熏烟联合H1N1流感病毒感染对小鼠气道灌洗液免疫细胞的影响

目的 香烟暴露对流感病毒感染小鼠气道灌洗液免疫细胞的影响。方法香烟烟雾暴露4 d,第5天给予小鼠3个滴度（6、12、24 PFU）的流感病毒H1N1（A/PR/8/34）［假熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组（6PFU)、假熏烟攻毒组(12PFU)、假熏烟攻毒组(24PFU)、熏烟联合攻毒组(6PFU)、熏烟联合攻毒组(12PFU)、熏烟联合攻毒组(24PFU)］。分别观察实验后第3、5、7天气道灌洗液免疫细胞及相关改变。观察内容为：支气管灌洗液中的细胞总数及分类计数;化学发光法检测灌洗液细胞活性氧簇（ROS）的产生;以及BCA法检测小鼠灌洗液蛋白浓度。结果细胞计数结果表明H1N1病毒感染导致气道灌洗液细胞计数及分类计数呈滴度依赖性升高,并在攻毒后3 d（24PFU）、7 d（12PFU）达到应答高峰,并伴随灌洗液细胞ROS的产生速率在相应时点升高。香烟暴露的H1N1病毒感染小鼠气道的灌洗液细胞计数和分类计数在攻毒后5 d（24PFU）达到应答高峰,并伴有灌洗液细胞ROS产生速率的增加。在攻毒后3、5、7 d,H1N1病毒感染小鼠气道灌洗液蛋白含量均明显升高,且熏烟联合攻毒组与假熏烟联合攻毒组小鼠灌洗液蛋白含量在各时点无明显差异。结论香烟暴露延迟了气道的免疫细胞的急性募集以及杀伤力的高峰,但没有改变气道炎症介质分泌的总体水平。     

香烟烟雾对气道糖皮质激素受体表达及黏液分泌的影响

目的：探讨香烟烟雾及提取物对大鼠肺及A549细胞糖皮质激素受体（ GR）表达和黏液分泌的影响。方法采用香烟和香烟提取物（CSE）分别诱导大鼠动物模型和A549细胞模型。运用HE染色观察正常大鼠（正常对照组）和熏烟大鼠（模型组）肺组织病理改变,运用Western blot 法检测大鼠肺组织细胞核和细胞质内GR及HDAC2的表达情况,运用MTT法观察CSE对A549细胞存活率的影响,荧光定量PCR检测细胞内MUC5AC和HDAC2的mRNA含量,免疫荧光法观察细胞内GR的分布和表达。结果 HE染色提示模型组较正常对照组肺泡壁毛细血管扩张、充血,泡腔内充盈大量浆液性渗出物;模型组肺组织细胞核和细胞质中GR表达量明显减少（ P＜0.05）,HDAC2表达明显减少（P＜0.05）。 CSE对A549细胞活性的影响呈时间－浓度依赖的趋势,且10％CSE作用24 h可显著降低A549细胞存活率（P＜0.01）;5％CSE作用A549细胞8 h可明显减少HDAC2和MUC5AC的mRNA表达量（ P＜0.01）。免疫荧光结果提示5％CSE可导致A549细胞GR表达减少,且细胞核中变化更加明显。结论香烟烟雾可减少肺组织及肺上皮细胞内GR的表达,并增加黏蛋白MUC5AC的分泌,其机制可能与香烟烟雾减少GR对MUC5AC的转录抑制机制有关。     

中药临床试验样本量合理优化的探讨

中药临床试验的设计经常涉及到样本量的计算问题。样本量不足则检验效能过低,不易检出已存在的阳性结果,影响试验结果的准确性;样本量过大会造成资源浪费和执行困难,而且不适宜的样本量会有悖于伦理道德。本文比较了大样本试验和小样本试验的优缺点,并从多个角度探讨临床试验样本量设计的优化思路,为中药临床试验设计的样本量选择提供依据。     

中成药的中医药理论属性与疗效特征问题浅探

中成药是以中医药基础理论为指导,以中医药临床实践为依据,利用现代科学技术方法研制而成的药。在追求回归自然浪潮的今天,中成药已成为世界医坛的一朵奇葩,倍受重视。随着我国进入WTO和中药现代化的推进,其发展迎来了前所未有的机遇，同时也面临着更加激烈的竞争和严峻的挑战。如何使现代中成药的发展既能保持中医药特色，并能在合适的社会需求下抢滩国内外市场，是现代中成药研究发展急待解决的问题。笔者认为，有以下几个方面应该加以重视和强调。     

