抗Glycophorin A单链抗体基因的构建及酵母表达研究

目的　制备人红细胞表面血型糖蛋白A单链抗体。方法　从可分泌抗人红细胞表面血型糖蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞中 ,分别扩增出编码其轻、重链可变区基因的cDNA ,通过连接序列组建单链抗体基因 ,将该基因导入毕赤酵母中 ,筛选工程菌株。结果　构建了抗GPA单链抗体基因 ,获得了分泌型表达单链抗体的毕赤酵母菌株 ,工程菌株可表达 30kD蛋白 ,ELASA证明其具有与GPA特异结合活性。结论　该单链抗体保留了亲本抗体的活性 ,为研制红细胞抗体快速诊断试剂奠定了基础     

磷脂转运蛋白在毕赤酵母中的高效表达

为深入了解磷脂转运蛋白的结构和功能，从中国人胎肝组织总RNA成功克隆了磷脂转运蛋白成熟肽基因，所得磷脂转运蛋白基因通过同源重组整合至毕酵母细胞染色体的氧化酶AOX1基因中，甲醇诱导后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示诱导表达蛋白分子量约为75kDa，薄层扫描显示表达蛋白中酵母蛋白总量的28%，为大量制备重组磷脂转运蛋白奠定了基础。     

北京地区哮喘儿童特异性IgE和TRPVl／2mRNA表达水平分析

目的探讨TRPVl和TRPV2基因表达水平与北京地区儿童哮喘的关系。方法实时定量PCR方法检测38例健康儿童,46例哮喘儿童外周血淋巴细胞中TRPVl和TRPV2mRNA表达水平差异。免疫印迹法定量检测总IgE水平,尘螨、春季花粉、秋季花粉、蟑螂和猫狗毛、真菌等特异性TgE水平,对检测结果进行多因素lo~stic回归分析。结果健康和哮喘组儿童TRPVl和TRPV2的mRNA表达水平差畀有统计学意义（P〈0．01）,真菌特异性IgE表达水平差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TRPVl和TRPV2基因表达水平升高可能是北京地区儿童哮喘发病酌危险圆素。     

输血后丙型肝炎病毒血症,抗体及转氨酶动态研究

对１０例输血后丙型肝炎进行了病毒血症、抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）动态研究。用套式ＰＣＲ法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，首次检出时间为输血后１５～８７天，平均４０．３±２０．１天，持续或间歇阳性超过１年者７例。抗ＨＣＶＣ１００．Ｎ１４、Ｐ２２和ＳｃＮＳ３／４和５抗体首次阳转时间分别为输血后３３～４３７（１１９．７±１１９．５）天、５２～１６６（７７．９±３５．６）天、３３～１０３（５５．０±２３．８）天和３３～６６（４０．１±１３．５）天，该４种抗体阳转后都持续１年以上。ＡＬＴ首次异常时间为输血后１５～６０天，平均３７．９±１３．９天，异常超过１年者６例。     

血管生成素在COS-7细胞中的表达及其生物活性研究

本研究旨在实现血管生成素（ANG）在真核细胞中的表达并探讨其生物学功能。通过RT—PCR获得ang基因，构建真核表达载体pcDNA3．1-ang，在转染COS-7细胞后进行瞬时表达，通过Western blot对表达产物进行鉴定。利用MTT法分析表达上清对ECV304细胞的促增殖作用，同时利用鸡胚分析表达上清的促血管生成作用。结果表明：瞬时转染后细胞培养上清中有重组ANG的表达，并能与抗-ANG单克隆抗体发生特异性反应。与转染空载体的对照相比．转染pcDNA3．1-ang的细胞培养上清具有促进ECV304细胞增殖的作用，并能显著促进鸡胚尿囊膜血管生长。结论：ang可在COS-7细胞中瞬时表达，其表达产物具有显著的促细胞增殖和促进血管生成的作用。     

外周血中BAFF、BAFF-R及Bcl-xL的表达与B细胞非霍奇金淋巴瘤疾病进展的相关性研究

目的研究B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血B cell-activating factor(BAFF)、其受体BAFF-R及Bcl-xL基因的表达,探讨其与B-NHL疾病进展的相关性。方法应用实时荧光定量PCR法检测36例B-NHL患者外周血单个核细胞(PBMC)BAFF、BAFF-R、Bcl-xL mRNAs的相对表达水平,以7例健康献血员作为对照,并据性别、淋巴瘤国际预后指数(IPI)、年龄、临床分期、是否耐药进行分组比较。结果 B-NHL患者PBMC BAFF、BAFF-R及Bcl-xL的mRNAs表达较正常对照组显著升高(P<0.05),Ⅲ/Ⅳ期高于Ⅰ/Ⅱ期,耐药B-NHL组高于非耐药组(P<0.05)。结论外周血单个核细胞BAFF、BAFF-R、Bcl-xL mRNAs的表达水平与B-NHL临床分期有关,在耐药B-NHL外周血中明显升高,提示BAFF/BAFF-R介导的信号通路可能参与B-NHL的临床进展及耐药机制。     

血管生成素通过ERK信号通路促进HeLa细胞的增殖

目的通过细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路及NF-кB信号途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖及抗凋亡作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,MTT法分析Ang对HeLa细胞的促增殖作用,蛋白质印迹实验检测ERK信号通路相关分子的表达情况。U0126抑制ERK信号通路,检测Ang诱导的ERK1/2的磷酸化及c-myc的表达情况,同时检测Ang对细胞增殖的影响。敲低Ang的表达,检测细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因检测Ang对NF-κB报告基因的激活。蛋白水平检测Ang刺激的HeLa细胞后,NF-κB通路相关分子的表达。结果 Ang能促进HeLa细胞增殖,ERK1/2的磷酸化水平及c-myc的表达随重组人Ang浓度的升高而增加。U0126能抑制Ang诱导的ERK1/2的磷酸化、c-myc的上调及细胞的增殖。Ang的低表达促进HeLa细胞的凋亡,但不影响NF-κB报告基因的激活及NF-κB通路上相关分子的表达。结论 Ang能够促进HeLa细胞增殖,并通过活化ERK通路促进细胞的增殖,但其抑凋亡作用与NF-κB通路无关。     

血管生成素的研究进展

血管生成素(angiogenin,ANG)最初是从肿瘤细胞中发现的一种碱性多肽调节因子,可以有效地促进内皮细胞(EC)的增殖、分化和迁移,介导细胞间的黏附以形成新的微血管管腔,血管生成素具有低核糖核酸酶活性,是胰腺核糖核酸酶超家族成员;外源ANG作用于血管内皮细胞的方式有两种:一种是通过经典的胞内信号系统;另外,ANG还可以由自身的核定位序列引导进入细胞核发挥作用。ANG参与多种生理和病理变化,在胚胎发生、子宫内膜变化、创伤愈合以及肿瘤的形成和发展、糖尿病等多种疾病中发挥重要的作用。