重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆和表达

目的：克隆人KGF-2基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：通过PCR扩增，从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF-2的cDNA，并将其分别克隆入pBV220，pLEX和pGEX4T-1质粒中，研究其在不同表达质粒和大肠杆菌中的表达情况。结果：克隆得到的KGF-2cDNA经测序证明与文献报道的序列一致。将其克隆于pBV220质粒中，在E．coli JM109中表达量相对最高，约占茵体总蛋白的4％；克隆于pLEX质粒中，在E．coli G1724中的表达量约占全茵总蛋白的5％；克隆于pGEX4T-1中，在E．coli JM109中的表达量可占到全茵总蛋白的20％。结论：采用GST融合蛋白表达质粒pGEX4T-1对KGF-2进行表达，较pBV220和pLEX具有明显优势，能实现对KGF-2的高效表达，为进一步的功能研究奠定了基础。     

体外胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞生长的抑制作用

目的 观察胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞的影响及其对胰岛素样生长因子的调节作用。方法 MTT比色法观察IGFBP-1及与IGF-1预混后对脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)生长影响。结果 IGFBP-1对内皮细胞ECV304的生长具有抑制作用且与剂量成正比；预混后各组IGF-1促细胞生长作用明显被抑制。结论 IGFBP-1既可以直接也可以通过调节IGF-1抑制血管内皮细胞生长。     

输血后丙型肝炎病毒非结构区抗体和丙氨酸转氨酶的动态分析

利用重组的丙型肝炎病毒非结构区（ＨＣＶＮＳ５）抗原建立了酶免疫试验（ＥＩＡ），对２５例输血后丙型肝炎进行了不同区抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的动态研究，同时对１５６例慢性丙型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ和抗－ＮＳ５平行检测，两者符合率为６４．１％。抗－ＮＳ５抗体首次检出时间为３０～５７５天（１８２．９±１６８．５），晚于ＡＬＴ异常和其他区抗体的出现时间。在感染后１，３，６，１２和２４个月后抗－ＮＳ５的阳性率分别为２８％，４０％，５２％，６８％和７６％。抗－ＮＳ５的动态变化类型为四种：一过性阳性、间歇性阳性、持续性阳性和２年内持续阴性     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建？…

目的 建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法 用重组ＨＣＶ ＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果 融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２     

胆管癌相关基因FXYD6的克隆及功能区定位

目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为＋1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

血管生成素在COS-7细胞中的表达及其生物活性研究

本研究旨在实现血管生成素（ANG）在真核细胞中的表达并探讨其生物学功能。通过RT—PCR获得ang基因，构建真核表达载体pcDNA3．1-ang，在转染COS-7细胞后进行瞬时表达，通过Western blot对表达产物进行鉴定。利用MTT法分析表达上清对ECV304细胞的促增殖作用，同时利用鸡胚分析表达上清的促血管生成作用。结果表明：瞬时转染后细胞培养上清中有重组ANG的表达，并能与抗-ANG单克隆抗体发生特异性反应。与转染空载体的对照相比．转染pcDNA3．1-ang的细胞培养上清具有促进ECV304细胞增殖的作用，并能显著促进鸡胚尿囊膜血管生长。结论：ang可在COS-7细胞中瞬时表达，其表达产物具有显著的促细胞增殖和促进血管生成的作用。     

磷脂转运蛋白在毕赤酵母中的高效表达

为深入了解磷脂转运蛋白的结构和功能，从中国人胎肝组织总RNA成功克隆了磷脂转运蛋白成熟肽基因，所得磷脂转运蛋白基因通过同源重组整合至毕酵母细胞染色体的氧化酶AOX1基因中，甲醇诱导后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示诱导表达蛋白分子量约为75kDa，薄层扫描显示表达蛋白中酵母蛋白总量的28%，为大量制备重组磷脂转运蛋白奠定了基础。     

抗Glycophorin A单链抗体基因的构建及酵母表达研究

目的　制备人红细胞表面血型糖蛋白A单链抗体。方法　从可分泌抗人红细胞表面血型糖蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞中 ,分别扩增出编码其轻、重链可变区基因的cDNA ,通过连接序列组建单链抗体基因 ,将该基因导入毕赤酵母中 ,筛选工程菌株。结果　构建了抗GPA单链抗体基因 ,获得了分泌型表达单链抗体的毕赤酵母菌株 ,工程菌株可表达 30kD蛋白 ,ELASA证明其具有与GPA特异结合活性。结论　该单链抗体保留了亲本抗体的活性 ,为研制红细胞抗体快速诊断试剂奠定了基础     

A/H1N1流感的流行特点及防治

2009年3月底至今,墨西哥、美国等地接连暴发新型A/H1N1流感病毒(早期也称为猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)疫情,已造成超过177人死亡,不但放缓了全球经济复苏的脚步,更为严重的是造成越来越多的人面临死亡的威胁,并引起了人们对新型流感病毒的巨大恐慌.本文对A/H1N1型流感的概况、公共卫生等方面进行阐述,使人们对流感病毒有一定的认识,在提高自我保护意识的同时去除不必要的担心.