短期香烟烟雾及脂多糖气道刺激对小鼠气道免疫细胞的影响

目的：探讨香烟烟雾及脂多糖（LPS）短期刺激对小鼠气道免疫细胞的影响。方法：LPS组小鼠气管内（一次性）滴注10 μg LPS，熏烟组小鼠每天熏9支香烟持续熏4 d，观测不同干预措施对小鼠体重的影响；检测支气管肺泡灌洗液(BALF)总细胞数及细胞分类计数，观察细胞形态，并利用PDB（2-丁酸佛波醇酯）诱导BALF中的细胞检测ROS产出率；荧光定量PCR法检测肺组织中GM-CSF和CXCL15 mRNA 表达。结果：与实验前相比，对照组及LPS组小鼠体重未见明显变化（P>0.05），熏烟组小鼠体重减少了189%，其变化差异明显高于对照组和LPS组（P<0.01）。与对照组相比，熏烟组小鼠气道灌洗液细胞总数和各类细胞总数均无明显变化（P>0.05）；LPS组小鼠气道灌洗液细胞总数、巨噬细胞计数和中性粒细胞计数均高于对照组和熏烟组（P<0.01），且LPS组灌洗液巨噬细胞体积较大，形态不规则，中性粒细胞胞核分叶较对照组多。LPS组小鼠气道灌洗液细胞在PDB的诱导下及没有PDB的诱导下均比对照组和熏烟组具有更高ROS产出率（P<0.01）。与对照组相比，LPS组小鼠肺组织中GM-CSF表达显著增高（P<0.01），但CXCL-15和熏烟组小鼠肺组织中GM-CSF及CXCL-15的表达并未发生改变（P>0.05）。结论：短期香烟烟雾刺激明显引起小鼠体重下降，但未能诱发明显气道炎症反应；10 μg LPS气道滴注可通过增加肺组织GM-CSF的表达，增加中性粒细胞的成熟和募集，增加中性粒细胞内氧化应激反应及产生ROS的能力，诱发明显气道炎症反应。     

健脾益肺Ⅱ号方对烟草烟雾暴露联合脂多糖气道滴注诱导大鼠膈肌损伤的影响

目的探讨健脾益肺Ⅱ号方对烟草烟雾暴露联合脂多糖(LPS)气道滴注大鼠膈肌的保护作用及其机制。方法 58只8周龄SD大鼠,根据出生时间均衡分配为正常组、模型组、健脾益肺Ⅱ号高剂量组[20 g/(kg·d)]、健脾益肺Ⅱ号低剂量组[10 g/(kg·d)]。模型组及药物干预组给予熏烟12周,并于熏烟第7、21天分别滴注200μL LPS。正常组暴露于空气,气道滴注生理盐水。用药组于第9周开始灌胃给药,正常组及模型组给予相应生理盐水灌胃,至第12周。记录并比较大鼠体重变化;HE染色方法观察肺部病理和膈肌病理改变;检测跨膈压和膈肌肌电;免疫组化法观察膈肌中Bax表达;通过qPCR方法检测泛素蛋白酶体通路C2蛋白亚基、E2/14k、MRuf-1、MAFbx mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体重增长较少(P0.01),单位视野内肺泡个数减少(P0.01),跨膈压增高(P0.05),膈肌炎症细胞浸润增多,Bax蛋白表达和MRuf-1 mRNA表达增多(P0.01);与模型组比较,健脾益肺Ⅱ号高、低剂量组大鼠体重增长未见增加(P0.05),健脾益肺Ⅱ号高剂量组大鼠肺泡数量明显增多,跨膈压明显降低(P0.05);膈肌纤维间炎症细胞的浸润减少;膈肌组织中Bax的蛋白表达减少(P0.01);健脾益肺Ⅱ号高、低剂量组膈肌组织中泛素E3连接酶MRuf-1的mRNA表达降低(P0.01)。结论健脾益肺Ⅱ号方可减少膈肌细胞凋亡,其机制可能与减轻模型大鼠肺泡扩张程度和胸腔压力,减少膈肌炎症浸润和抑制泛素—蛋白酶体通路的激活有关。     

