Culture of motor neurons from newborn rat spinal cord

A protocol for the isolation, purification and culture of motor neurons from newborn rat spinal cord was described and the effect of glial cell line-derived neurotrophic factor （GDNF） on the growth of neurite of motor neurons was investigated in vitro. Spinal motor neurons （SMNs） were dissociated from ventral spinal cord of postnatal day 1 rats. The culture system for SMNs was established by density gradient centrifugation, differential adhesion, and use of serum-free defined media and addition of exogenous GDNF. After 72-h culture, the cells displayed the characteristic morphology of motor neurons, exhibited extensive neuritic processes and were positive for choline acetyl- transferase （CHAT） expression. The neurite length of SMNs in GDNF groups was significantly longer than that in control group （P〈0.05）. This protocol can be adapted for various postnatal motor neurons studies.     

大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子及其受体的表达变化

为了研究大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脊髓前角神经元中的表达变化,以正常大鼠为对照,运用RT-PCR技术检测大鼠体神经-内脏神经吻合术后不同时间脊髓腰4(L4)前角神经元中BDNF及TrkB mRNA的表达变化。结果显示,在正常大鼠L4前角神经元中,BDNF及TrkB的mRNA均存在一定水平的表达;体神经-内脏神经吻合术后7d、14d、1m和2m,BDNF和TrkBm RNA的表达均升高,术后7d达到高峰,14d开始下降;2m时BD-NF mRNA的表达量仍显著高于正常组(P<0.01),而TrkB mRNA的表达量到2m时虽仍高,但与正常组相比,其差异已无统计学意义(P>0.05)。上述结果表明,大鼠体神经-内脏神经反射弧建立后,脊髓L4前角神经元的内源性BDNF及其受体TrkB的表达均增高,它们可能作为保护性因子有利于受损神经元的存活和再生。     

脐带悬吊延期修补治疗巨型脐膨出

目的 探讨脐带悬吊延期修补腹壁缺损治疗巨型脐膨出的临床效果.方法 设计脐带悬吊囊膜、逐渐收紧囊膜还纳膨出内脏器官的方法治疗10例巨型脐膨出,对其治疗过程和临床效果作回顾性总结.结果10例开始悬吊的平均日龄1 d(1～2 d),悬吊平均时间21.7 d(15～37 d).10例均一次手术修补缺损,2例同时行Ladd术.术后2例出现腹壁切口疝,1例出现呼吸困难,行呼吸机辅助通气3d后好转.术后开始进食时间3 d(2～6 d),正常喂养进食平均时间7 d(5～10 d).结论脐带悬吊延期修补治疗巨型脐膨出具有治疗简单、经济、一次手术完成,同时具有Silo袋法及保守疗法的优点,临床效果较好.     

腹腔镜输尿管输尿管端侧吻合术在小儿重复肾中的应用

目的 探讨腹腔镜输尿管输尿管端侧吻合术治疗小儿重复肾的安全性和有效性。方法 回顾性分析2020年6月～2021年12月9例重复肾上组肾积水行腹腔镜输尿管输尿管端侧吻合术的临床资料。年龄3个月～8岁(中位年龄7个月)。左侧6例，右侧2例，1例双侧重复肾伴左侧上组肾积水。2例术前检查提示上组肾对应输尿管异位开口于阴道或膀胱颈部，6例伴输尿管末端膨出。先行膀胱镜检查及患侧下组肾输尿管内双J管置入，于下组肾输尿管远端行腹腔镜输尿管输尿管端侧吻合。结果 9例均顺利完成腹腔镜手术，无中转开放手术。术中无并发症，术中出血量<10 ml。手术时间180～240(202.2±21.1)min。住院时间7～10(8.5±0.9)d。术后4～6周拔除双J管，2例双J管留置期间尿路感染。9例术后随访6～21(11.7±5.1)月，复查超声均提示上组肾积水较前减轻，7例上组肾扩张的输尿管直径较前缩小。一例8岁女性患儿术前输尿管异位开口存在尿失禁，术后症状完全消失。结论 初步经验表明腹腔镜输尿管输尿管端侧吻合术对小儿重复肾是一种安全、有效的术式选择。     

