凝胶染色扫描法快速定量冬虫夏草中蛋白质方法的初步研究

目的：建立一种冬虫夏草蛋白质含量快速测定方法,弥补Bradford法不足,为研究过程中快速准确定量蛋白质奠定基础。方法本研究用牛血清蛋白（bovine serum albumin,BSA）作为已知浓度的定量标准,用它来计算其它带的量。根据Quantity One来降低图像噪音和背景强度,并确定泳道,定义带并建立光密度与已知浓度的定量标准蛋白线性关系,通过每个带的光密度定量计算凝胶上每个带的质量。结果本实验所建立的凝胶染色扫描法能够较为快速、简便、准确地测定冬虫夏草蛋白含量。结论凝胶染色扫描法用于蛋白质定量,准确度、精密度、重复性均符合要求,为测定方法的进一步完善奠定了基础。     

冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析

目的:观察冬虫夏草蛋白提取物(OSPE)对肺癌细胞A549的抑制作用,研究其对免疫功能的影响。方法:以OSPE低、中、高质量浓度(100,200,500 mg·L~(-1))处理A549细胞24 h;以200 mg·L~(-1)OSPE分别处理A549细胞12,24,48,72 h噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达。利用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒,检测不同质量浓度OSPE对巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL~(-1)),白细胞介素-12(IL~(-1)2)的影响。结果:OSPE具有明显抑制A549细胞活力的作用,OSPE(100,200,500 mg·L~(-1))组抑制率分别为19.29%,58.70%,94.91%;200 mg·L~(-1)OSPE处理A549细胞(12~72 h),抑制率呈时间依赖性;Hoechst染色后,细胞呈现典型的凋亡形态变化,流式细胞检测凋亡率显示,200 mg·L~(-1)OSPE呈现时间依赖性地增加A549细胞凋亡率(P0.01);Real-time PCR结果显示OSPE明显上调Bax mRNA表达量,Bcl-2/Bax显著减小(P0.01)。ELISA检测结果显示,OSPE对正常巨噬细胞TNF-α,IL~(-1),IL~(-1)2具有显著促进分泌作用(P0.01)。结论:OSPE可通过上调Bax诱导凋亡,抑制A549细胞增殖;也可促进正常巨噬细胞分泌因子TNF-α,IL~(-1),IL~(-1)2的分泌,推测OSPE可通过诱导凋亡和激活免疫2种方式抑制肿瘤。     

冬虫夏草资源管理法规探讨

通过对国内冬虫夏草资源管理现状的分析,尤其是对各地冬虫夏草管理法规现状的分析,总结出现行法规的优势与不足,为我国冬虫夏草管理法规的修订奠定了基础。结合草场生态保护,冬虫夏草生长特点,提出了冬虫夏草的可持续采集方案,以更好地实现冬虫夏草资源的可持续利用,实现草场与冬虫夏草协调可持续发展。     

冬虫夏草及其混淆品HPLC指纹图谱研究及共有成分鉴定

目的建立冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,为冬虫夏草的真伪鉴别及质量评价提供依据。方法采用HPLC法建立冬虫夏草及其主要混淆品(凉山虫草、古尼虫草、蛹虫草)水溶性成分的指纹图谱,标记了16个共有峰,并通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)技术对指纹图谱中16个共有峰进行鉴定。结果建立了冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,该方法能区分冬虫夏草及其混淆品,鉴定出其中12个共有峰,分别为胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤+鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷和虫草素。结论该方法简便易行,为冬虫夏草的真伪鉴别提供了科学依据。     