健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合脂多糖诱导大鼠炎症因子及金属蛋白酶表达的影响

[目的]通过观察健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合脂多糖诱导的大鼠肺组织基质转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素(IL-8)表达的影响,以探讨健脾益肺Ⅱ号协调气道损伤、修复平衡以及减少气道重构的作用机制,从而阐明该方防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道损伤的可能作用机制。[方法]将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、健脾益肺Ⅱ号低剂量组、健脾益肺Ⅱ号高剂量组、泼尼松组。以熏烟联合脂多糖(LPS)的方法建立大鼠肺部损伤模型,给予相应药物干预,观察记录大鼠一般状况,至实验结束,采用免疫组化法比较各组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1的表达水平,采用ELISA法检测大鼠肺组织及血清中TGF-β1的水平变化以及肺组织中TNF-α和IL-8水平的变化。[结果]模型组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1以及MMP-9/TIMP-1的相对表达明显高于正常对照组(P0.05或P0.01);健脾益肺Ⅱ号高剂量组和泼尼松组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1以及MMP-9/TIMP-1的相对表达明显低于模型组(P0.05或P0.01);模型组大鼠肺组织及血液中TNF-α、IL-8、TGF-β1含量均比正常对照组显著升高(P0.01),各给药组经过药物的干预后,其含量明显降低(P0.01或P0.05)。[结论]健脾益肺Ⅱ号方可通过降低模型动物肺组织MMP-9/TIMP-1相对表达量,下调血清中TGF-β1的水平,降低肺组织中TGF-β、TNF-α和IL-8的释放水平,减少肺组织反复的损伤与修复过程,从而起到减缓气道重构的作用。     

石菖蒲活性成分对双转基因小鼠APP及神经突触超微结构的影响

目的　探讨石菖蒲活性部位β-细辛醚和丁香酚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)表达及神经突触超微结构的影响。方法　3月龄SPF级雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠12只,随机分为4组:模型组、安理申(以安理申为阳性对照药)组、β-细辛醚组及丁香酚组,每组3只,用同龄同背景APPswe/PS1dE9转基因阴性小鼠3只作为正常对照组。用药4个月后,免疫组织化学染色方法检测大脑内海马及皮层APP表达水平,并采用透射电子显微镜观察海马CA1区神经元及神经突触的超微结构的变化。结果　模型组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比较正常对照组显著增加(P < 0.01)。与模型组比较,安理申组和β-细辛醚组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01);丁香酚组皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01)。透射电子显微镜观察,与正常对照组比较,模型组小鼠海马CA1区神经元神经毡内突触结构表现为大片的轴浆空泡化,突触数量减少,突触界面变短或融合消失,突触小泡数量明显减少,突触前膜、后膜及突触间隙大多模糊不清,突触后成分致密区厚度变薄,典型的突触结构已遭破坏,部分线粒体有轻微破损。安理申组、β-细辛醚组及丁香酚组小鼠海马CA1区神经突触结构与正常对照组比较无明显差异,与模型组比较在细胞器结构、轴浆空泡化、突触数量、突触界面、突触小泡数量及突触结构上均有不同程度的改善。结论　β-细辛醚及丁香酚可以抑制APP的过量表达,对与学习记忆密切相关的突触有一定的保护和修复作用。     

上消化道疾病患儿156例胃镜检查结果分析

随着社会环境和饮食结构的变化,患上消化道疾病的儿童在临床上屡见不鲜.由于消化内镜的广泛应用,儿童患者上消化道疾病的确诊率逐年增加.笔者对156例上消化道疾病患儿胃镜检查的临床资料进行回顾性分析.现报告如下.     

“培土生金”中医理论溯源及治疗慢性阻塞性肺疾病的古籍文献研究

目的:梳理培土生金治法的中医理论源流及其治疗慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)的古代证据。方法:以《中华医典》为检索源,查找培土生金相关的古籍条文,挖掘"培土生金"治法的中医理论和本质内涵。建立慢阻肺条文相似度评分规则,筛选古籍条文,提炼培土生金法治疗慢阻肺的古代证据,揭示培土生金法治疗慢阻肺的历史地位。结果:培土生金思想根源于五行学说,《黄帝内经》五行相生理论奠定其理论基础。秦汉至金元时期,理论渐趋成熟,衍生甘凉、甘温、甘平培土生金等治法;明清时期,培土生金理论得到升华,形成成熟的治则治法。古籍证据提示慢阻肺脏腑传变模式以肺脾传变最为常见,病机以肺脾两虚为核心。茯苓、人参、半夏、陈皮、白术为培土生金治疗慢阻肺的核心药物,异功散、六君子汤和补中益气汤则是培土生金代表性方药。结论:培土生金治法历史悠久,具有深厚的理论基础与临床价值。古代采用培土生金法治疗慢阻肺有据可循,并发挥了重要的作用。