Luc的小鼠黑色毒瘤肺转移模型的建立

目的 建立稳定共表达荧光素酶基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并通过尾静脉注射的方式建立小鼠肿瘤肺转移模型.方法 利用DNA重组技术将hTERT基因和荧光素酶基因Luc定向插入到真核表达载体,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT和pIRES-hyg3-Luc,利用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000共转染小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418及潮霉素B加压筛选出稳定转染的细胞株.应用Western blot法及免疫荧光法检测hTERT和Luc基因在B16细胞中的表达;将稳定共表达hTERT和Luc的B16-hTERT/Luc细胞株通过尾静脉注射的方式接种雄性C57BL/6小鼠建立肿瘤肺转移模型,并通过活体成像技术检测小鼠肺部肿瘤的生长.结果 建立了稳定共表达hTERT和Luc的小鼠黑色素瘤B16单克隆细胞株B16-hTERT/Luc,经检测hTERT基因和荧光素酶基因Luc在单克隆细胞株中的表达分别为84％和98％.通过尾静脉注射的方式成功建立了小鼠肿瘤肺转移模型,应用活体成像技术能方便地检测到B16-hTERT/Luc肿瘤在小鼠体内的生长情况.结论 成功建立了可用于活体成像技术检测的稳定表达hTERT的小鼠黑色素瘤肺转移模型.     

粘附分子CD44v6免疫靶向治疗与细胞表面工程技术

粘附分子CD44拼接变异体6（CDd4 splice variant 6,CD44v6）是CD44的拼接变异体之一,其表达可改变肿瘤细胞表面细胞黏附分子的构成和功能,有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6的异常表达可作为肿瘤早期诊断、转移和复发的生物学标志物,其肿瘤的靶抗原性可能成为研究热点。细胞表面工程技术的应用为免疫靶向治疗提供了更加广阔的空间。     

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ的构建和鉴定

目的 构建恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基(macaca mulatta chorionic gonadotrophin β subunit,rmCGβ)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,并了解该质粒能否在真核细胞中表达.方法 通过PCR扩增rmCGβ的全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-rmCGβ细胞株中rmCGβ全段基因cDNA.结果 经4轮PCR,成功扩增出rmCGβ的cDNA全长基因,酶切和测序证明正确构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,通过RT-PCR方法 证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达.建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-rmCGβ.结论 成功克隆和构建了rmCGβ的真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)-rmCGβ,为进一步研究rmCGβ的新功能和免疫治疗奠定了基础.     

抗血管生成肿瘤疫苗研究进展

研究发现,肿瘤的生长和转移依赖于血管的生成,如果抑制肿瘤新生血管的形成就可以有效抑制肿瘤细胞的生长和转移.越来越多的证据表明,以血管相关抗原为靶点的疫苗可以引发机体产生特异性细胞或体液免疫反应,抑制血管的形成,从而起到阻止肿瘤细胞生长和转移的作用.目前,针对肿瘤血管生成的疫苗治疗已成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略.本文就目前所进行的抗肿瘤血管生成的疫苗研究情况作一综述.     

CVC导管在恶性胸水引流中的应用及护理

胸腔穿刺放出胸水及腔内注入化疗药物是治疗恶性胸水的重要手段之一。2002年4月～2004年4月我科采用CVC(ARROW．14G)导管引流并胸腔注入化疗药物的方法，对恶性胸水患者进行治疗，取得满意效果．现将护理体会总结如下：