毛蕊异黄酮的体外转运研究及对多药耐药基因MDR1表达的影响

目的：研究毛蕊异黄酮在体外模型Caco-2细胞单层模型的转运特征及其对多药耐药基因MDR1表达的影响。方法：采用MTT法确定毛蕊异黄酮对Caco-2细胞模型作用的安全浓度范围;考察浓度、pH、温度及P-gp抑制剂(维拉帕米)和能量代谢抑制剂(叠氮化钠)对毛蕊异黄酮转运的影响;抑制多药耐药基因MDR1对毛蕊异黄酮转运的影响。结果：从顶侧(AP)到底侧(BL)(AP→BL),毛蕊异黄酮的P_app＞10_?6cm/s,表明其吸收性良好;毛蕊异黄酮的转运与其浓度和时间呈正相关,4℃下毛蕊异黄酮的P_app与37、25℃下的Papp有显著差异,pH=9时的P_app与pH=5、7.4时的P_app值也有明显差异(p＜0.01)。毛蕊异黄酮的转运不受MDR1基因的影响;叠毛蕊异黄酮的P_appBL→AP/P_appAP→BL＜1.5不受能量代谢异常的影响。结论：毛蕊异黄酮在Caco-2细胞模型的转运方式为被动扩散,且不受P-gp和能量代谢的影响,低温和碱性环境下不利于药物的吸收。     

单纯性低位脊柱裂与MTHFR基因C677T及A1298C多态位点的相关性研究

目的 研究N5' N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因第4外显子C677T及第7外显子A1298C突变在汉族先天性单纯性低位脊柱裂(spina bifida,SB)患者及其家庭中的多态性分布和致病相关性.方法 应用限制性片段长度多态聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对69名低位脊柱裂患者,93名患者双亲,及129名健康人的C677T/A1298C多态性进行分析及部分测序鉴定.结果 脊柱裂患者组,双亲组,对照组两两之间的TT或AA的基因型频率差别无统计学意义(P值均大于0.05),T及A的等位基因频率的差别也没有统计学意义(P值均大于0.05).结论 MTHFR基因C677T和A1298C突变可能不是单纯性低位脊柱裂的独立遗传致病因素,单纯性低位脊柱裂作为表型轻微的神经管畸形(neural tube defects,NTDs),遗传病因可能与其他NTDs不同.     

大鼠脊髓前角与盆神经节之间植块联合培养的实验研究

目的:联合培养大鼠脊髓前角与盆神经节( major pelvic ganglia,MPG )植块并初步探讨两者相互作用的可能性?方法:建立大鼠脊髓前角与盆神经节之间植块的联合培养体系,观察神经元的生长变化?结果:神经组织在体外联合培养时均生长良好,脊髓前角植块生长出的运动神经元(spinal motor neurons,SMNs)发出突起与盆神经节的神经元形成明显形态上的接触?结论:联合培养的不同系统的神经元能彼此形成明显接触,初步提示运动神经元与盆神经节神经元之间可能形成功能性的相互作用?     

单纯性低位脊柱裂与MTHFR基因C677T多态位点的相关性研究

目的:研究N5'N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因第4外显子C677T突变在汉族先天性单纯性低位脊柱裂(SB)患者及其家庭中的多态性分布和致病相关性。方法:应用限制性片段长度多态聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对69名低位脊柱裂患者、93名患者双亲及129名健康人的C677T多态性进行分析及部分测序鉴定。结果:脊柱裂患者、双亲、对照组两两之间的TT基因型频率差异无统计学意义(P>0.05),T等位基因频率的差异也没有统计学意义(P>0.05)。结论:MTHFR基因第4外显子的C677T突变可能不是单纯性低位脊柱裂的独立遗传致病因素,单纯性低位脊柱裂作为表型轻微的神经管畸形(neural tube defects,NTDs),遗传病因可能与其他NTDs不同。     

大鼠体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合术后BDNF及TrkB的表达变化

目的 研究大鼠体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合术后神经再生过程中,脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脊髓前角运动神经元中的表达,比较两者有无差异,探讨相关因子在异类神经元再生过程中所起的作用.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型对照组.建立大鼠体神经-内脏神经吻合(模型组)及体神经-体神经吻合(模型对照组)模型,运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常对照组、模型组和模型对照组术后7、14、30、60 d脊髓腰4(L4)运动神经元中BDNF及TrkB mRNA的表达.结果 在正常大鼠L4前角运动神经元中,BDNF及其受体TrkB均存在一定水平的表达.大鼠体神经-内脏神经吻合术后7、14、30、60 d BDNF和TrkB mRNA表达均升高,于术后7 d达峰值,14 d开始下降.大鼠体神经-体神经吻合术后BDNF和TrkB mRNA的表达水平逐渐增高,于术后14 d达峰值.结论 大鼠体神经-内脏神经反射弧建立后脊髓L4前角运动神经元BDNF及TrkB的表达增高,BDNF及TrkB作为内源性保护性因子,其增高可能有利于受损神经元的存活和再生.大鼠体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合术后BDNF及TrkB上调趋势存在一定的差异.