低氘白酒对糖尿病大鼠糖代谢和胰岛细胞及其功能的影响

目的 探讨低氘白酒干预对糖尿病大鼠空腹血糖水平和胰岛细胞及其功能的影响.方法 一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病Wistar大鼠模型,根据干预方式的不同将糖尿病大鼠分为模型组（生理盐水灌胃,饮用普通水）、低氘水组（低氘水灌胃,饮用低氘水）、普通白酒组[1个单位（低量）或6个单位（高量）白酒＋蒸馏水灌胃,饮用普通水）、低氘白酒组（低量或高量白酒＋低氘水灌胃,饮用低氘水）,每组10只;以10只未造模大鼠作为正常对照组（生理盐水灌胃,饮用普通水）;各组大鼠每日灌胃液体量均为0.01 mL/g.于干预后4周末,各组大鼠经眼眶静脉采集血样后颈椎脱臼处死,摘除并制备胰腺组织标本.葡萄糖氧化酶法和放射免疫分析法分别测定空腹血糖和胰岛素水平;胰腺组织标本HE染色观察各组大鼠胰岛组织病理学改变.结果 空腹血糖水平,普通白酒高量组〉模型组＞普通白酒低量组〉低氘白酒高量组〉低氘水组〉低氘白酒低量组,其中低氘水组和低氘白酒低量组与其他各组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.空腹胰岛素水平,低氘白酒低量组〉低氘白酒高量组〉普通白酒低量组〉低氘水组〉普通白酒高量组〉模型组;除普通白酒高量组外,其余各组均显著高于模型组（P〈0.05）.胰岛组织学观察显示,与正常对照组比较,模型组和普通白酒组大鼠的胰岛细胞数量减少、体积增大、胞质呈空泡状,细胞排列紊乱,低氘水组和低氘白酒组胰岛细胞受损程度较轻.结论 低氘白酒干预能显著降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平,提高血浆胰岛素水平;减轻因过量饮酒导致的胰岛细胞损伤.     

低氘白酒对糖尿病大鼠糖代谢和胰岛细胞及其功能的影响

目的 探讨低氘白酒干预对糖尿病大鼠空腹血糖水平和胰岛细胞及其功能的影响。方法 一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病Wistar大鼠模型,根据干预方式的不同将糖尿病大鼠分为模型组（生理盐水灌胃,饮用普通水）、低氘水组（低氘水灌胃,饮用低氘水）、普通白酒组\[1个单位（低量）或6个单位（高量）白酒+蒸馏水灌胃,饮用普通水）、低氘白酒组(低量或高量白酒+低氘水灌胃,饮用低氘水）,每组10只;以10只未造模大鼠作为正常对照组（生理盐水灌胃,饮用普通水）;各组大鼠每日灌胃液体量均为0.01 mL/g。于干预后4周末,各组大鼠经眼眶静脉采集血样后颈椎脱臼处死,摘除并制备胰腺组织标本。葡萄糖氧化酶法和放射免疫分析法分别测定空腹血糖和胰岛素水平;胰腺组织标本HE染色观察各组大鼠胰岛组织病理学改变。结果 空腹血糖水平,普通白酒高量组>模型组＞普通白酒低量组>低氘白酒高量组>低氘水组>低氘白酒低量组,其中低氘水组和低氘白酒低量组与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空腹胰岛素水平,低氘白酒低量组>低氘白酒高量组>普通白酒低量组>低氘水组>普通白酒高量组>模型组;除普通白酒高量组外,其余各组均显著高于模型组（P<0.05）。胰岛组织学观察显示,与正常对照组比较,模型组和普通白酒组大鼠的胰岛细胞数量减少、体积增大、胞质呈空泡状,细胞排列紊乱,低氘水组和低氘白酒组胰岛细胞受损程度较轻。结论 低氘白酒干预能显著降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平,提高血浆胰岛素水平;减轻因过量饮酒导致的胰岛细胞损伤。     

碱裂解法快速提取虫草属真菌DNA研究

目的探索一种适用于虫草属基因组DNA快速提取的方法。方法在无液氮条件下使用碱裂解法提取虫草DNA,使用ITS通用引物进行PCR扩增。考察了提取液配方、煮沸时间对DNA提取的影响以及中和剂Tris-HCl用量对PCR扩增的影响。利用优化的提取方法提取了虫草属5种虫草并用ITS通用引物进行PCR扩增。结果 80μl 0.5 mol/L Na OH进行提取,加入160μl 0.1 mol/L Tris-HCl中和,离心即可在10min内提取出虫草属真菌的DNA,PCR扩增能获得清晰目的条带。结论优化的碱裂解法可用于虫草属DNA的快速提取。     

双向电泳技术筛选鉴定冬虫夏草中指标性蛋白质研究

对名贵中药材冬虫夏草及其伪品建立稳定可靠的双向电泳鉴定方法。正品冬虫夏草中共同表达的蛋白质斑点为88个,伪品稳定差异表达的蛋白质斑点为21个,提示可作为下一步冬虫夏草鉴定的指标性组分。进一步质谱分析与NCBI数据库比对表明:6种蛋白仅来自于菌数据库,9种蛋白仅来自于昆虫数据库,12种蛋白仅来自于全库,3种蛋白昆虫和菌的数据库均能检索,1种蛋白仅来自于菌数据库和全库,提示下一步可进行冬虫夏草指标性蛋白质功能研究,为冬虫夏草有效成分研究奠定基础。     

低氘白酒对人体脑电图和心理功能的作用

目的研究连续8天摄入低剂量或高剂量酒精、普通白酒和低氘白酒对人体脑电图上的alpha波相对功率值、alpha衰减系数（AAC）、主观感觉和血液中5一羟色胺含量的影响,探讨低氘白酒对人体中枢神经功能的影响并分析其可能的机制。方法11名平均年龄为23．7±1．3岁的健康成年男性参加本实验。实验期间受试者分别饮用低剂量酒精、高剂量酒精、低剂量白酒、高剂量白酒、低剂量低氘白酒和高剂量低氘白酒。30min后检测脑电图,并计算d衰减系数（alphaattenuationcoefficient,AAC）和alpha相对功率值,用视觉模拟评分法（visualanaloguescale,VAS）测试受试者的舒适感和工作效率,作为主观评价的指标,同时采血样用于5-羟色胺含量的分析。结果 α衰减系数结果显示,饮用高剂量酒精后AAC升高,其他组未见明显改变。与对照组相比,α波的平均功率值在饮用高、低剂量的酒精和白酒后均有明显下降,而饮用低氘白酒后α波的平均功率值未见明显下降,且比酒精和白酒组高,表明饮用酒精和白酒能使α波活动减少,而低氘白酒无此不良反应。血浆5-羟色胺的分析结果表明,饮用低剂量低氘白酒时血浆内的5-羟色胺水平最高,说明低氘白酒能引起人大脑的舒适感升高。结论饮用酒精和普通白酒能使人体脑电图上的α平均功率值下降,人体的舒适感和工作效率降低,而低氘白酒能使人体的α波相对功率值、舒适感、工作效率和5-羟色胺的含量都维持在较高的水平上,即饮用低氘白酒时,人体中枢神经的功能可维持在较为平衡稳定的水平上,避免调控的失衡的发生。     

低氘白酒对人体心率变异性和自主神经的调控作用

目的研究连续8 d急性摄入不同剂量自制酒精饮料、传统白酒和低氘白酒对人体心率变异性(HRV)和自主神经调控作用。方法 11例健康成年男性志愿者,体质量(64.7±4.5)kg,年龄21~25岁,平均年龄23.7岁。分为7个试验组,1本底(对照)(CK组),不饮用任何含酒精饮品;2低剂量酒精(A-L组),每天饮用50 m L 52度自制酒精+200 m L普通饮用水;3高剂量酒精(A-H组),每天饮用100 m L 52度自制酒精+200 m L普通饮用水;4低剂量白酒(L-L组),每天饮用50 m L52度泸州老窖特曲+200 m L普通饮用水;5高剂量白酒(L-H组),每天饮用100 m L 52度泸州老窖特曲+200 m L普通饮用水;6低剂量低氘白酒(DDL-L组),每天饮用50 m L 52度泸州老窖特曲+200 m L低氘水;7高剂量低氘白酒(DDL-H组),每天饮用100 m L 52度泸州老窖特曲+200 m L低氘水。连续8 d。用心动周期信号(HPS)分析系统检测饮酒半小时后受试者的HRV,以评价交感神经和副交感神经系统活动。结果饮用自制酒精饮料和传统白酒使自主神经的交感神经活性及迷走神经活性变化,以交感神经活性升高最为突出活性。饮用低氘白酒后未见有交感和迷走神经活性的明显变化,即HRV的波动。结论相对于自制酒精饮料和传统白酒,低氘白酒能使人体自主神经协调和平衡性维持在较高水平。